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1、电泳的分类方法1.根据有无支持物区带电泳自由电泳纸电泳醋酸纤维素薄膜电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳2.根据电压的高低低电压电泳高电压电泳3.根据区带形式盘状电泳火箭电泳等电泳的分类方法4.根据支持物的形状薄层电泳平板电泳圆盘电泳毛细管电泳水平平板电泳垂直平板电泳电泳的分类方法5.根据用途分析电泳制备电泳定量免疫电泳影响电泳结果的因素五点一一.样品的性质样品的性质 根据被分离颗粒点电荷的多少、分子的大小、形状影响电泳的速度、电泳速度与颗粒带电荷的多少成正比，与分子量大小成反比，球形的分子要比纤维状的分子泳动速度快。二二.电场强度电场强度 电场强度时每厘米的电位降，亦即电势梯度。电场强度越高

2、，带电质点移动速度越快。三三.缓冲液冲液 缓冲液能使电泳中的支持介质保持稳定的pH，并通过它的组成成分、浓度等因素影响着颗粒的迁移率。（1.）pH 溶液的pH决定带电颗粒解离程度，是颗粒带有静电荷多少的决定因素。对蛋白质、氨基酸等两性电解质来说，缓冲液的pH距等电点（pI）越远，所带净电荷就越多，电泳速度也越快；反之则慢。因此，但分离蛋白质溶液时，应选择一个合适的pH，是各种蛋白质所带静电荷的差异量增大，以利于分离。（2.）成分 通常采用的是甲酸盐、乙酸盐、柠檬盐、磷酸盐、巴比妥盐和三羟甲基氨基甲烷-乙二胺基四乙酸缓冲液等。要求缓冲液的物质性能稳定，不易点解（3.）浓度 缓冲液的浓度可用摩尔浓

3、度或离子强度表示。离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰，如果过低，缓冲液的缓冲量小，难以维持pH的恒定，离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰，如果过高，除了使得电泳速度过慢，还会因为离子强度增加使电泳时的电流变大，增加热量的产生，引起温度的改变，这对电泳是不利的。所以对缓冲液离子强度的选择，必须两者兼顾，一般是在0.020.2mol/L之间。缓冲液冲液工作溶液工作溶液贮存液（存液（1000ml1000ml）Tris-乙酸（TAE）10.04mol/LTris-乙酸0.001mol/L EDTA50242g Tris 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0

4、）Tris-磷酸（TPE）10.09mol/LTris-磷酸0.002mol/L EDTA50108g Tris 15.5ml 85%磷酸 （1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）Tris-硼酸（TBE）0.50.045mol/LTris-硼酸0.001mol/L EDTA554g Tris 27.5g硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）常用缓冲液配方表：四四.支持介质支持介质 支持介质要求是应具有较大惰性的材料，且不与被分离的样品或缓冲液起化学反应。此外，还要求具有一定的坚韧度，不易断裂，容易保存。五五.温度温度 电泳时电流通过介质会产生热

5、量，按焦耳定律，电流通过导体时的产热与电力强度的平方、导体的电阻和通电的时间成正比（Q=I2Rt）.产生热量对电泳技术是不利的，因为产热可促使支持介质上溶剂的蒸发，而影响缓冲溶液的离子强度。为降低热效应对电泳的影响，可控制电压或电流，也可在电泳系统中安装冷却散热装置。对高压电泳必须增设冷却系统，以防样品在电泳时变性。纸电泳和醋酸纤维素电泳纸电泳和醋酸纤维素电泳纸电泳纸电泳是利用纸作为支持物，使带电微粒在纸上电泳，从而达到分离的一种方法。方法方法：将样品点在用缓冲液浸湿的滤纸上，将滤纸放在电泳槽的支架上，滤纸的两端浸在缓冲溶液里，接通电源，纸的两端就有一定的压，吸引带电颗粒在纸上移动。纸电泳原理

6、图纸电泳原理图电泳缓冲液选择电泳缓冲液选择滤纸选择滤纸选择：取色谱滤纸置1mol/L甲酸溶液中浸泡过夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60烘箱烘干并在距长度方向一端58cm处划一起始线，每隔2.53cm处做一记号备点样用点样点样 有湿点法和干点法有湿点法和干点法湿点法湿点法 是将裁好的滤纸全部浸入枸橼酸盐缓冲液（pH3.0）中，湿润后，取出，用滤纸吸干多余的缓冲液，置电泳槽架上，使起始线靠近阴极端，将滤纸两端浸入缓冲液中，然后用微量注射器精密点加供试品溶液，每点10l,共3点，并留2个空白位置。干点法干点法 是将供试品溶液点于滤纸上，吹干、再点，反复数次直至点完规定量的供试品溶液

7、，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处最后喷湿，本法适用于稀的供试品溶液醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物，使带电微粒在薄膜上电泳。该薄膜是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中。可涂布成均一层细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm0.15mm为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。纤维素凝胶电泳原理图纤维素凝胶装置图 醋酸纤维薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥溶液作缓冲液，其浓度为0.05mol/L0.09mol/L。选择何种浓度与样品及薄膜的薄厚有关。选择时，先初步定下某一浓度，如电泳槽两极之间的膜长度为8 cm10c

8、m，则需电压25V/cm膜长，电流强度为0.4mA/cm0.5mA/cm膜宽。当电泳达不到或超过这个值时，则应增加缓冲液浓度或进行稀释。缓冲液浓度过低，则区带泳动速度快，并由于扩散变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢，区带分布过于集中不易分辨缓冲液的选择染色染色：其原则是染料对被分离样品有较强的着色力，背景易脱色；应尽量采用水溶性染料，不宜选择醇溶性染料，以免引起醋酸纤维素膜溶解。醋酸纤维薄膜的预处理醋酸纤维薄膜的预处理：由于醋酸纤维薄膜亲水性比纸小，浸泡30min以上是保证膜片上有一定量的缓冲液，并使其恢复到原来多孔的网状结构琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法

9、。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用，其分辨率范围0.2-50kb，利用脉冲电泳，可分离高达107bp的DNA片段。琼脂糖由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖组成。琼脂糖浓度与待测DNA大小范围关系优缺点优点优点琼脂糖含液体量大，可达琼脂糖含液体量大，可达98%-99%,98%-99%,近似自由电泳，但近似自由电泳，但液体的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附极微液体的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附极微琼脂糖电泳分辨率高，重复性好琼脂糖电泳分辨率高，重复性好电泳速度快，大约半小时电泳速度快，大约半小时透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外线检测仪作定透

10、明而不吸收紫外线，可以直接用紫外线检测仪作定量量区带可染色，样品易回收区带可染色，样品易回收缺点缺点琼脂糖中有较多硫酸根，电渗作用大琼脂糖中有较多硫酸根，电渗作用大影响因素常用的缓冲液有常用的缓冲液有TAETAE和和TBETBE，而，而TBETBE比比TAETAE有着更好的缓有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pHpH值上升，缓冲性能下降，可能使值上升，缓冲性能下降，可能使DNADNA电泳产生条带模电泳产生条带模糊和不规则的糊和不规则的

11、DNADNA带迁移的现象。带迁移的现象。嵌入染料嵌入染料 ：荧光染料溴化乙锭（EB）用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。电泳温度电泳温度 ：DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4与30之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4条件下电泳PAGEPAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）（聚丙烯酰胺凝胶电泳）定义：聚丙烯酰胺凝胶是由单体定义：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺丙烯酰胺（Acr）（Acr）和交联剂和交联剂N,N-N,

12、N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺（Bis）（Bis）在加速剂在加速剂N N，N N，N N，N N 四甲四甲基乙二胺基乙二胺（TEMED）（TEMED）和催化剂和催化剂过硫酸铵过硫酸铵（AP）（AP）或核黄素的作用下或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）（PAGE）。主要用于蛋白质和核苷酸的检测鉴定和分离纯化主要用于蛋白质和核苷酸的检测鉴定和分离纯化丙烯酰胺丙烯酰胺（Acr）（Acr）：别名名AMAM，纯品品为白色白色结晶固体，易溶于水、晶固体，易溶于水、甲

13、醇、乙醇、丙醇，稍溶于乙酸乙甲醇、乙醇、丙醇，稍溶于乙酸乙酯、氯仿，微溶于仿，微溶于苯。对眼睛和皮眼睛和皮肤有一定的刺激作用，可有一定的刺激作用，可经皮皮肤、呼吸道和消化道、呼吸道和消化道吸收，在体吸收，在体内有蓄有蓄积作用，主要影作用，主要影响神神经系系统。N,N-N,N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺（Bis）（Bis）：为白色或白色或浅黄色粉末色粉末状结晶晶 ,毒毒性低性低 ,对皮皮肤无刺激无刺激 ,无神无神经毒性毒性 ,溶于水及乙醇、丙溶于水及乙醇、丙酮等等有机溶有机溶剂。其。其结构中具有中具有两个相同且非常活相同且非常活泼的反的反应性官能性官能团 ,可作可作为交交联剂 ,能能将线性高分

14、子迅速性高分子迅速转变为体型高分子体型高分子 N N，N N，N N，N N 四甲基乙二胺四甲基乙二胺（TEMED）（TEMED）：分子式为分子式为（CH3）2NCH2CH2N（CH3）2（CH3）2NCH2CH2N（CH3）2，分子量为分子量为116.20116.20。用于配制用于配制PAGEPAGE胶等。通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯胶等。通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。酰胺的聚合。易燃，有腐易燃，有腐蚀性，性，请注意防注意防护。过硫酸铵过硫酸铵（AP）（AP）：一一种白色、无味晶体，常作强白色、无味晶体，常作强氧化化剂使用，也使用，也可用作可

15、用作单体聚合引体聚合引发剂。提供。提供驱动丙丙烯酰胺和和双丙丙烯酰胺聚合聚合所必需的自由基。所必需的自由基。须新新鲜配制配制。基本聚丙烯酰胺凝胶制作试剂：试剂：1 1、3030丙烯酰胺：丙烯酰胺丙烯酰胺：丙烯酰胺29g29g，N N，N-N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺1g1g，加水到加水到100ml100ml，加热至，加热至3737溶解，室温避光保存，存贮期溶解，室温避光保存，存贮期 间溶液间溶液pHpH值应值应7.07.0。2 2、样品缓冲液、样品缓冲液 A A：5 5TBETBE缓冲液（缓冲液（pH8.3pH8.3）:54gTris:54gTris碱碱 27.5g 27.5g硼酸硼酸 20ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）20ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）或或3.722gEDTA3.722gEDTA固