常见缓冲溶液配制Word下载.docx

1、4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2）10TE Buffer （pH7.4, 7.6, 8.0）100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M TrisHCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） 100ml 500mM EDTA（PH8.0） 20ml 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。3）1.5 M

2、Tris-HCl （pH8.8）1.5 M Tris-HCl1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。4）3 M 醋酸钠（pH5.2）3M 醋酸钠 100ml1.称量40.8g NaAc3H2O（或者24.6g无水 NaAc）置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5）PBS Buffer137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO41. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaC

3、l 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6）10 M 醋酸铵 10 M 醋酸铵100 ml1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温

4、保存。醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7）苯酚/氯仿/异戊醇 （25 : 24 : 1）1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 1）。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8）10 （W/V） SDS10 （W/V）SDS1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。

5、9）2 N NaOH2 N NaOH1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10）2.5 N HCl2.5 N HCl1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N），均匀混合。2. 室温保存。11）5 M NaCl5 M NaCl1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2

6、. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4保存。11）20 （W/V） Glucose20 （W/V） Glucose1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。12）Solution I（质粒提取用）25 mM Tris-HCl（pH8.0）, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose1M Tris-HCl（PH8.0） 25ml 0.5M EDTA（PH8.0） 20Glucose（1.11M） 45ml dH2O 910ml 2. 高温高压灭菌后，4保存。3. 使用前每50 ml的Sol

7、ution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml）。13）Solution II（质粒提取用）200mM NaOH，1（W/V）SDS500ml1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中 10 SDS 50ml2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀 3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14）Solution III（质粒提取用）3 M KOAc, 5 M CH3COOH500 ml1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc147gCH3COOH 57.5ml 2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3.

8、加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4保存。15）0.5 M EDTA（pH8.0）0.5 M EDTA称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH）。pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16）1 M DTT1 M DTT20 ml1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2），溶解后使用0

9、.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20保存。17）10 mM ATP 10 mM ATP1. 称取121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.2

10、2um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水

11、定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/

12、L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl