初始污染菌检验规程文档格式.docx

1、菌数/件次二平均菌数x稀释倍数/件次。阴性对照试验：将使用的0.9%无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中， 注入培养基，凝固，倒置培养。制备2个平板均不得有菌生长。3、 注意事项：1） 在无菌操作台上做试验，防止坏境对样品的再次污染，采取一切措施防 止人为对样本的污染。2） 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正 面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉 淀的区别，必要时用显微镜鉴别。编制：审核：批准:ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进 的小包装（接触手套的小包装）的监

2、测。第一个月每周进行一次监测，如果监 测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季 度一次。2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消 毒。3生物负载测定方法A.1概要A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。负责进行测定的人员应运用 原材料、部件、生产环境、生产过程和产品的特性方面的知识为每一步选择适 当的方法。A.1.2图A.1给出了生物负载测定程序主要步骤和顺序。建议负责人员在决 定取样率、培养基范围和培养条件以及方法开发和确认水平时要根据情况而

3、定。样品选择试验样品的收集送人实验室处理（如果需要 TREATMENT TEBHNIQUES移人培养基培养计数和定性数据解释图1 生物负载测定程序主要步骤和顺序A.2获取微生物所用方法A.2.1概要A.2.1.1本附录中所述的几种方法可以组合使用，以便增加所发现生物体的 数量和降低可变性。A.2.1.2微生物在表面附着的程度受表面特性、微生物自身和存在的其他材 料（如润滑剂）的影响。污染源也会影响到附着程度。为获取微生物，所进行的处 理包括漂洗或直接表面取样。表面活性剂可以用于提高回收，但应认识到，较 高浓度的表面活性剂可能会抑制微生物。A.2.1.3在相当一部分材料中，有些微生物可能以生物膜

4、的形式出现，在生 物膜的结构中，微生物在牢固附着于材料表面上的被囊状包围。生物膜状微生 物可能会表现更强的抗灭菌性。生物膜可以在数分钟年形成，而且可能在与组 织附和或已经使用过的医疗器械上生长出大得多的生物膜。在这种情况下，就 应考虑生物膜形成的可能性，而且也不应认为A.2.2中列出的处理方法能完全将 微生物从生物膜中释放出来。在对获取技术进行确认时，如果在重复回收过程 中重复记录到较高的微生物数，则表明有生物膜出现。A.2.1.4在生物负载估计中所用的任何处理都应具有重现性，并应避免会明 显影响微生物活性的条件，如过分空化、剪切力、温度升高或渗透震动。 A.2.1.5有些处理方法要比其他一些

5、方法易于控制。在选择方法和设计适宜的变 量组合时，建议考虑方法中的变量和控制这些变量的途径。例如，对一给定的 方法，可以通过延长时间或调整机械搅动的特性来增加微生物的回收。A.2.1.6有些处理方法可能会分解待测产品（例如碎解、袋蠕动和涡旋）。分解 的材料会给微生物计数造成困难，这时则需要进行其他处理，如将分解的材料 从洗提液中分离出来。应注意保证所得到的计数具有代表性。A.2.1.7应尽力尽快将试验样品移至试验室。如果必须要推迟转送，试验样 品的保存条件应能避免微生物的丢失或改变。应规定贮存的最长时间。干燥可 能是微生物数量减少的重要原因，所以在选择贮存条件和贮存时间时应加以考 虑A.2.2

6、获取方法A.2.2.1袋蠕动A.2.2.1.1将试验样品和一已知体积的洗脱液包封于一无菌胃型袋中开动往 复式搅拌，使洗脱液穿过并坏绕试验样品。A.2.2.1.2应规定处理的时间长度。A.2.2.1.3该方法因为使用了相对大量的洗脱液，所以可能会生成微生物浓 度较低的悬浮液。如可行，洗脱液应予过滤处理。A.2.2.2搅动（机械或手工）A.2.2.2.1将试验样品浸于装有已知体积洗脱液的适宜器皿中，并用机械搅 拌器（往复式、环绕式或手腕作用式）进行搅动。也可使用手工搅动，但其效力会 因操作人员而异。A.2.2.2.2应规定搅动的时间和频率。A.2.2.2.3可以加人一定大小的玻璃珠来增加表面磨损以

7、提高回收效率玻璃 珠的大小以及搅动频率和时间不应导致过热和/或对微生物造成破坏。注：加人玻璃珠会增加微生物可附着的表面积。A.2.2.4 冲洗A.2.2.4.1让洗脱液通过试验样品的内腔。可以靠重力或泵来使液体流动。 另外还可将洗脱液充人产品中，夹住并抖动。A.2.2.4.2应规定器械与洗提液的接触时间、冲洗速度和液体体积。A.2.2.4.3设备结构和内腔大小可能限制从表面彻底取下生物体所需的力的 大小。A.2.2.5搅切（碎解）A.2.2.5.1将试验样品浸于装有已知体积洗提液的适宜容器中。在规定的时 间内进行搅切。A.2.2.5.2搅切时间取决于试验样品和搅切器，但不宜过热，以免会引起洗

8、脱液过热和对微生物造成破坏。A.2.2.5.3该方法能将试验样品分割成足够小，以便能用适当的方法对微生 物计数。A.2.2.6 擦拭A.2.2.6.1含有可吸收取样材料的棉拭子通常被固定于杆或把手上。样品材 料可以是也可以不是可溶性的。A.2.2.7.2通常的使用方法是用缓冲液或液体培养基湿润棉拭，用棉拭擦拭 界定好的取样表面。在有些情况下，可以先湿润样品表面，然后用干棉拭擦拭，这样可以提高 回收效率。随后将棉拭放至缓冲溶液或液体培养基中，并搅动以从棉拭上取下 微生物。另外，有时也可用可溶性棉拭，使棉拭溶解于缓冲液。A.2.2.6.3拭擦是从不规则形状产品或相对难以接近的区域取样的有效方 法，

9、该方法对取样面积必须大时也有效。A.2.2.7.4但该方法因擦拭方式的不同而更易出错。而且，通过擦拭不太可 能将样品上所有的微生物都收集到。有些微生物可能会被棉拭本身吸附，从而 不会被测到。A.2.2.6.5棉拭中不应有微生物杀灭剂或微生物抑制剂。A.2.3洗脱液、稀释液和转送培养基A.2.3.1在生物负载估计过程中，洗脱液可用于从产品上取下微生物;传送培 养基可用于将取下的微生物移去计数;稀释液可用于获得含有可计数微生物的悬 液。A.2.3.2洗脱液和稀释液的特性对所用方法的效率有显著影响。在选择稀释 液或洗提液时，应注意它们的成分（如组成、浓度、渗透性和pH）这些成分不应 使微生物增殖或失

10、活。A.2.3.3当用液体从固体表面取下微生物时，可考虑使用表面活化剂。A.2.3.4常用的洗脱液和稀释液见表A.lo表A.1-洗脱液的稀释液示例溶液水屮的浓度应用缓冲的蛋白月东水溶液Auffered peptone water0,067 M磷酸phosphate0,43 %氢氧化钠 sodium Bhloride0,1%蛋白月东peptone通用林格氏溶液Balgon Ringerl/4强度溶解藻酸钙棉拭Dissolution of BalBium alginate swaAs蛋白腺水溶液Peptone water0,l%-l,0%通用磷酸盐缓冲盐水溶液 Phosphate Auffered

11、 saline0,02 M 磷酸 phosphate0,9 % 氢氧化钠sodium Bhloride通用林格氏溶液Ringerl/4强度通用氯化钠溶液 Sodium Bhloride0,25 % - 0,9 %通用硫代硫酸盐林格氏溶液Thiosulphate Ringerl/4强度屮和残留氯Neutralization of residual Bhlorine水WaterNA水稀释含水样品Dilution of aqueous samples计数前制备可溶材料Preparation of isotoniB solutions ofsoluAle materials prior to Boun

12、ting注:本表并不是全都包括的。表面活化剂如聚山梨醉醋（吐温.80）可以加人洗 提液和稀释液中。根据具体的应用，通常使用的浓度在0.01%-0.1%之间。应使 用适当浓度的表面活性剂，并加以特殊处理以防止泡沫形成。A.3非洗提方法A.3.1接触板A.3.1.1接触板或玻璃片可用于将凝固的培养基放在样品表面上，使存活微 生物能附着在培养基表面，然后再培养接触板或玻璃片，至形成可以计数的菌 落。A.3.1.2该系统的优点在于易于使用，结果与凝固的培养基的接触表面直接 相关。A.3.1.3表面上天然集聚的细胞群、菌落在琼脂介面散布、琼脂干燥、可能 存在的厌氧菌等都是潜在的不利因素。A.3.1.4由

13、于该方法的效率普遍较低，所以只有在其他方法都不适用的情况 下使用接触板和玻璃片一般只适用于平的或至少是规则的表面。A.3.2琼脂覆盖A.3.2.1当生物负载低和在产品构型适宜时，在产品表面涂上熔化的琼脂培 养基（最高温度在45B）,培养至生成可见菌落。当生物负载低以及产品构型适宜 时，适用本方法。A.3.2.2表面上天然集聚的细胞群、菌落在琼脂介面散布、琼脂干燥、可能 存在的厌氧菌等都是潜在的不利因素。A.3.3连续稀释的最大可能数（MPN）法A.3.3.1 MPN法，是业已建立并且充分文件化的用于估测产品上随机分布的 活性微生物数量的方法。其主要应用为使用液体、粉体和半固体产品或原材料 的食

14、品和水工业。MPN法特别适用于生物负载平均值低的产品。A.3.3.2如果具有足够多的洗脱液，可将其一系列的稀释液接种于营养培养 基中，使接种的培养基部分在随后的培养中不产生可见生长。用表现出生长的 稀释度，用统计学方法来估计微生物的原始数量。目前利用统计学假设已经设 计出了 MPN表格，可查表直接估计出微生物的最可能数目（MPN）oA.3.3.3 MPN法易于操作，但是可以使用的培养条件范围则很有限，而且因 该方法是基于统计学，所以它更适于一般性评价而不是精确测定。A.3.3.4如果存在杀灭微生物或抑制微生物的物质,可考虑A.8部分所列述 的内容。A.4移至培养基A.4.1 总贝 IJA.4.1.1经过处理后，通常在洗脱液中会生成微生物悬液，可用如下所描述 的方法检查其中的存活微生物数。A.4.1.2在移人培养基之前，还可能必须进行额外的处理，以便将聚集的微 生物分解开来，以降低变异。在有些情况下，从试验样品中取下微生物的方法 也会分解这种聚集。A.4.1.3如果洗脱液中有杀灭微生物或抑制微生物的物质，这可以通过稀释 将其浓度降至无效，或通过过滤或化学中和法来去除。因为，杀灭微生物或抑 制微生物的物质可能会影响计数