食物中毒的判别及检验_精品文档PPT课件下载推荐.ppt

1、是进食被细菌或细菌毒素污染的食物而引起的感染性或中毒性疾病。细菌性肠道传染病（霍乱、痢疾、伤寒副伤寒等）短期内集中发病常被诊断为细菌性食物中毒散发或潜伏期较长病例常被诊断为胃肠炎或其他疾病细菌性与非细菌性食物中毒区别细菌性食物中毒非细菌性食物中毒病原体细菌动物性，化学物质，原因不明中毒原因主要为动物性食品特殊食品或误食有毒成分活菌或肠毒素特殊毒素或毒物潜伏期1-24h（肉毒1-5d）快速，甚至仅数分钟临床特点多伴有发热，胃肠炎（除肉毒）胃肠炎症状，常伴神经、血液系统症状预后良好不及时治疗，预后差治疗一般可用抗生素（除肉毒）促排，及时给予特效解毒剂预防防止污染，控制繁殖，彻底杀灭加强宣教，防止误

2、食细菌性食物中毒的特点细菌性食物中毒的特点与饮食有密切关系，去除原因食品后，不再有新的患者。临床症状以急性胃肠炎为主，基本相同。短时期内多人发病，无人传染人的现象。中毒发生与不同区域人群饮食习惯有密切关系。与季节相关。细菌繁殖条件及人体防御机能。发病率高，病死率较低、恢复快、多数预后良好 细菌性食源性疾病的流行病学传染源：被病原菌感染的动物或人传播途径：通过进食被细菌或其毒素污染的食物人群易感性：普遍，无病后免疫力，可重复感染流行特征：夏秋季高发；病例可散发或爆发流行；发病急，时间集中，潜伏期短；有共同进餐史；症状轻重与进食量有关。细菌性食物中毒还是病毒性食物中毒？细菌性食物中毒：WBC增加，

3、中性粒细胞增加；病毒性食物中毒：淋巴细胞和单核细胞增高根据流病资料、病例的三间分布，与患者临床表现、病患血常规检查结果：1.病患有共同进餐史；2.病例潜伏期最短为5小时，最长为47小时。中位数为13小时，具有明显的时间聚集性；3.案例皆来自于学校，具有地点聚集性；4.呕吐或24h内腹泻3次及以上，恶心、腹痛、（典型的胃肠炎临床症状）发热等临床症状；5.病患血常规检测共收集了140人的血常规结果，白细胞升高占28%，中性粒细胞升高占61%。部分病例碱性磷酸酶升高。判断为细菌性食物中毒判断为细菌性食物中毒。由于患者主要临床表现为头痛头晕、腹痛、腹泻（黄色水样便）、呕吐、恶心、乏力等症状，部分病例低

4、热等，初步怀疑为患者感染的可疑菌可能为以下几种。病原菌临床症状特征食品标本沙门菌多数起病急骤，畏寒发热，体温一般3839，伴有恶心、呕吐，腹痛恶心、呕吐，腹痛，腹泻，大便每日腹泻，大便每日35次至数十次不等次至数十次不等，大便常为水样大便常为水样禽、蛋、肉（交叉污染的进口物）食品：血清分型培养病例：血清分型培养食品加工者：粪便、血清培养 副溶血弧菌腹痛、呕吐、腹泻及水样便水样便等症状。海产品食品病例 埃希氏大肠菌产毒大肠杆菌水样腹泻水样腹泻、腹痛、恶心、低热。每天腹泻可达812次。生蔬菜食品：定性培养和血清分型病例：粪便培养、血清分型和肠毒素产生；侵袭性试验。侵袭性大肠杆菌发热、剧烈腹痛、水样

5、腹泻水样腹泻、粪便中有少量粘液和血。沙拉，水，奶酪。肠出血性大肠杆菌（E.coli O157:H7和其它）不典型不典型一般310天发病，常有突发性的腹部痉挛，有时类似于阑尾炎的疼痛。有的病人只有轻度腹泻；有些病人由水样便水样便，转为血性腹泻，牛肉，生奶 志贺菌属起病急起病急，发热、腹痛发热、腹痛、脓血便、水样水样便便并有中度全身中毒症状。被感染的操作者污染食品，通常不是食物传染的食品：粪培养和血清分型病例操作者：粪便培养和血清分型产气荚膜梭菌腹痛、腹泻，多为水样便水样便，一般无脓血便，可伴有头痛、无力及发热。肉、禽类食品：肠毒素检测，定性培养和血清分型小肠结肠炎耶尔森氏菌发热、腹痛、水样腹泻水

6、样腹泻、呕吐、呕吐、关节炎、败血症、胃肠炎症状、胃肠炎症状、发热、亦可引起阑尾炎。被感染的人或低等动物污染的食品冷藏食品食品：定性培养操作者：粪便培养动物：粪便，生病动物的尸检材料培养霍乱弧菌（症状与）上吐下泻，泻出物呈“米米泔水样泔水样”并含大量弧菌 感染者污染的食物或从污染的环境获得食品：血清分型病例：血清分型蜡样芽孢杆菌骤起腹痛、腹泻、腹痛、腹泻、水样便水样便，恶心，呕吐较少，少数患者有发热。调味酱、米粉、布丁、香肠、肉块食品：定性培养病例：粪便培养金黄色葡萄球菌呕吐、发热、腹泻、黄绿色糊状便；重症呈暗绿色暗绿色水样便海水样便水样便海水样便。粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜。火腿肉片

7、调味酱奶油食品：肠毒素检测 食品加工者：培养鼻孔、皮肤病变 病人：粪便、呕吐物 细菌性食物中毒实验室应急检测程序 初步筛查直接涂片检查分离培养检验1.增菌培养、平板分离培养2.快速检验（PCR）3.全面生化检验与血清学检验 直接涂片取新鲜病患的粪便标本涂片，空气自然干燥后火焰上加热固定，革兰氏染色镜检。若镜检有鱼群状排列弧菌，可怀疑为霍乱弧菌。增菌培养 需氧菌增菌培养基 7.5%NaCl肉汤 金黄色葡萄球菌 葡萄糖肉浸液肉汤 溶血性链球菌 TTB、SC增菌液 沙门氏菌 志贺氏菌增菌液 志贺氏菌 3.5%NaCl APW 副溶血性弧菌 肠道菌增菌液 EC 病原性大肠埃希氏菌 厌氧菌增菌 庖肉培养

8、基 产气荚膜梭菌、肉毒梭菌 直接平板培养 将处理后的检样直接接种于各种平板培养基上 需氧培养 普通琼脂平板 蜡样芽孢杆菌及其他未知菌 血平板 葡萄球菌、链球菌、蜡样芽孢杆菌 伊红美蓝培养基 大肠埃希氏菌、变形杆菌 麦康凯培养基 大肠埃希氏菌、变形杆菌 HE、SS培养基 沙门氏菌、志贺氏菌TCBS培养基 副溶血性弧菌厌氧培养葡萄糖血琼脂平板 产气荚膜梭菌、肉毒梭菌CCDA 空肠弯曲菌 快速检测：PCR用上述方法培养的增菌液1mL8000r/min离心5min50LDNA提取液1.5mL无菌离心管12000r/min离心5min吸弃上清液沸水浴5min取上清液保存于-20备用以待检测，-70可长期

9、保存PCR扩增细菌模板DNA提取PCR扩增1.设置对照空白对照阴性对照阳性对照蒸馏水非目标菌的DNA含有检测序列的DNA或质粒PCR扩增2.反应体系根据不同待测菌选择相对应引物与反应参数PCR扩增扩增产物电泳检测1.用电泳缓冲液制备1.8%-2%琼脂糖凝胶，55-60时加入溴化乙锭至终浓度为0.5g/mL2.取8-15LPCR扩增产物，分别与2L上样缓冲液混合进行点样，用DNA分子量标记物做参照。3.3V/cm-5V/cm恒压电泳20-40min后用凝胶成像分析系统记录保存。PCR结果判定若阴性对照与空白对照未出现条带，阳性对照出现预期大小的扩增条带，待测样品未出现相应大小扩增条带，则报告为检

10、验结果阴性。若待测样品出现相应大小扩增条带可判定结果为假定阳性，此时用传统检测步骤进行确认，最终结果以后者检测结果为准。传统手工鉴定1.分离分别用接种环取上述沙门菌增菌液1 环，划线接种于一个BS 琼脂平板和一个XLD 琼脂平板（或HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。XLD 琼脂平板、HE 琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板于36 1 分别培养18 h24，BS 琼脂平板培养40 h48 h。观察平板上的菌落特征。传统手工鉴定2.生化反应2.1自选择性琼脂平板上分别挑取2 个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和

11、营养琼脂平板，于36 1 培养18 h24 h，必要时可延长至48 h。观察菌落特征。初步生化:三糖铁（TSI）现象说 明底层黄色葡萄糖阳性红色或不变色葡萄糖阴性黑色产H2S气泡产气斜面黄色乳糖和（或）蔗糖阳性红色或不变色乳糖和（或）蔗糖阴性传统手工鉴定2.2、接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 1 培养18 h24 h，必要时可延长至48 h，按下表判定结果。将已挑菌落的平板储存于2 5 或室温至少保留24 h，以备必要时复查。传统手工

12、鉴定2.3 初步生化结果判定反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶3 项中有1项异常，按表4 可判定为沙门氏菌。如有2 项异常为非沙门氏菌。传统手工鉴定2.3初步生化结果判定反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3：补做ONPG*。ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。（*：邻硝基酚-D-半乳糖苷溶液试验：将待检培养物接种3%氯化钠三糖铁琼脂，36 1 培养18 h。挑取1 满环新鲜培养物接种于0.25 mL 3%氯化钠溶液，在

13、通风橱中，滴加1 滴甲苯，摇匀后置37 水浴5 min。加0.25 mL ONPG 溶液，36 1 培养观察24 h。阳性结果呈黄色。阴性结果则24 h 不变色。）传统手工鉴定3.血清学鉴定3.1多价菌体抗原（O）与多价鞭毛抗原（H）鉴定在玻片上划出2 个约1 cm2 cm 的区域，挑取1 环待测菌，各放1/2 环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1 滴多价菌体（O）抗血清或多价鞭毛（H）抗血清，在另一区域下部加入1 滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。传统手

14、工鉴定3.2血清学分型用抗血清对所分离菌种的菌体O抗原、表面Vi抗原、第I相和第II相H抗原进行凝集试验用AF 多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。多价抗血清凝集后再用分别代表每个O血清群的单价因子血清定群。再按照确定的O群，分别用H因子血清检测第I相和第II相H抗原，综合O、H以及Vi因子血清检查结果，判断沙门氏菌的血清型。关于收集到的病患的检验一：粪便一：粪便粪便常规：病患粪便标本：在接收到的病患粪便标本之后，进行粪便常规检查，并且对其增菌培养后进行病原学检查 目的：粪便常规检查是为了查看WBC、RBC,有无隐血，是否为侵袭性的。在显微检查的时候也可看有无可疑虫卵或可疑菌（若为霍乱弧菌则可在图片上看到逗号状鱼群样排列的菌群）；做增菌分离培养是为了做病原学检查，看有无沙门菌、志贺菌、蜡样芽孢杆菌等（实验室内细菌的常规检查）。二：病患的呕吐物标本呕吐物常规检查：接收到标本后做涂片检查、隐血实验和增菌分离培养 目的：涂片检查是为了检查有无可疑虫卵，隐血实验是为了检查是否有上消化道出