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1、（二）增殖缓慢性（二）增殖缓慢性二，干细胞的生物学特征二，干细胞的生物学特征2.过渡放大细胞：过渡放大细胞：过渡放大细胞过渡放大细胞（transit amplify cell，TA cell）是介于是介于干细胞和分化细胞之间的过渡细胞，过渡放大细胞经若干细胞和分化细胞之间的过渡细胞，过渡放大细胞经若干次分裂产生分化细胞。干次分裂产生分化细胞。通过这种方式，机体可用较少干细胞获得较多分化细胞。3干细胞增殖缓慢的意义：干细胞增殖缓慢的意义：（1）利于干细胞对外界信号作出反应，以决定细胞的利于干细胞对外界信号作出反应，以决定细胞的发展方向发展方向增殖或分化。增殖或分化。（2）减少基因突变的危险。增殖

2、缓慢使干细胞有时间减少基因突变的危险。增殖缓慢使干细胞有时间发现并纠正处于增殖周期过程中的错误。发现并纠正处于增殖周期过程中的错误。（三）分化特征：干细胞能够产生至少一种类型的高度分化的子代细胞。干细胞的功能为控制和维持细胞的再生。增殖增殖分化分化二，干细胞的生物学特征二，干细胞的生物学特征根据分化潜能：根据分化潜能：全能干细胞全能干细胞（totipotent stem cell,TSC）：具有形成完整个体：具有形成完整个体的分化潜能，如胚胎干细胞，受精卵就是最高层次的胚胎的分化潜能，如胚胎干细胞，受精卵就是最高层次的胚胎干细胞。干细胞。多能干细胞多能干细胞（pluripotent stem

3、cell）：具有分化出多种细胞：具有分化出多种细胞组织的潜能，如造血干细胞、神经细胞。一种或几种组织组织的潜能，如造血干细胞、神经细胞。一种或几种组织的起源细胞，它能分化出多种类型细胞，但不可能分化出的起源细胞，它能分化出多种类型细胞，但不可能分化出足以构成完整个体的所有细胞。足以构成完整个体的所有细胞。单能干细胞单能干细胞（unipotent stem cell）：只能向一种或两种密切：只能向一种或两种密切相关的细胞类型分化，如上皮组织基底层的干细胞，肌肉相关的细胞类型分化，如上皮组织基底层的干细胞，肌肉中的成肌细胞。中的成肌细胞。三，干细胞的分类三，干细胞的分类根据发育阶段：根据发育阶段：

4、三，干细胞的分类三，干细胞的分类胚胎干细胞胚胎干细胞（embryonic stem cell）：具有分化具有分化为机体任何一种组织器官潜能的细胞。为机体任何一种组织器官潜能的细胞。成体干细胞成体干细胞（somatic stem cell）：由胚胎干细由胚胎干细胞分化形成的，只能分化为相应组织器官内胞分化形成的，只能分化为相应组织器官内的功能细胞。的功能细胞。一，胚胎干细胞定义一，胚胎干细胞定义胚胎干细胞胚胎干细胞（embryonic stem cell，简称，简称ES细胞）是细胞）是从着床前从着床前胚胎内细胞团胚胎内细胞团或或原始生殖细胞原始生殖细胞经体外分化抑经体外分化抑制培养分离的一种全能

5、性细胞系，可以分化成任何一制培养分离的一种全能性细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。种组织类型的细胞。胚胎干细胞具有全能性，能够分化成全身胚胎干细胞具有全能性，能够分化成全身200200多种细多种细胞类型，进一步形成机体的任何组织和器官。胞类型，进一步形成机体的任何组织和器官。二，胚胎干细胞的特征二，胚胎干细胞的特征形态特征形态特征 体积小、核大，有一个或多个核仁；胚胎干细胞体积小、核大，有一个或多个核仁；胚胎干细胞克隆紧密堆积，无明显的界限，克隆紧密堆积，无明显的界限，形似鸟巢形似鸟巢。生化特征生化特征 碱性磷酸酶呈强阳性；碱性磷酸酶呈强阳性；端粒酶活性高，具有长的端粒；表达早期胚胎细

6、胞的阶段特异性抗原。遗传学特征遗传学特征 染色体数目和核型与来源细胞保持一致。染色体数目和核型与来源细胞保持一致。胚胎干细胞在胚胎干细胞在体外不断增殖且维持遗传的稳定性（正体外不断增殖且维持遗传的稳定性（正常的核型及端粒的长度）常的核型及端粒的长度）三、人胚胎干细胞建系三、人胚胎干细胞建系分离囊胚的内细胞群与成纤维细胞共培养，ES细胞非分化增殖胚胎干细胞的鉴定定向诱导分化成体干细胞功能细胞建系步骤建系步骤：1.1.获取早期发育的胚胎获取早期发育的胚胎2.2.分离囊胚的内细胞群分离囊胚的内细胞群3.3.ESES细胞体外培养，细胞非细胞体外培养，细胞非分化增殖分化增殖 4.4.ESES细胞的鉴定细

7、胞的鉴定5.5.ESES的传代和冻存的传代和冻存 着床前胚胎发育着床前胚胎发育19981998年，年，Dr.ThomsonDr.Thomson从体外受精的人类胚胎的囊胚期内细胞从体外受精的人类胚胎的囊胚期内细胞群中直接分离多能干细胞进行培养，分离到五个细胞系。这些群中直接分离多能干细胞进行培养，分离到五个细胞系。这些细胞系被继续培养了五至六个月，传了细胞系被继续培养了五至六个月，传了3232代仍可继续生长。代仍可继续生长。同年，同年，Dr.Dr.GearheartGearheart从终止妊娠的胎儿组织中得到原始的生从终止妊娠的胎儿组织中得到原始的生殖细胞，在体外培养九个月，这些细胞具有与殖细胞

8、，在体外培养九个月，这些细胞具有与ThomsonThomson分离的分离的人人ESES细胞同样的生物学特性。细胞同样的生物学特性。四，人胚胎干细胞的培养四，人胚胎干细胞的培养（1）特殊的培养液：用特殊的培养液：用DMEM培养液；培养液；（2）以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞（feed cell）；（3）必须加入必须加入LIF（leukemia inhibitory factor），抑制，抑制细胞分化。细胞分化。碱性磷酸酶活性碱性磷酸酶活性：未分化的胚胎细胞中含有：未分化的胚胎细胞中含有丰富的碱性磷酸酶，活性很高；而已经分化丰富的碱性磷酸酶，活性很高；而已经分化的

9、胚胎干细胞中碱性磷酸酶呈现弱阳性或阴的胚胎干细胞中碱性磷酸酶呈现弱阳性或阴性。性。端粒酶活性端粒酶活性：胚胎干细胞有着高水平的端粒：胚胎干细胞有着高水平的端粒酶活性，并具有长的端粒。酶活性，并具有长的端粒。干细胞标记物干细胞标记物：胚胎干细胞为未分化细胞，：胚胎干细胞为未分化细胞，能表达早期胚胎细胞的阶段特异性胚胎抗原能表达早期胚胎细胞的阶段特异性胚胎抗原（SSEASSEA）。）。五，胚胎干细胞的鉴定五，胚胎干细胞的鉴定人、猴、小鼠胚胎干细胞的人、猴、小鼠胚胎干细胞的细胞表面标志细胞表面标志物检测物检测A.AKP染色 B.SSEA-1 染色 C.SSEA-3染色 B.D.SSEA-4染色 E.

10、TRA-1-6染色 E.TRA-1-8染色细胞表面标志物检测细胞表面标志物检测六，胚胎干细胞的诱导分化六，胚胎干细胞的诱导分化 胚胎干细胞诱导成神经细胞胚胎干细胞诱导成神经细胞（1 1）RARA诱导；诱导；（2 2）生长因子诱导：）生长因子诱导：FGF2FGF2，FGF8FGF8；（3 3）共培养法：与骨髓基质细胞共培养；）共培养法：（4 4）基因转染：）基因转染：NurrlNurrl，bHLHbHLH，Mash1Mash1等；等；（5 5）移植到体内，利用局部环境诱导移植到体内，利用局部环境诱导。红色：突起红色：突起绿色：胶质细胞绿色：胶质细胞胚胎干细胞脑内移植后分化为神经前体细胞胚胎干细胞

11、脑内移植后分化为神经前体细胞（A A图中红色细胞）和卫星细胞（图中红色细胞）和卫星细胞（B B图中红色图中红色细胞）细胞）七，胚胎干细胞的应用前景七，胚胎干细胞的应用前景生产克隆动物生产克隆动物生产转基因动物生产转基因动物用于器官组织移植用于器官组织移植用于细胞治疗人类胚胎干细胞群用于细胞治疗人类胚胎干细胞群争论的焦点争论的焦点:1.1.胚胎的生命权胚胎的生命权2.2.父母的知情权父母的知情权2.2.治疗性克隆和生殖性克隆治疗性克隆和生殖性克隆国际上多数国家的政府和学术界支持胚胎干细国际上多数国家的政府和学术界支持胚胎干细胞的研究，包括治疗性克隆的研究胞的研究，包括治疗性克隆的研究。八、胚胎干

12、细胞研究的法律和伦理问题八、胚胎干细胞研究的法律和伦理问题不同国家、地区的人胚胎干细胞研究政策不同国家、地区的人胚胎干细胞研究政策允许或制定灵活的人胚胎干细胞研究政策：允许或制定灵活的人胚胎干细胞研究政策：澳大利亚，比利时，巴西，加拿大，澳大利亚，比利时，巴西，加拿大，中国中国，捷克斯洛，捷克斯洛伐克，丹麦，爱沙尼亚，芬兰，法国，希腊，匈牙利，伐克，丹麦，爱沙尼亚，芬兰，法国，希腊，匈牙利，冰岛，印度，以色利，日本，拉脱维亚，荷兰，新西兰，冰岛，印度，以色利，日本，拉脱维亚，荷兰，新西兰，俄国，新加坡，斯洛文尼亚，南非，韩国，西班牙，瑞俄国，新加坡，斯洛文尼亚，南非，韩国，西班牙，瑞典，瑞士，

13、中国台湾，泰国，英国。典，瑞士，中国台湾，泰国，英国。严格限制：德国，意大利，香港。完全禁止：奥地利，爱尔兰，立陶宛，挪威，波兰。一，成体干细胞定义一，成体干细胞定义成体干细胞成体干细胞（somatic stem cell）：是成体组织内具有是成体组织内具有更新和进一步分化潜能的细胞。更新和进一步分化潜能的细胞。一，成体干细胞定义一，成体干细胞定义二，成体干细胞特征二，成体干细胞特征1 1，为多能或单能干细胞，为多能或单能干细胞2 2，能够自我更新并且能够分化形成组成该类，能够自我更新并且能够分化形成组成该类型组织的细胞，使组织和器官保持生长和衰型组织的细胞，使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。退的动态平衡。3 3，机体的多种成熟分化的组织中普遍存在成，机体的多种成熟分化的组织中普遍存在成体干细胞，如体干细胞，如造血干细胞造血干细胞、神经干细胞神经干细胞、皮皮肤干细胞、间质干细胞、肌肉干细胞，肝脏肤干细胞、间质干细胞、肌肉干细胞，肝脏干细胞、等。干细胞、等。二，成体干细胞特征二，成体干细胞特征4,4,横向分化横向分化（转分化转分化）：部分成体干细胞在特定条件下可以转化为其它细胞部分成体干细胞在特定条件下可以转化为其它细胞l造血干细胞造血干细胞 神经细胞神经细胞 骨骼肌细胞骨骼肌细胞 心肌细胞心肌细胞 肝细胞肝细胞l骨髓基质细胞骨髓基质细胞骨骼肌细胞骨骼肌