口腔细胞培养及其应用PPT文档格式.ppt

1、提要：细胞培养的基本原理及基本方法 口腔医学中相关细胞培养及其特点 细胞培养在口腔再生医学中的应用 口腔生物学其他研究方法第一节第一节 细胞培养细胞培养Cell culture Cell culture HEK 293 cell一、细胞培养的基本原理一、细胞培养的基本原理Principles in cell cultureCal27 cell（一）细胞培养的基本概念（一）细胞培养的基本概念细胞培养胞培养 原代培养原代培养传代培养代培养 细胞培养：细胞培养：模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组织细胞在体外环境存活、生长增殖，并维持其结构功能原代培养原代培养（Primary cell cu

2、lture）（Primary cell culture）：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。Tumor tissue传代培养（传代培养（subculturesubculture）：）：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中293 cell（二）体外细胞生物学（二）体外细胞生物学v形态特点形态特点贴壁型细胞（adherent-type cell）必须贴附于支持物表面才能生长。大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞悬浮型细胞（suspension-type cell）于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面,多见于血液淋巴细胞v生长增殖过

3、程生长增殖过程培养细胞生命期培养细胞一代生存期1.贴壁型壁型细胞胞按照培养按照培养细胞的主要形胞的主要形态，可分，可分为几大几大类型型：u上皮型u成纤维型NIH 3T3 cellCal27 cellu 游走型u 多形型Nerve cell（http:/en.wikipedia.org/wiki/File:Macrophage.jpg）Macrophage2.悬浮型浮型细胞胞THP-1 cell（acute monocytic leukemia）培养细胞生命期所谓培养细胞生命期，指细胞在培养中持续增殖和生长的时间 细胞全部生存过程大致分为以下三个阶段细胞全部生存过程大致分为以下三个阶段：u原代培

4、养期u传代期 u衰退期原代培养期：原代培养期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续14周 传代期：代期：初代培养细胞一经传代后便改称为细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长衰退期：衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡passaging phase（2-4 M）Culture of rat dental pulp cellsdigestingprimary culture/cellspassaging culture/cellsprimary phase（2W）senescence phase细胞永生性胞永生性细胞获持久性增殖能力，成为无限细胞系主要发生在第二期末，或第三期初阶段细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。可能恶性变细胞永生性和恶性性非同一性状HEK 293 cellCal27 cell培养细胞一代生存期所所谓细胞胞“一代一代”，系，系仅指从指从细胞接种到分离再培胞接种到分离再培养养时的一段的一段时间，细胞胞传代后，一般要代后，一般要经过以下以下三个三个阶段段:潜伏期（游离期，贴壁期）对数生长期 停滞期（平台期）传代基本方法：弃旧培养基PBS洗涤胰酶消化血清中和吹打和分离