细菌霉菌及酵母菌计数方法验证文档格式.docx

1、二、适用范围：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。三、责 任 者：质量标准分析方法验证小组。四、正 文：1、验证申请 2、验证立项申请表 3、验证方案 4、验证方案的批复 5、验证报告 6、验证报告的审批 、验证证书7文件编码 第 2 页 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请。我公司细菌、霉菌及酵母菌计数方法严格按照中华人民共和国兽药典2005年版质量标准分析方法验证指导原则进行，今拟对细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证。请予以批准！附：细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证小组成员名单 组长：成员： 申报单位： 质量标准分析方法验证小组 申报日期： 年 月 日 文件编

2、码 第 3 页 验证申请批复 立项部门 申请日期 立项题目 要求完成日期 验证原因 类别 验证要求及目的 立项部门负责人签名：主管部门意见 日年 月 签名： 验证部门意见 日 签名：年 月 总经理意见 日月 年 签名：指定编制验证方案的部门：编制验证方案要求：验证完成要求及日期： 总经理签名：备注：文件编码 第 4 页 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案 一、概述：1、名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、目的：3、验证判断标准：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ 4、验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：5、验证日

3、期：二、验证 1、验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。2、内容：（1）菌液所用的菌株传代次数为3 代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时， 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌

4、毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数60cfu的孢子悬液。（2）验证方法 验证试验进行了3次独立的平行试验。A、试验组 供试液（）纯化水1ml（）药品名称（1：100）10g，取供试液 试验菌。60cfu过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入1ml 5 页 第文件编码 测定所加试验菌数。B、菌液组，按菌落数据计数方法测定供试1ml）取相当于供试品1g（C、供试品对照组 品本底菌数。无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓0.9%、稀释剂对照组 用相应稀释液D ，按薄膜过滤法制备计菌落数。1ml供试液60cfu度为每 （）纯化水C组回菌回 项目 D组菌稀释剂对照对照供试品收率

5、菌液组B % 收率% 试验组A D C 组组（A-C）/B D/B 菌株3 1 2 3 1 2 3 2 3 1 2 1 70 大肠70 埃希菌 平均：70 金黄色 70 葡萄球菌 平均：70 枯草芽孢 70 杆菌平均：70 白色念珠 70 平均：菌 70 70 黑曲霉 平均： 6 页 第文件编码 （）产品名称回组菌 D组菌 项目% 收率照对回收品对照稀释剂供试B 试验组A 菌液组（A-C）/B % 组菌株 C 组D 率D/B 大肠70 70 金黄色 70 70 平均：葡萄球菌 枯草芽孢 70 70 杆菌 平均： 白色念珠 70 70 菌 平均： 70 黑曲霉70 平均：作为阴依薄膜过滤法操作，

6、无菌氯化钠1ml，以上试验同时取试验用稀释液0.9% 性对照试验，均应无菌生长。 ）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。（3验证方案应进行严格细致精密认真的实施，根对于细菌霉菌及酵母菌计数方法 据统计结果，数据基本上应在允许偏差范围。 4）培训：所有参与的人员在开始验证前应作充分的培训。（ ）结果判断（5 （稀释剂对3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率，由上表可知，在 7 第页 文件编码 试验组的菌回收，70%应均不低于照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数 的百分率）应均大于70%，则按该验证供试液制备

7、方法和计数法测定供试品的细菌霉菌及酵母菌数。（6）再验证 当建立药品的微生物限度检查法时，进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 页 8 第 文件编码验证方案批复 验证方案名称 验证方案起讫日期 验 证 工 作 负责验证部门人员 参加部门 人员检验部门 验证方案概要 结论 年 月日 验证小组负责人 验证小组成员会签 生产使用部门意见 负责人 日月年 验证管理部门意见 月年负责人 日 总经理意见 年 日月 备注 页 9 第 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证报告 A试验组

8、供试液（）纯化水1ml（）药品名称（1：100）10g，取供 页 10 第 文件编码 60cfu试验菌。试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入 测定所加试验菌数。B菌液组，按菌落数据计数方法测定供试品1ml）取相当于供试品1g（C供试品对照组 本底菌数。无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度0.9%稀释剂对照组 用相应稀释液D ，按薄膜过滤法制备计菌落数。1ml供试液60cfu为每 （）纯化水回组菌D组菌C 项目 % 收回收率稀 释剂对照供试品对照B A 试验组菌液组（A-C）/B C 组 D 率% 组菌株D/B 3 1 2 大肠73.33 50 83.33 52 51 50 51 96 9

9、6 97 60 60 60 52 埃希菌50 60 52 平均96 52 54 54 52 60 97 金黄色 97 96 60 60 53 71.67 80.67 97 平均52 葡萄球菌 60 54 50 50 52 50 60 60 60 51 52 枯草芽孢96 96 96 73.33 83.33 50 96 平均60 杆菌52 52 51 52 52 52 96 白色念珠95 95 60 60 60 86.67 71.67 平均菌 95 96 96 96 60 60 60 53 53 52 51 50 51 85.00 黑曲霉71.67 51 53 平均 页 文件编码 11 第 （）

10、药品名称回C组菌 D组 项目% 收率照回收对品 照稀释剂对供试B 菌液组试验组A （A-C）/B % 菌株 组C 大肠85.00 86.67 51 52 60 38 38 38 52 89 89 88 60 60 埃希菌52 38 89 平均50 50 50 40 60 60 41 金黄色41 91 90 91 60 83.33 83.33 91 41 50 葡萄球菌50 51 51 38 39 39 89 枯草芽孢89 89 60 60 60 83.00 85.00 51 39 杆菌 平均52 52 37 38 52 88 88 60 60 60 38 白色念珠88 83.33 86.67 52 菌 平均88 50 50 5