活螨大肠杆菌检查操作规程Word文档下载推荐.docx

1、质量保证部、质监科、质量检验中心、检验操作人员。4.内容：4.1活螨检查法4.1.1简述4.1.1.1螨，属于节肢动物门，蛛形钢，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。其生活习性各异， 分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品 和药品中，都可能有它们的存在。4.1.1.2药品可因其原料、 生产过程或包装、 运输、贮存、销售等条件不良， 受到螨的污染。4.1.1.3螨可蛀蚀损坏药品， 使药品变质失效， 并可直接危害人体健康或传播疾病。 必须进 行活螨检查。4.1.2仪器、设备及用具4.1.2.1显微镜4.1.2.2放大镜4.1.2.3解剖针、发丝针、毛笔4.1.2

2、.4载玻片、盖玻片4.1.2.5酒精灯4.1.2.6培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）4.1.2.7扁形称量瓶4.1.2.830% 甘油溶液（简称甘油溶液）4.1.2.9饱和食盐水：市售食盐（或氯化钠） ，配成约 36%的水溶，煮沸，过滤，备用4.1.210 封固液4.1.3、活螨的检查方法版 本： 1.04.1.3.1活螨的一般检查方法4.1.3.1.1直检法 取供试品先用肉眼观察，有无疑似活螨的白点或其他颜色的点状物， 再用 5 10 倍放大镜或实体显微镜检视。有螨者，用解剖针或发丝针或小毛笔挑取活螨放在滴 有一滴甘油溶液的载玻片上，置显微镜下观察。4.1.3.1.2漂浮法 取供试品放在盛有

3、饱和食盐水的扁形称量瓶或适宜的容器内，加饱和 食盐水至容器的三分之二处，搅拌均匀，置 10 倍放大镜或实体显微镜下检查，可继续加饱和食 盐水至瓶口处（为防止盐水样品溢出污染桌面，宜将上述容器放在装有适量（甘油溶液的培养 皿中）用洁净的载玻片盖在瓶口，使与液面接触，沾取液面上的漂浮物，迅即反转玻片，置显 微镜下检查。4.1.3.1.3分离法 也称烤螨法。取供试品放在附有孔径大小适宜的筛网的普通玻璃漏斗 里，利用活螨避光、怕热的习性，在漏斗的广口上面放一个 60 100W的灯泡，距离药品约 6cm 处，照射 12h。活满可沿着漏斗内的底部细颈内壁向下爬，用小烧杯装半杯甘油溶液，放在漏 斗的下口处，

4、收集爬出的活满。在上述三种方法中，以前两种方法操作简便、效果好、检出率高，故多采用。而后一种方 法操作较繁琐、费时、效率低，较少采用。4.1.3.2各剂型药品的活螨检查方法 供试品取样量，一般供试品每批抽检两瓶。以单剂 量、一日剂量包装的样品，每批抽两盒（每盒检查 34 个最小包装单位）；贵重或微量包装的供试品，取样量可酌减。必要时，可再次抽样，或选取有疑问的样品进行检查。4.1.3.2.1有虫粉现象的片，可用直检法或漂浮法检查。同时注意检查药瓶口内壁与内盖 有无活螨。4.1.3.2.2先用 75%乙醇将药瓶的外盖螺口周围消毒后，小心 旋开外盖，用直接法，检查药瓶外盖的内侧及瓶口内外的周围与内

5、盖有无活螨。4.1.4结果判断 凡供试品按上述有关剂型项下规定检查，发现活螨者，作检出活螨报告。4.1.5、注意事项4.1.5.1螨在春夏和秋冬相交季节，繁殖旺盛，爬行活跃，易于检出，在寒冬时则活动微弱 甚至不动。鉴别时，可在灯下检查，光和热的刺激促使其活动，利于检查。4.1.5.2活满多为略带白色，晶亮的囊状小体，以暗色背景相衬，十分明显，故检查时一 定要注意与背景的反差，白色的背景常常掩盖螨的发现。4.1.5.3漂浮法检螨用的称量瓶，以高 3cm,口径 6cm 为宜，由于液面较宽，便于直接用放大镜或实体显微镜检查。用载玻片沾取检样时，接触面积大，检出率高。亦可用其他适当容器 代替。4.1.

6、5.4每次检查后的供试品、器皿和用具，特别是阳性供试品，应即时用焚烧、加热等法 处理，杀灭活螨、以免污染操作环境及人体。4.1.5.5为保留阳性结果备查，可将检出的活螨制成临时观察标本和长期保存标本。4.1.5.5.1临时观察标本：挑取检出的活螨，放在预先滴有 1 滴 75%乳酸溶液的载玻片上， 加盖玻片，置于酒精灯小火焰上，来回移动，缓缓加热片刻，使其适当透化，即可镜检。鉴定 后的螨体，亦可放入 5070%的乙醇溶液中保存，或作适当处理。4.1.5.5.2长期保存标本：4.1.5.5.2.1用具：先将载玻片、盖玻片洗净擦干备用。对于过大的盖玻片，亦可用小砂 轮分割成四开小方块使用。4.1.5

7、.5.2.2清洗螨体上的杂物：由于螨体上的许多刚毛和突出物，往往粘附着一些微粒 状杂物。在制片时，宜用解剖针或发丝针或小毛笔，挑取螨体放在滴有一滴清水的载玻片上， 轻轻搅动，洗去杂物。4.1.5.5.2.3螨体封存：取 12 滴螨类封固液放在载波片中央偏右的位置，挑取洗去杂物 的螨体 12 只，放在螨类封固液中，在低倍显微镜下用发丝针拨正螨体的姿态、位置（背面、 腹面）后，如封固液中出现气泡，可用烧热的解剖针插入气泡，即可消除。然后加上盖玻片。 将载玻片置酒精灯的小火焰上来回移动，缓缓加热，促使螨体附肢伸展，切勿沸腾，以免产生 气泡，甚至螨体爆裂。撤离火焰后，用红色的玻璃铅笔在载玻片的背面圈出

8、螨栓的位置，便于 镜检时寻找。然后在载玻片的左端贴上标签。4.1.5.5.2.4干燥：制成的玻片标本必须干燥， 一般将玻片标本放在 5060的温箱内干燥 约一周或放载玻璃干燥器中使之失水干燥。也可在室温下放置一个月左右，令其自然干燥。4.1.5.5.2.5封固：标本干燥后，在盖玻片周围用指甲油或加拿大树胶或油漆封固，以便 长期保存。4.2大肠杆菌检查法4.2.1简述4.2.1.1大肠杆菌即大肠埃希菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌 外，新近发现有非脱羧希菌等四个种。大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排 出体外。在药品中检出大肠杆菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便

9、污染，即可能污染肠病原体。大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌，可引起婴幼儿、成份爆发性腹泻。 为保证人体健康，口服药品必须检查大肠杆菌。4.2.1.2用 4-甲基伞形酮葡糖苷酸 （MUG）和靛基质 （Indole） 试验检查大肠杆菌是一项新技 术，其检验步骤为：增菌培养后，转种 MUG蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中 分离单个菌，如 MUG、Indole 试验为阳性或阴性即可报告结果，如 MU与 Indole 试验不一致时， 则需分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。4.2.1.3原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物， 产生颜色或荧光反应作为指示系 统来鉴定目标菌

10、。4.2.1.4实验证明 69%的大肠杆菌含 - 葡糖苷酸酶，约 10%的沙门菌属一些菌种也含有此 酶。MUG被 GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有 主观性，因而用 MUG鉴定大肠杆菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。单一的 MUG鉴别大肠杆菌其漏检率达 6%，98 鉴于%的大肠杆菌靛基质试验为阳性，故将 MUG靛- 基质试 验结合，用 EMB琼脂平板分离，辅以 IMViC 试验，在理论上可使大肠杆菌的检出率达 99%。4.2.2食品、设备及用具4.2.2.1无菌室 参照细菌、霉菌 （酵母菌）2.1.14.2.2.2净化工作台4.2.2.3

11、恒温培养箱 （36 1）4.2.2.4高压蒸汽灭菌器4.2.2.5显微镜 （1500 ）4.2.2.6微波炉或其他适宜加热装置。4.2.2.7水浴箱 （45 1）4.2.2.8离心机 （5004000/min）4.2.2.9薄膜过滤装置 微孔滤膜 直径约 50mm，孔径 0.45 10.02m。4.2.2.10电冰箱4.2.2.11匀浆仪4.2.2.12366nm 紫外灯4.2.2.13玻璃器皿参照细菌、霉菌 （酵母菌）2.2.24.2.3、试液 指示液4.2.3.10.9% 无菌氯化钠溶液 附录 3.14.2.3.2无菌磷酸盐缓冲溶液 （PH7.2） 附录 3.34.2.3.3无菌对氨基苯甲

12、酸溶液附录 2.24.2.3.4无菌聚山梨酯 80 氯化钠溶液附录 3.24.2.3.5欧- 波（Ehrlich-Boehme）试液附录 2.174.2.3.6甲基红试液附录 4.24.2.3.7 V-P 试液附录 2.11 ，2.134.2.3.8革兰染色液附录 2.4 ，2.10 ，2.164.2.3.9中性红指示液附录 4.14.2.3.10亚甲蓝指示液附录 4.34.2.3.11溴麝香草酚蓝指示液附录 4.64.2.3.12酸性品红指示液附录 4.74.2.3.13曙红钠指示液附录 4.94.2.4 、培养基4.2.4.1营养肉汤附录 5.14.2.4.2营养琼脂附录 5.24.2.4

13、.3胆盐乳糖（BL） 培养基附录 5.64.2.4.4 4- 甲基伞形酮葡糖苷酸蛋白胨培养基 附录 5.74.2.4.5乳糖培养基、 5%乳糖培养基附录 5.21 ，5.224.2.4.6蛋白胨水培养基附录 5.184.2.4.7磷酸盐培养基附录 5.194.2.4.8枸橼酸盐培养基附录 5.204.2.4.9曙红亚甲蓝 （EMB）琼脂附录 5.84.2.4.10麦康凯琼脂附录 5.94.2.5、对照用菌液取大肠杆菌 CMCC（B）44102的营养琼脂斜面培养物少许， 按种至 5ml 营养肉汤培养基内， 361培养 1824h后，用 0.9%无菌氯化钠溶液稀释至 1：106，使对照菌液加入量含

14、菌 50100 个（ 一般用量为 0.1ml） ，其菌数在做阳性对照的同时用营养琼脂注皿或平板涂布， 经培养后计数 确定。4.2.6、准备4.2.6.1供试品的检验量 见细菌、霉菌 （酵母菌）计数 5.34.2.6.2供试液的制备4.2.6.2.1液体供试品 见细菌、霉菌 （酵母菌）计数 6.2.14.2.6.2.2固体、半固体或粘稠液供试品 见细菌、霉菌 （酵母菌）计数 6.2.24.2.6.2.3非水溶性供试品 见细菌、霉菌 （ 酵母菌 ）6.2.34.2.6.2.4含抑菌成分供试品 供试品按常规检查法， 加入规定时的对照菌。 不能检出时该 供试液须按以下方法之一或两种以上方法联合处理后依法检查。同时做阳性和阴性对照。4.2.6.2.4.1稀释法 取规定量的供试液种入较大体积的培养基中， 使，该供试液稀释至不 具抑菌作用的浓