进出口动物源性食品中磺胺增效剂残留量的检测方法液相色谱质谱Word文件下载.docx

1、本标准的编制遵循GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T 20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法和SN/T 0001-1995 出品商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定的要求进行编写制订的。三、标准制定过程本标准起草单位在2010年4月收到认监委的任务下达文件后，立刻开始着手进行标准文本、编制说明和验证工作。本标准起草人通过查询相关资料和文献，建立了婴幼儿奶粉中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的检测方法。经实验研究验证后，方法的灵敏度、特异性和选择性均能满足相应的检测要求。四、主要试验技术论证目前国内一统公

2、司生产的母乳化脂肪在销售，合生元、南山等企业已在婴幼儿配方奶粉中使用，但根据相关规定，若在产品中添加食品添加剂，必须有相应的检测方法对其添加量进行测定，目前婴幼儿食品没有直接有效的检测甘油三酯的方法，所以应针对1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯建立相应的检测方法。图1 1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯（OPO）的化学结构（一）课题研究思路目前，甘油三酯的检测方法有化学法、柱层析法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气象色谱法、质谱法等。化学法和柱层析法反应时间长、易出现错误、操作繁琐，现在已很少使用这两种方法检测甘油三酯。薄层色谱法操作简便，结果直观，快速，而且成本较低，缺点是定量准确度很低，且对

3、样品的量要求较多，不适合低浓度物质的检测。气相色谱法灵敏度高，峰型尖锐，定量准确，缺点是由于甘油三酯的沸点很高，因此需要先衍生或耐高温的色谱柱才能进行分析，但衍生法无法对不同结构的甘油三酯分析，耐高温色谱柱耗费很高。质谱法检测限很低，但重复性较差，适用于物质的定性研究，不适合定量分析。最终采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器对婴幼儿配方奶粉中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量进行检测。本标准的重点在于1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯（OPO）与其同分异构体1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯（OOP）的分离。（二）讨论与分析1、色谱柱的选择本实验考察了C18柱、氨基柱、C8柱和银离子色谱

4、柱四种色谱柱对甘油三酯标品混合溶液的分离情况。实验结果如表1-1所示，由于银离子色谱柱含有修饰过的阳离子交换配体键合球形硅胶吸附相，适用于甘油三酯异构体的分离和顺式-反式脂肪酸异构体的分离，因此最终选择Varian的ChromSpher Lipids Silver Ion （2504.6 mm）作为最终的分析色谱柱。表1 不同色谱柱对甘油三酯的分离色谱柱分离程度1C8柱同分异构体不能分离2C18柱3氨基柱所有甘油三酯均不能分离4银离子色谱柱较好分离2、流动相选择与标品分离利用分离度公式计算不同流动相下OPO与OOP的分离度，从图2可得：当流动相为二氯甲烷和丙酮梯度洗脱时，OPO与OOP分离度较

5、高，表2为梯度洗脱表。表2 梯度洗脱条件时间（min）流速（mL/min）二氯甲烷丙酮0.898107525283236图2 流动相对OPO与OOP分离度的影响由图3可知，在银离子色谱柱和二氯甲烷、丙酮为流动相条件下，OPO等六种甘油三酯之间可以很好的分离，质谱定性分析可知峰4为OPO，它的出峰时间为20.158min，与OOP（峰5）紧邻。图3 6种标品的HPLC图谱（1. 三棕榈酸甘油三酯；2. 1，2-而棕榈酸-3-油酸甘油三酯；3.1，3-二棕榈酸-2-油酸甘油三酯；4. 1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯；5. 1，2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯；6. 三油酸甘油三酯）对图中的OPO

6、与OOP计算得到，分离度R=3.181.5，实现基线分离。表3 OPO和OOP的分离度R21.08320.1580.27750.30383.183、ELSD检测器参数对信噪比的影响图4 漂移管温度与载气流速对信噪比的影响漂移管温度和载气流速对信噪比的影响见图4，在漂移管温度50，载气流速1.5L/min下，50mg/LOPO标准溶液的信噪比响应最大，因此，确定该参数为最佳检测条件。4、色谱柱再生图5、色谱柱再生前OPO与OOP的分离谱图图6、色谱柱再生后OPO与OOP的分离谱图采用本方法连续多次分析样品后，色谱柱的分离能力会降低，这是因为在管柱内存在的低浓度的样品和溶剂能与固定相结合。因此，需

7、要对该色谱柱进行再生，经过对不同溶剂的尝试后，选出了较适用于本实验的方法，即先用乙腈冲洗柱子，再加溶有硝酸银的乙腈溶液（0.1g/mL）至硝酸银过量（氯化钠检测），再用乙腈冲洗，最后用流动相冲洗。本法的好处在于不存在水相，因为脂肪不溶于水，如果存在水会对分析有较大影响。5、幼儿奶粉中1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯的检测分别研究了法国合生元、美国美赞臣、伊利、多美滋、雅培、飞鹤、施恩、澳优、惠氏等9种婴幼儿配方奶粉在目标峰处是否存在干扰峰并对1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯（OPO）进行定量检测（表4）。表4 不同奶粉样品中OPO的含量（%）样品名称OPO合生元美赞臣-伊利多美滋雅培0.2

8、飞鹤施恩0.07澳优0.32惠氏图7、奶粉中添加OPO色谱图（添加水平20mg/g）五、方法的主要技术指标1、线性范围 取不同浓度的标准溶液，按本标准确定条件分别进样，浓度在0.1mg/mL10mg/mL之间，以峰面积对浓度对数作线性回归，其浓度与响应值有良好的线性关系，相关性R2为0.991以上。2、方法回收率和精密度数据在婴幼儿奶粉中分别添加不同浓度水平（10mg/g，20mg/g和50mg/g），上述添加水平6次平行，测定回收率和室内精密度。实验内数据表明，方法的总体平均回收率81%94%，方法的相对标准偏差为2.2 %7.2 %，实验内数据参见表4。表5 实验室添加回收数据 添加水平1

9、0mg/g20mg/g50mg/g测定数值（mg/g）8.216.243.58.115.944.37.716.445.08.742.0516.740.468.816.941.9717.242.488.944.498.417.744.8平均值（mg/g）8.516.643.3回收率 858387SD0.4140.5741.534RSD4.93.5% 七、结论综合上述情况，本方法可满足婴幼儿奶粉中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的检测，方法的检测低限、回收率及精密度等各项技术指标均符合GB/T 1.1-2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则、GB/T 20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法、SN/T0001-1995出口商品中农药兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定的要求。八、参考文献1、 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则2、 GB/T 20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法3、 SN/T0001-1995出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定