杞菊地黄丸定性检查及含量测定Word格式文档下载.docx

1、含量测定； 1.地黄（鲜跃全） 定性鉴别（TLC法）实验仪器：超声发生器、研钵、烧杯、微量移液管、吹风机、研钵、烧杯、硅胶G薄层板、实验材料：杞菊地黄丸 熟地黄 泽泻 茯苓 枸杞子 牡丹皮 山茱萸 山药细粉 菊花 实验试剂：乙酸乙酯、冰醋酸、10%硫酸、蒸馏水正丁醇、甲苯、冰醋酸、无水乙醇、10%硫酸、蒸馏水 试验方法 1.1供试品溶液的制备 1.1.1取杞菊地黄丸（浓缩丸） 6g，研碎，加乙醇超声处理分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。 1.1.2供试品溶液的制备 称取颗粒剂2.2 g，研磨成细粉，加甲醇40 ml，超声振荡30 min。过滤。滤液浓缩至干,加乙酸乙酯2

2、ml溶解,得供试液。 1.2对照品的制备 另取毛蕊花糖苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 1.3对照药材的制备 称取熟地黄浸膏粉0.5 g，按照供试品溶液制备方法，制得熟地黄药材的对照液。 1.4阴性对照液的制备 按处方比例，取除去熟地黄以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g,山茱萸1g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流

3、提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。 1.5薄层色谱法 1.5.1照薄层色谱法中国药典（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙醋冰醋酸（24 : 8 : 1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。 1.5.2薄层色谱照薄层色谱法中国药典（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇（6332）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在1

4、05加热至斑点显色清晰，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。2.山药（周开放）【性味与归经】味甘，性平。归脾、肺、肾经。【功能与主治】补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。 实验材料：回流装置、冷凝装置、水浴锅、坩埚、烧杯、微量移液管、硅胶G薄层板、吹风机。乙酸乙酯、甲醇、浓氨试液、无水乙醇、10磷钼酸。试验方法2.1供试品溶液的制备 取本品（杞菊地黄丸）粉末5g，加二氯甲烷30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。2.2对照品的制备 另取山药对照药材5g，同法制成对照药材溶液。对照药材加二氯甲烷同法制成对照药材溶液。2.3阴性对照液的制备

5、按处方比例，取除去山药以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。 1.称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度； 2.取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 3.合并以上两种浓缩液;加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。2.5薄层色谱法试验 照薄层色谱法中国药典（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分

6、别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（9：1：0.5）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10磷钼酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。 3.茯苓（刘保松） 实验器材：50ml圆底烧瓶，冷凝管，蒸发皿，水浴锅，过滤装置，硅胶G薄层板，紫外检测仪，吹风机茯苓对照药材、杞菊地黄丸实验试剂：乙醚，甲醇，甲苯，乙酸乙酯，甲酸，2%香草醛硫酸溶液，乙醇。 3.1供试品溶液制备 取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙醚50ml（量筒），超声处理10分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液蒸干（蒸发皿，

7、水浴锅），残渣加甲醇1ml使溶解（移液管），作为供试品溶液。 3.2对照品药材制备 取茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 3.3阴性对照溶液制备 按处方比例，取除去茯苓以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺茯苓阴性对照液。3.4薄层色谱法试验 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（20 ：5 ：0.5）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液一乙醇（4：1）混合溶液，在105加热至斑点显色清晰（吹风机）。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。或者照薄层色谱法（中国药

8、典20015年版中国药典）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸（24 : 1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 4.泽泻（王金龙）氧化铝柱，水浴锅，蒸发皿，过滤装置，硅胶H薄层板，紫外检测仪，吹风机泽泻对照药材、杞菊地黄丸乙酸乙酯，23-乙酰泽泻醇B对照品，环己烷，乙酸乙酯，5%硅钨酸乙醇。 4.1供试品溶液制备 取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙酸乙酯20 m1（量筒），超声处理30分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液加于氧化铝柱（2

9、00-300目，5g，内径为l cm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱（移液管），收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯l ml（移液管）使溶解，作为供试品溶液。 4.2对照品药材制备 取泽泻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 4.3对照品溶液制备 另取23-乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。 4.4阴性对照溶液制备 按处方比例，取除去泽泻以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺泽泻阴性对照液。称取泽泻0.75g、熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70

10、%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 4.5薄层色谱法试验 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯（1 : 1）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以5%硅钨酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰（吹风机）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 5.丹皮（雷铭宇） 仪器：加热回流装置、薄层板、紫外光灯材料：乙酸乙酯、蒸馏水、甲醇、牡丹皮对照药材、乙醚、丙酮、丹皮酚对照品、环己烷、盐酸、三氯化铁、乙醇定性鉴别（TLC法） 5.1 供试品溶液的制备 取本品15g（天平），研碎，加水100m

11、l，加热回流3 0分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯50ml（50ml量筒）振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干（水浴锅），残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。 5.2对照药材溶液提取 取牡丹皮对照药材1g（天平），研碎，加乙醚40ml，加热回流1 小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮lml（量筒）使溶解，作为供试品溶液。 5.3对照品溶液的制备 取丹皮酚对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。 5.4阴性对照溶液的制备 取处方中除丹皮外的其余药味，称取泽泻0.75g、茯苓0.75g、熟地黄2g和山茱萸1g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度（水浴锅

12、）；取枸杞子0.5g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 5.5.1薄层条件 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10ul分别点于同一硅胶G 薄层板上，使成条状，以环己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂（层析缸），展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5 %三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。 5.5.2薄层板 硅胶薄层板20200.4,105 ,活化30备用;展开剂:-环乙烷-乙酸已酯-冰醋酸（1010.1）;斑点观察:置紫外灯下（=254）检识定位5.6丹皮酚的含量测定 5.6

13、.1材料与方法 紫外分光光度计、 型电热恒温鼓风干燥箱 、紫外分析仪剂均为99.9%无水乙醇、水为二次蒸馏水 5.6.1.2材料 牡丹皮、丹皮酚对照品 5.6.1.3对照品标准溶液的制备 精确称取丹皮酚对照品0.005g置于 50ml烧杯中，以无水乙醇溶解 转至 100ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，得到 50ug/ml 的丹皮酚对照品溶液 5.6.1.4结果与分析5.6.1.4.1测定波长的选择 以无水乙醇为对照品，在274nm出测的最大波长 5.6.1.4.2线性关系考察 分别吸取对照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml，4ml，置于25ml容量瓶中!，用无水乙醇稀释至刻度摇匀 。以无水乙醇为空白溶液在 274nm 波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标样品浓度为横坐标绘制标准曲线。 5.6.1.4.3丹皮酚含量测定 准确称取牡丹皮粉末 3.000g（分析天平），置于50ml锥形瓶中，加入25ml无水乙醇，60度恒温水浴2h，趁热过滤，置于25ml容量瓶中用无水乙醇溶液定容，作为供试品溶液。量取5份0.1ml牡丹皮供试品溶液分别置于25ml容量瓶中。用无水乙