各种培养基的制作方法.doc

1、配方一 萨氏（Sabourauds）培养基蛋白胨 10克 琼脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克NaCl 0.5克水 100毫升pH 7.07.2在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.07.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克NaCl 5克pH

2、7.17.2取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15下放置12小时或50下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉 2克K2HPO4 0.05克MgSO47H2O 0.05克KNO3 0.1克NaCl 0.05克FeSO4 0.001克琼脂 2克水

3、100毫升pH 7.27.4在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.27.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。6.麦芽汁培养基将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，

4、装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。7.察氏培养基NaNO3 2克K2HPO4 1克KCl 0.5克MgSO4 0.5克FeSO4 0.01克蔗糖 30克琼脂 1520克水 1000毫升自然pH分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。8.豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）培养基黄豆芽 100克葡萄糖 50克琼脂 15克水 1000毫升称取新鲜黄豆芽100克，放入烧杯中，加1000毫升水，煮沸30分钟，用纱布过滤，补足失水。再加葡萄糖（或蔗糖）50克，琼脂15克，加热至融化，补足失水。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。9.伊红美蓝培养基（E、M、B培养基）乳糖 10克蛋白胨 5克

5、NaCl 5克K2HPO4 2克2%伊红水溶液 20毫升0.35%美蓝水溶液 20毫升琼脂 20克水 1000毫升pH 7.21.配制溶液向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。2.调节pH值用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值

6、为止。3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。4.分装已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15150毫米的试管，约装34毫升（1/41/3试管高度），如制作深层培养基，每只

7、20220毫米的试管约装1215毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。5.加棉塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或

8、瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。6.制作斜面培养基和平板培养基培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.51米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。改良的Fries氏液体培养液：蔗糖 30g、酒石酸铵 5g、NH4NO3 0.5g、KH2PO4 1g、MgSO47H2O 0.5g、CaCl2 0.1g、酵母浸汁 0.5g、蒸馏水 1000mL