丹皮酚的提取与鉴定.docx

1、丹皮酚的提取与鉴定丹皮酚的提取分离及结构鉴定摘要 :丹皮酚是牡丹皮和徐长卿的主要活性成分， 在医药、香料、化工领域具有 广泛用途，其药理活性广泛 : 镇静、镇痛、催眠、解热、抗炎、抗过敏，免疫调 节等，提取丹皮酚的方法主要有有机溶剂浸出法、 水蒸气蒸馏法、 超临界流体萃 取法等。本报告主要就丹皮酚的研究状况等作了介绍， 实验采取水蒸气蒸馏法从 牡丹皮中提取丹皮酚。 并用薄层色谱法， 紫外分光光度法等对丹皮酚进行了结构 鉴定。关键字 ：丹皮酚 水蒸气蒸馏法 薄层色谱法一、 文献综述1 前言丹皮酚（paeonol,简称Pae）,又称牡丹酚,主要是从萝摩科植物徐长卿干 燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡

2、丹、 芍药的根皮中提取分离出来的一种活性成 分 , 其成分单一、纯度高、质量控制良好、药理作用明确、毒副反应小，而且临 床使用安全。 是一种小分子的酚类化合物 , 化学式为， 2-羟基-4- 甲氧基-苯乙 酮，呈白色针状结晶 , 具有镇静、镇痛、解热、解痉、抗炎等作用 , 并具有抗心 律失常、抗动脉粥样硬化、改善微循环、保护缺血组织、抗菌和抑制皮肤色素合 成等作用。近年来还发现丹皮酚具有抗肿瘤作用 , 同时能提高机体免疫力且无明 显副作用。2. 研究进展丹皮始载于本经 , 具有清热凉血 , 活血化瘀的功效 , 为历版中华人民 共和国药典收载品种 ,. 其主要有效成分为丹皮酚。 药理活性广泛、

3、高效、低毒， 在心脑血管系统疾病和肿瘤防治等方面具有广阔的开发前景和临床应用价值。 目 前市场上对丹皮酚的需求量较大， 除用于医药制剂原料外， 还广泛用作牙膏及护 发、护肤、美容等日化产品的原材料。对于丹皮酚的研究，早在 1964，Doifode 等就合成了 a -溴代的丹皮酚。Rehma等合成了丹皮酚5-位的卤化衍生物，并且 发现均具有较好的抗真菌性。 1995年，徐鸣夏等合成了乙酰水杨酸丹皮酚酯， 即2-（乙酰氧基）苯甲酸-2-乙酰基-5-甲氧基苯酯， 其药理作用与乙酰水杨酸酯潘显道类药物相似，但抗血栓形成作用较强，适用于防治心脑血管栓塞性疾病。 阳对合成得到的5个丹皮酚酯类化合物通过MT

4、法进行体外抗肿瘤药理活性的评价，初步筛选 结果显示： 5-硝基-2- 呋喃甲酸的丹皮酚酯的抑制肿瘤细胞活性与临床上常用的 抗癌药物 5一氟尿嘧啶 (5-Fu) 的活性相近，对人肿瘤细胞有一定抑制作用，其细 胞毒活性可能与该化合物分子具有的氧化特征有关。今年来，对于丹皮酚的制备方法，定量分析，药理作用和结构修饰方面都有 许多进展。2.1丹皮酚的提取方法牡丹皮中丹皮酚的提取方法：蒸馏法，溶剂浸取法，其中，热浸取法明显 优于冷浸取法。 酸水乙醇， 碱水乙醇提取法优于醇提取法。 经酸碱水解提取液中 丹皮酚量升高可能由于酸碱增加了丹皮酚中原苷和次级苷的水解， 游离出更多的 丹皮酚。徐长卿中丹皮酚的提取方

5、法：蒸馏法，有机溶剂浸取法，直接蒸馏，大孔 树脂法，超临界流体萃取法等。人工合成丹皮酚：由于从天然药物中提取费用高，自然条件限制大，时间 长，所以，人工合成很广泛，均以间苯二酚为起始原料，但具体工艺流程，工艺 条件，收率有所不同，部分方法收率可达 55%，且纯度高。2.2丹皮酚的主要分析方法2.2.1HPLC法：是测定中药成分的主要方法，方便，快捷，准确盛习锋等用该法 测定了不同产地丹皮药材中丹皮酚和去甲丹皮酚的量 .2.2.2气相色谱法：凌娅等用直接蒸馏毛细管气相色谱法，以正十五烷为内标 物对康溃丸中的丹皮酚进行了内标比对定量研究。2.2.3薄层扫描法：该法简单易行，测定结果稳定，重现性好，

6、准确可靠尤其在 中药复方制剂中， 可较好的排除其他成分的干扰， 叶凤等用该法测定了血脂平胶 囊中丹皮酚的量，刘义海等用薄层扫描法测定了知地黄丸中丹皮酚的量。2.2.4毛细管电泳法：赵新锋等选用芦丁为内标用胶束电动毛细管色谱法分离牡 丹皮及中药六味地黄丸中丹皮酚的量。 以丹皮酚对照品峰面积与内标的比值对其 浓度作图，得标准曲线，线性关系良好且加样回收率高，简单，快捷，经济高效2.2.5化学发光法：丹皮酚含有酚羟基， 具有还原性。 汪宝其等选用鲁米诺 -过氧 化氢- 钴离子为空白发光体系利用光氧化氢对丹皮酚结构中酚羟基的氧化作用， 而消耗发光体系中的过氧化氢，致使原空白发光体系的发光强度降低，即淬

7、灭， 淬灭程度的强弱在一定范围内与丹皮酚的浓度呈线性关系进而， 对丹皮酚进行测 定。2.2.6分光光度法 应用分光光度法测定丹皮酚含量的技术较为成熟，按不同的原理又可分为以 下几种方法：1)紫外分光光度法：具有操作简单、费用较低等优点。但由于该法基本上没有 分离能力， 样品处理要求严格， 故常被用于要求不很严格的一般测定、 中药材炮 制方法与处理条件比较、制剂工艺选择等方面 。胡锡波等以紫外分光光度法测 定了丹皮酚包合物中丹皮酚的含量，结果显示丹皮酚质量浓度在 124 1025Ixg /m范围内与吸光度线性关系良好(r=0 . 999 6)。2)一阶导数分光光度法： 王焕云等 用水蒸气蒸馏法提

8、取丹皮酚得样品溶液， 分别对样品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液在 210360 nm波长范围内绘制吸收光谱及一阶导数光谱图。从一阶导数光谱可知，选择 263 llm和267 nm两波长以峰零法定量效果较好。以 A=A 一 A:为纵坐标、质量浓度为横坐标，丹皮 酚质量浓度线性范围是3. 0188. 048 Ixg /mL,回收率为101. 95%。结果表 明，此法可不经分离对丹皮酚进行含量测定，且结果准确。3)正交函数分光光度法：王焕云等用水蒸气蒸馏法提取麦味地黄丸得供试品溶 液，以水为空白，在220350 nm波长范围内分别对丹皮酚对照品、供试品和阴 性对照品溶液进行扫描， 得吸收光谱。 根

9、据光谱信息， 选用二次正交多项式系数 (P2) 作为定量参数，以消除阴性对照的干扰，在 263. 8283. 8 nlTl 波长之间 每间隔4 nm测定各个波长的吸收度值，按公式P2: (+5)A1+ (一 1)A2+( 4)A3+( 4)A4+( 1)A5+(+5)A6计算P2值。结果P2与质量浓度C呈良好的线性关系，平均回 收率为 99. 0%。3.丹皮酚的药理作用3. 1 改善心脑血管作用311 抗心律失常多年来国内外学者对丹皮酚抗心律失常作用及其机制进行了深入研究， 发现 Pae有明显对抗大鼠心肌缺血再灌注模型心律失常作用， 80 mg?k160 mg?kgPae,能使大鼠室颤(VF)

10、及室性心动过速(VT)的发生率降低，并可有效地缩短持 续时间，缩小心肌缺血和梗死的范围，拮抗心肌损伤。近来研究发现，丹皮酚的 抗心律失常作用与其对钙离子通道的阻滞作用具有重要的内在联系 。3 1 2 抗动脉粥样硬化动脉粥样硬化(Athero sclersis ，AS)是当今严重威胁人类健康的疾病之一， 是许多心脑血管疾病的病理基础，寻找有效对抗AS的药物成为近年来研究的热点 之一。经兔、鹌鹑、大鼠等多种动物实验发现，Pae具有明显的抗AS乍用。75 mg?kg 150 mg?kg Pae 可明显降低兔动脉粥样硬化模型血清中总胆固醇 (TC) 和低密度 脂蛋白 (LDL) 水平，延缓动脉粥样硬化

11、进程， 显著降低兔主动脉斑块面积、 内膜， 中膜厚度比及内膜泡沫细胞数。 病理学观察显示， 丹皮酚可不同程度地减轻主动 脉的病变。31 3 改善血流变心脑血管血栓性疾病的发生和发展过程中，除血小板聚集活性增高外，常伴 随着血液流变学性质的异常， 特别是与血液粘度、 红细胞压积、 红细胞聚集性的 升高和红细胞变形性降低等因素有关。Pae对血液流变学指标具有多方面的影响。 100 mg?kg 丹皮酚能显著降低切率条件下的全血粘度，并显著降低红细胞压积、 红细胞聚集指数、 最大变形时间及血小板粘附率。 红细胞初始表观变形指数和最 大表观变形指数与对照组相比明显增大。3.1.4抗心肌梗死作用 丹皮酚能

12、明显减少冠脉结扎致实验性心肌梗死犬的心肌梗死面积、降低心肌梗死程度、减少心肌酶的释放，同时可提高模型犬血清中 SOD的活力，增强清 除自由基能力，降低血清中MDA的含量，减轻脂质过氧化损伤的程度。其作用 机制可能是通过稳定细胞膜， 抑制缺血心肌的膜损伤， 清除自由基， 降低脂质过 氧化等发挥作用。3.1.5抗脑缺血再灌注性损伤的作用武继彪等 10采用大鼠大脑动脉栓塞模型，观察缺血再灌注 24h 后，大鼠神经功能症状评分、脑梗死体积测定、病理组织学变化以及脑组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX、丙二醛(MDA和过氧化氢酶(CAT的 含量，结果显示丹皮酚干预后大鼠神经功

13、能症状评分提高， 脑梗死体积缩小， 脑 缺血再灌注损伤脑组织的病理改变减轻，SOD GSH-Px CAT的活性升高，MDA含 量减少，提示丹皮酚保护缺血脑组织的作用机理可能与抗自由基损伤有关。 32 抗肿瘤作用 研究显示，丹皮酚在体内外对人白血病细胞 K562、人乳腺癌基因细胞T6-17、 肝癌细胞BEL-7404移植性肝癌细胞HepA人白血病肿瘤细胞株K562/ ADM宫 颈癌细胞系HeLa人大肠癌细胞株29等多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。 与 大多数抗肿瘤药物作用特点相同， 丹皮酚对不同肿瘤细胞株的增殖表现出不同的 抑制作用。Pae抗肿瘤作用不仅体现在直接抑制肿瘤细胞的生长，还表现在逆转

14、肿瘤细胞多药耐药的作用和对多种化疗药物的增敏作用及协同作用。33 增强免疫力作用Pae不仅通过调节某些免疫学指标来发挥抗肿瘤效应，而且还具有提高正常 机体免疫系统功能的作用。 据文献5 报道，与对照组比较， 754mg?kg， 37 7 mg?kg 18. 9 mg?kg Pae组的小鼠脾脏指数分别增加 28. 3、61. 3、15. 1， 胸腺指数分别增加 674 、791 、349 ，淋巴细胞转化率分别增加 314 、 57. 6 9，6、20. 9。可见，Pae对小鼠免疫功能具有明显的增强作用。通过观 察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能、血清溶血素的形成和二硝基氯苯 (DNCB)致小鼠迟发型变

15、态反应(Delayed cutaneous hypersensitivity ，DcH)，发现丹皮酚能提高小鼠巨噬细胞的吞噬功能， 使小鼠血清溶血素明显高于对照组， 同时可增 强DNCB致的皮肤迟发型变态反应，说明Pae对小鼠特异性体液免疫功能、特异 性细胞免疫功能以及非特异性免疫功能均有增强作用。3. 4 镇痛、消炎作用 王宪龄等运用热板法和扭体法对牡丹皮的镇痛作用进行了研究，发现牡丹皮 的高、中、低剂量组均表现出一定的镇痛作用，能延长小鼠疼痛潜伏期，减少醋 酸所致小鼠扭体反应次数。 其中以高剂量组作用最强。 牡丹皮水煎剂能抑制炎症 组织的通透性和前列腺素（PG）的生物合成，从而对多种急性炎

16、症反应具有抑制作用，并且它不抑制特 异性抗体的产生，不影响补体旁路途经的溶血活性，故在发挥抗炎作用的同时不 影响正常的体液免疫功能。汤文璐等先用角叉菜胶诱导形成大鼠急性足爪肿胀模 型、用二甲苯诱导形成小鼠耳片水肿模型、用福氏完全佐剂 （CFA）诱导形成大鼠佐剂性关节炎模型，然后用丹皮总苷（TGM进行灌胃给药抗炎治疗。发现TGM对 上述几种炎症均有明显的抑制作用。 此外，丹皮酚还有护肝、保护肾缺血再灌注 损伤、降血糖等众多药理作用。3.5抑菌作用早期研究发现丹皮酚在体外I ： 15 000浓度下对大肠杆菌、枯草杆菌有明显 抑制作用，在体外1 : 2 000浓度下对金黄色葡萄球菌有明显抑制作用，对流感 病毒及常见致病性皮肤真菌亦有抑制作用。高健等，通过琼脂扩散抑菌试验证明， 丹皮酚及其衍