推荐下载高效液相色谱法测定帕米膦酸二钠中的β丙氨酸的检测方法Word格式.docx

1、【关键词】 帕米膦酸二钠 ?丙氨酸 高效液相色谱法1帕米膦酸二钠是一种双膦酸类骨吸收抑制剂，临床上广泛应用于治疗骨质疏松症、肿瘤并发的高钙血症和变形性骨炎1-3。帕米膦酸二钠的合成主要以 ?丙氨酸为原料，同时也是降解的主要产物，因此需要控制帕米膦酸二钠中 ?丙氨酸的量（拟定为不得超过 0.3%）。第 30 版美国药典、2007 年版英国药典和国家食品药品监督管理局国家药品标准 WS1 （X 294） 2004Z 中，帕米膦酸二钠中 ?丙氨酸的限度检查均采用薄层色谱法。由于薄层色谱法专属性和灵敏度均不如高效液相色谱法，故本文利用 2，4?二硝基氟苯与 ?丙氨酸的胺基进行耦合反应（见图 1），结果

2、衍生物具有紫外吸收，采用紫外检测高效液相色谱法对帕米膦酸二钠中 ?丙氨酸的限度进行检查。帕米膦酸二钠已被列为中国药典 2010 年版二部拟新增品种，作为承担单位，本实验方法拟收载在中国药典2010 年版二部。图 1 2，4?二硝基氟苯与 ?丙氨酸的反应（略）Figure 1 Reaction of 2,4?dinitrofluorobenzene and ?alanine1 仪器与试药Agilent 1100 高效液相色谱仪，VWD 检测器及其配套色谱工作站;2，4?二硝基氟苯（International Laboratory USA，批号：194632，质量分数：99.9%）; ?丙氨酸对照

3、品（广东信立泰药业有限公司提供，批号：20061120,质量分数：99.4%）;帕米膦酸二钠（深圳信立2泰药业有限公司，批号：20080201;宁波人健药业有限公司，批号：070107、070104、070110;浙江迪耳药业有限公司，批号：060403）;水为超纯水;甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（250 mm 4.6 mm，5 流动相：甲醇?0.01 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液（用氢氧化钠调节 pH 值至 7.0）（体积比 3070）;流速：1.0 mL/min;柱温：40 ;检测波长：360 nm。2.2 溶液的制备供试

4、品溶液：精密称取本品适量，加水溶解并稀释制成每 1 mL 含帕米膦酸二钠 3mg 的溶液，作为供试品溶液。对照品溶液：精密称取 ?丙氨酸 0.045 25 g 置 100 mL 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取 2 mL 置 100 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。3空白溶液：水。精密量取供试品溶液、对照品溶液和空白溶液各 2 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加水3 mL、质量分数 5%的碳酸钠水溶液 1.0 mL 和质量分数 4%的 2，4?二硝基氟苯乙腈溶液 2.0 mL，摇匀后立刻在 40 下反应 2 h，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，作为反应后的供试品溶

5、液、对照品溶液和空白溶液。2.3 专属性试验精密量取反应后的对照品溶液、供试品溶液（浙江迪耳药业有限公司，批号：060403）和空白溶液各 10 L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（见图 2）。由图可知，空白辅料无干扰，反应后的衍生物主峰与相邻峰的分离度符合要求。1. ?丙氨酸图 2 ?丙氨酸对照品溶液（A）、供试品溶液（B）和空白溶液（C）的色谱图（略）4Figure 2 Chromatograms of the reference solution （A），the test solution （B） and the blanksolution （C）2.4 回收率试验取同一批未检出 ?丙氨

6、酸的帕米膦酸二钠（深圳信立泰药业有限公司）适量，加水制成每 1 mL 含 6.0 mg 的溶液，作为供试品溶液;另根据拟控制的 ?丙氨酸限度（0.3%），取 ?丙氨酸适量逐步稀释为每 1 mL 含 18 g 的溶液，作为对照溶液。将供试品溶液与杂质对照溶液按比例混匀配制为含 ?丙氨酸为限度 80%、100%、120%的溶液，测得回收率分别为 96.9%、98.8%、97.5%、99.5%、99.2%、101.1%、100.8%、101.7%、96.2%，平均回收率为 99.1%，RSD 为 1.9%。2.5 线性方程tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！5浓缩干燥对丹参提取液

7、中丹参酮A 和丹酚酸 B 影响【摘要】 目的 考察浓缩及干燥方法对丹参提取液中丹参酮A 和丹酚酸 B 含量的影响。方法 采用 2005 年版中国药典中丹参酮A 和丹酚酸 B 含量测定的 HPLC法，测定不同浓缩干燥工艺中丹参酮A、丹酚酸 B 的含量，并计算各工序步骤的转移率。结果 减压浓缩丹参酮A 损失约 6.92%、丹酚酸 B 损失约 7.04%;常压浓缩丹参酮A 损失约 41.51%、丹酚酸 B 损失约 20.40%;减压干燥丹参酮A 损失约 33.78%、丹酚酸 B 损失约 13.92%;常压干燥丹参酮A 损失约 79.73%、丹酚酸 B 损失约41.94%。结论 减压浓缩和减压干燥可以

8、显著减少丹参酮A、丹酚酸 B 的损失。【关键词】 丹参酮A 丹酚酸 B 浓缩干燥中药丹参来源于唇形科多年生草本植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血化瘀、养心除烦之功效。临床上用于治疗心绞痛、冠心病等心血管疾病1。丹参的有效成分包括水溶性酚酸类化合物及脂溶性丹参酮类化合物两大类2。据文献3-7报道，丹参中的脂溶性成分丹参酮A 或水溶性成分丹酚酸 B 性质不稳定，易受热降解。丹参的固体制剂工艺过程常常需要对丹参提取液进行浓缩和干燥，有关丹参酮A 和丹酚酸 B 在浓缩和干燥过程中的变化情况尚未见系统研究的6报道。本文以复方丹参片中丹参药材的提

9、取浓缩工艺为依据，以丹参酮A 和丹酚酸B 的含量为指标，考察大生产中常用的浓缩和干燥方式对丹参酮A 和丹酚酸 B 的影响，为大生产中的工艺优化提供参考。1 材料与试剂HH?6 型恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）;HH?型水浴锅、SHZ?D（）循环水式真空泵、RE?52CS 旋转蒸发器（巩义市予华仪器有限责任公司）;高效液相色谱仪（上海天美科学仪器有限公司）;丹参酮A（批号：110766?200417 ）、丹酚酸 B（批号：111562?200504）购自中国药品生物制品检定所;甲醇（天津市大茂化学试剂厂，色谱纯）;乙腈（上海正兴化工一厂，色谱纯）;甲酸和四氢呋喃为分析纯;水为屈臣氏蒸馏水。丹

10、参药材购自市场，由本校药用植物教研室鉴定。2.1 丹参提取液的制备按 2005 年版中国药典一部1复方丹参片下丹参的提取方法提取制得丹参提取液。72.2 丹参酮A 和丹酚酸 B 的含量测定2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮A 对照品 10 mg，置 50 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;精密量取 2 mL，置 25 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,即得丹参酮A 对照溶液（每 1 mL 中含丹参酮A 16 或精密称取上述丹酚酸 B 对照品 3.5 mg，置 25 mL 棕色量瓶中，加体积分数 75%甲醇至刻度，摇匀，即得丹酚酸B 对照品溶液（每 1 mL 中含丹酚酸 B 0

11、.14 g）。2.2.2 供试品溶液的制备 分别精密量取丹参提取液 10 mL、或其浓缩液 1 mL，或者取相当于 10 mL 经干燥的丹参提取液的干膏（均相当于 1 g 生药），置 100 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，测定丹参酮A 的含量;或加体积分数 75%甲醇至刻度，测定丹酚酸 B的含量。2.2.3 测定方法 按照 2005 年版中国药典一部复方丹参片下的 HPLC 方法测定。2.3 浓缩及干燥方法分别取 1 000 mL 的丹参提取液，一份在 40 减压浓缩到 100 mL，另一份在 100 恒温水浴锅中常压浓缩到 100 mL。留样后，将浓缩液混合，待干燥。其中常压干燥温8度为 10

12、0 ，减压干燥温度为 45 ，得到干膏后，取样进行 HPLC 分析。2.4 不同浓缩和干燥工艺过程中丹参酮A 和丹酚酸 B 的含量变化情况取对照溶液适量，按比例稀释为含 ?丙氨酸 3、6、9、12、15、18 g/mL 的溶液，分别相当于 2.2 项下供试品溶液的 0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0. 5%、0.6%的限度对照溶液，依法测定，以峰面积为横坐标，以质量浓度为纵坐标，得线性回归方程为y=0.0445x+0.2010,r=0.998 6，表明 ?丙氨酸质量浓度在 318 g/mL 范围内与峰面积呈较好的线性关系，符合限度实验的要求。2.6 稳定性试验取一份供试品溶液（浙江迪耳药业有限公司，批号：060403）于配制后 0、1、3、5、7、8 h 进样，其峰面积的 RSD 为 1.2%，表明溶液在 8 h 内稳定。92.7 检测限取对照品溶液逐级稀释各 2 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加水 3 mL、质量分数 5%的碳酸钠水溶液 1.0 mL 和质量分数 4%的 2，4?二硝基氟苯乙腈溶液 2.0 mL，摇匀后立刻在 40 下反应 2 h，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取反应后的溶液