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1、生物半减期：指进入生物体内的化学物质的里量通过各种途径消除一半所需要的时间，又代谢半减期。一、检验方法的一般要求：1.方法的一般要求 1）灵敏度选择符合生物监测的基本要求 2）操作简便 3）试剂易得、价廉 4）效率高 5）符合国情，易推行、推广2选择和建立生物检测方法必须考虑的因素： 1）被测成分 溶解性，稳定性 含量水平 高g/L水平 低ug/L二 、方法研制准则的基本内容 1取样、运输、保存的原则 1）取样： （1）容器工具材质不干扰测定 （2）取样的操作要防止污染 （3）取样时间根据半减期判断决定 （4）取样的体积 尿液=50ml 静脉血=5ml 末梢血500ul 2） 保存时间：一天，

2、三天，一周，两周一般只要求两周 3）运输过程：保证分析物稳定，必要时要冷藏和冷冻运输 4）防腐剂（尿）和抗凝剂（血） 2.样品预处理原则 1）尿液浓度按比重校正 尿标准比重1.020，1.030及=75% 3.制定分析方法的程序 1）分析条件选择、优化 2）确定检出限 （1）影响检出限的因素：试剂的纯度，仪器的工作状态，电源稳定性光源的温度变化、污染等不可控制的因素。 （2）检出限的确定 一般用统计法，一般用空白值的3倍标准差计算；色谱法用3倍噪音水平，检出限应小于0.3倍生物接触限值。（3）检出限的表示方法 浓度或绝对量表示，用浓度表示时要说明方法取样体积。 3）精密度 ：同一个人用同一方法

3、重复测定同一均匀样品测定结果的符合程度通常在线性范围内取高、中、低三个浓度水平分别重复测定35次。用RSD表示或用变异系数表示 复杂方法RSD=20 简单方法=75% 若105%表明存在明显的系统误差。（3）用标准方法或权威方法比较：两个方法均值相对误差应小于10% t检验 在确定一个置信水平条件，两方法测定无明显差异 5）干扰试验 ：如果有干扰，要找出消除干扰的方法 6）样品的稳定性实验 ：时间：当天，3天，1周，2周 温度：室温，普通冰箱冷藏（4），冷冻保存（-8），低温冰箱（-20） 4.方法的验证 1）新方法的验证：必须是另一单位研制方提供方法所有技术材料 验证内容：四项 线性范围，精

4、密度，准确度，样品的稳定性。 2）引进国外标准方法或权威方法，引进方就是验证方。 5.现场应用 首先要观察检出率 观察检测结果与环境污染的符合程度 同时取非接触样品进行对照三、确定生物监测指标的依据（一）化学物质在体内的动力学过程 1.吸收 1）呼吸道吸收气体物质通过肺泡壁及周围毛细血管吸收 固体物质， 溶解时吸收的前提 2）皮肤 有些有机物很容易被皮肤吸收 F=C/15 *（0.038-0.153p）exp（-0.016MN） F皮肤吸收量mg/2/h C化学物质在水中的饱和度mg/ml P辛醇-水的分配系数 MN相对分子质量 许多农药易被皮肤吸收 如有机磷 2.体内分压和贮存 1）起始主要

5、分布于血液中最终分布取决亲和力 2）血液侧得量是反映新近吸收量或机体组织的水平 3）血液中毒物或其他被测物并非均匀分布 4）一般脂溶性溶剂及卤代烃会分布在脂肪组织中，乳汁是检测有机氯农药最好的样品 5）体内储存毒物的形式大多为结合状态，测定尿液中的代谢物需要先水解 3. 生物转化 1）概念：外源性化合物在体内经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物的过程。 2）有关生物转化的讨论 是毒物发生质的变化 生物转化的数量关系，个体差异很大 是一种动态过程，对时间的了解是确定采样时间的基础，生物半衰期。4.排出 易挥发性有机溶剂从呼吸气中排出较多。长期蓄积的有机氯农药可从乳汁中排出及耵聍（耳屎）中

6、排出，易代谢的有机毒物大多以结合态从尿中排出。（2）、个体差异 1、毒物在生物体内的动力学过程有种属家族和个体的差异，其中生物转化过程变异极大；2、生物监测的个体差异可用监测结果的变异系数表示；3、个体差异降低了生物监测的精确性，却可帮助检出特殊敏感人群或耐受人群。（3）、接触水平（剂量）效应（反应）关系 1、是确定一次生物监测指标的关键依据；2、生物监测结果与空气毒物浓度之间的相关资料，可作为选择生物监测指标的替代依据。4、检验指标的选择与分类（1）、选择的基本要求 1、特异性好；2、具有良好的剂量效应关系；3、稳定性好；4、 有准确可靠的检验方法。（2）、生物材料检验指标的分类 1、化学物

7、质原形：化学物质在生物体内不进行生物转化或转化速度很慢；缺乏毒物代谢动力学资料；代谢产物在体内没有特异性 2、化学物质代谢产物 3、生物效应指标。五、样品的采集与保存一）、生物材料样品的选择（一）、种类及特点 尿液: 最常用的 1）特点：采集方便、无损伤性、采集量大 2）适用性：水溶性化学物质、代谢产物、金属等 3）尿样的种类：（1）全日尿（24h尿）收集24h内的全部尿液，通常只用于住院病人 （2）晨尿 起床后、早餐前第一次排出的尿 （3）定时尿： 生物半减期 班前尿：第2个工作日上班前以内排出的尿 班中尿：上班23h以后排出的尿 班末尿：下班前1h内排的尿 班后尿：下班以后1h以内排出的尿

8、 周末尿：连续工作第五个工作日的班末尿。血液 1）特点：成分较恒定 个体差异小 取样污染机会小 损伤性采集样品 血样贮存条件要求较高； 2）种类：血清：不抗凝离心分离出的上层清夜 血浆：加抗凝剂离心分离的上层清夜 全血 红细胞。呼出气 1）特点 优点：操作方便、干扰物少，非损伤性 缺点：a、被测物的含量比较低 b、肺泡气中水分对某些测定有影响 c、肺部“死腔”中环境空气对肺泡气稀释不稳定，影响测定结果的解释；2）适用性 监测仅限于挥发性物质 主要用于测定化学物质原形 呼出气监测结果能反映采样期间车间空气的平均浓度； 3）呼出气的分类 混合呼出气、终末呼出气（肺泡气） 第一阶段呼出的是空气，第二

9、阶段混合呼出气，第三阶段肺泡气。（二）、生物材料样品的选择 1、同一毒物或代谢产物在不同生物材料其生物学意义不一样，血镉代表近期接触水平、尿镉反映长期接触的浓度； 2、选择生物材料样品种类的要求：被测物有特异性 与外剂量有相关性 有足够的稳定 测定结果重复性好，个体差异在允许范围内 采样能被受试者接受； 3、尿、血、呼出气是目前较理想的生物材料样品，美国BEI55个尿58%、血27%、呼出气14%。二）、样品采集、运输及保存（1）、一般要求 1、采样时间：依据生物半减期； 2、采样环境：无污染；3、采样容器：测无机成分、塑料、高压聚合玻璃：硬质、石英 不锈钢含Cr、Ni、Mn（不能用于测此三种

10、元素）使用前要求用酸液（稀HNO3）浸泡24h洗涤；测有机物 玻璃、塑料（不能用橡胶和添加染料的橡胶） 冷冻保存不能用玻璃仪器； 4、样品的运输与保存；5、采样记录编号检验项目受试者信息采样信息：时间、地点、环境、过程。 采样人及记录人信息（二）样品采集与保存 1、尿样1）尿样的校正： （1）比重校正法 标准比重1.020 校正公式C校正=（1.020-1.000）/（d-1.000）*c=kc d的使用范围1.0101.030 （2）肌酐校正法.尿中被测物浓度（mg/g肌酐）=实测浓度（mg/L）/肌酐浓度（g/L），肌酐含量 2）采样. 采集尿液不少于50ml, 用顶空分析法测定挥发性物质

11、时.收集尿样的容器要充满尿样并知道体积， 记录2人上次排空膀胱的时间及采集样的终点时间。 3）储存.贮存一般2周. 反腐 加酸.氯仿.冷藏 测尿中汞或挥发性有机物要尽快测定 要保存5天以上的，最好冷冻2、血样1）采集 （1）、全血；要抗凝 （2）、血清（血浆）或红细胞 2）注意事项 采集过程避免污染.毛细管血 防止溶血.金属针头（取下）再挤出针管时不能太快 取末梢血要避免挤压采集部位，自然流出弃去第一滴血有三种情况不宜采集毛细管血a血液量超过5ml.b采集环境有外源性化学物质存在c测定挥发性成分 3）血样的运输与保存 避免振动和温度的改变 血样冷冻肯定溶血采集血清或血浆时，应分离再保存 临时存

12、放4过夜，长时间保存要冷冻 测酶活性要采集后尽快分析3.呼出气. 1）采集方法： 先深呼吸23次，再恢复正常呼吸时采集呼出气 采集肺泡气只收集末端呼出气2）注意事项： 受检者必须时肺功能正常者 要选择对被测物吸附小的容器 要在正常呼吸状态下收集样品呼出过程不能有阻力 采样的时机要依被测物代谢速度决定三、生物材料样品的预处理原则（一）无机物分析的样品处理1、稀释法.1）.常用的稀释剂;1）稀硝酸液（尿），2）TntonX100表面活性剂3）基体改进剂溶液2）.常用机体改进剂：硝酸盐（NH4+ Ni2+ Ca2+）磷酸盐（Na+ NH4+）3）.应用实例 : 磷酸铵，硝酸铵和TritonX-100

13、可改善血清中铜锌的测定 磷酸氢胺，硝酸铵测定血铅可提高灰化温度至1000 硝酸镍可使测定砷和Se的灰化温度到1000 磷酸铵可使测定Cd的灰化温度增至8002、酸提取法 1.硝酸提取，测定血铅.6mol/L 硝酸离心取上清液。标准物质 被测成分的含量是已知的2，盐酸提取3，三氯乙酸（固体）。铁（有效）提取+2价铁3、矿物化法（无机法处理）（二）有机物分析的样品处理（p11）第五节 铅一、接触途径：铅矿，开采，冶炼二、代谢物和生物监测指标（一）动力学过程.1、吸收 1）呼吸道：铅尘烟蒸汽 2）消化道：铅尘 3）皮肤，无机物不吸收有机铅化合物可被吸收（四乙基铅）2、分析：起始分布在血中有95%与红细胞结合最终主要以磷酸盐沉积于血管中，其次是肝肾脑等3、生物效应：抑制血红蛋白的合成1）抑制5氨基乙酰丙酸脱水酶，导致血尿中-ALA增加2）抑制粪川啉元氧化酶3）抑制亚铁螯合酶4、排除：吸收的铅主要经尿排出，尿铅生物半减期较长。（二）铅接触的生物监测指标 1、血铅：直接反映近期接触铅的情况 2、尿铅：反应机体中铅的负荷量，是铅中毒的辅助诊断指标 3、生物效应指标：1）尿中ALA 2）血中铅原卟啉