缓冲液常用试剂培养基的配制方法Word文档格式.docx

1、7.4 约70mL 7.6约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5 M Tris-HCl组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L 配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris

2、溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。3、10TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。4、3 M 醋酸钠组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2）配制量 100mL 配置方法 1. 称取40.

3、8gNaOAc3H2O置于100200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。4. 高温高压灭菌后，室温保存。5、PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO41.42 g KH2PO40.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。上述

4、PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵 配制量 100mL 配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.使用0.22m滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris- HCl平衡苯酚 配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，

5、结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下

6、放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇

7、配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4保存。9、10（W/V）SDS组份浓度 10（W/V）SDS 配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68加热溶解。 2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。10、2 N NaOH 组份浓度

8、2N NaOH 配制量 100mL1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl 配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。2. 室温保存。12、5 M NaCl组份浓度 5 M NaCl 配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4保存。13、20（W/V）Glucose组份浓度 20（W/V）Glucose配制量 100mL配置方法 1. 称取20g Glucose置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100mL。3. 高温高压灭菌后，4保存。14、Solution I组份浓度 2