1、枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】、金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】、大肠埃希菌【CMCC(F)44102】、白色念珠菌【CMCC(F)98001】、黑曲霉菌【CMCC(F)98003】。四、 方法: 常规法( );培养基稀释法( );薄膜法( );综合法( )。依据中国药典2005年版二部微生物限度检查方法验证实验。 五、 方法验证:细菌、霉菌及酵母菌数测定,进行三次独立实验 ,每次平行实验回收率为70%以上。六、 实 验: (1)菌 液 组 测定所加的试验菌数。(2)供试品对照组 取1m供试液注入平皿中,立即倾入营养琼脂培 养基,做两个平板,按平板菌落计数方法测定其菌落数。
2、(3)试 验 组 平皿法计数,取供试品10g(ml),加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml(1:10),作为供试液。取1ml供试液、1ml试验菌液(50100cfu/ml) 分别注入平皿中,立即倾入营养琼脂培养基,每株菌做两个平板,按平板菌落计数方法测定其菌落数。(4)稀释剂对照组 试验时,可用相应的稀释剂替代供试品,加入1ml试验菌(50100cfu/ml),立即倾入营养琼脂培养基,每株菌做两个平板,按平板菌落计数方法测定其菌落数。七 、结 论: 通过方法学验证实验证明, 采用常规法();培养基稀释法();薄膜法();综合法(),对5株阳性代表菌株回收率均为70%以上。该方法适用于 微生物限度检查复核人: 试验人:试验记录(1)批号: 验证日期:试验组及接种量(1) 菌 液 组(菌液1ml / 皿)(2)供试品(稀释剂)对照组 (1ml / 皿)(3) 试 验 组【供试液(稀释剂)1ml菌液1ml / 皿】验证菌及稀释倍数大肠埃希菌10-金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌细 菌 霉 菌 培养时间及温度小时菌落数A、试验组回收率:【(3)(2)】(1)100%B、稀释剂对照组回收率:(3)AB试 验 记 录 (1) 验证日期: 年 月 日 实 (供)(稀)试 验 记 录 (2)试 实批号: 验证日期: 年 月 日 实 验 记 录 (3) 验证日期:(稀