镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察_精品文档Word文档格式.doc

1、在肝脏中，镉易与巯基结合从而诱导金属硫蛋白生成镉一硫蛋白【1】，因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用【2】，但若镉在短期内大量转运到肝脏，便导致肝内金属硫蛋白相对不足，不能与镉有效结合而引起肝功能障碍，这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一。【3】有研究发现，染镉后，从外观上看，小鼠肝脏体积肿大，肝叶肿胀明显，肝叶间有粘连、边缘变钝，颜色紫黑，质地变硬。【3】镜下肝实质细胞的肿胀、嗜酸性变、淋巴细胞浸润及核固缩等肝细胞损伤改变。本研究通过动物实验，了解镉对小鼠肝脏的毒性作用，并从氧化应激方面探讨其作用机制。二、实验内容与方法（1）、实验动物：健康成年清洁级昆明种小鼠40

2、只，雌雄各半。（2）、主要试剂与仪器：l仪器：7230分光光度计；显徽镜；分析天平；SIGMA 2K15型冷冻高速离心机；试剂：氯化镉（CdCI2，AR）、HNO3-HClO4、蒸馏水、生理盐水（3）、动物分组与染毒：体重1825g的健康成年清洁级昆明种小鼠随机区组分 为4组，每组10只，雌雄各办临用前以生理盐水配制CdCI2溶液，CdCI2染毒剂量分别为0.5、1.0、2.0mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mlkg体重），对照组注射生理盐水（10mlkg体重），连续染毒三天。各组小鼠最后一次染毒24小时后摘眼球采血或断头取全血，4下用3000r/min离心10分钟制备血清。小鼠

3、处死后迅速摘出肝脏，生理盐水洗净、吸干、称重。血清用于AST、ALT生化指标测定，取部分肝脏用于SOD、MDA测定。三、观察指标1AST、ALT活性的测定：AST、ALT检测试剂盒，比色法。2MDA测定采用：硫代巴比妥酸（TBA）法以1,1,3,3四乙氧基丙烷（TEP）为标准，单位以每克蛋白中与TBA反应物（TBARS）的mol数表示。蛋白质测定采用Lowry法，以小牛血清白蛋白为标准；MDA检测试剂盒，比色法。3SOD测定：SOD检测试剂盒，比色法。4肝重、体重、脏器系数：称重法。5肝匀浆蛋白质测定：考马氏亮蓝比色法四、数据统计处理方法各组检测指标计算均数、标准差，数据各组间比较采用F检验。

4、五、预期实验结果1、随着CdCI2浓度的增长，AST、ALT的活性升高，提示镉对肝脏组织的损伤作用。2、MDA测定的反应物TBARS与CdCI2的染毒浓度呈正 相关，且有效应剂量关系。文献资料：【1】刘杰.用转基因动物研究金属硫蛋白对镉毒性的左右J.中华劳动卫生职业病杂志，1998,16（1）:43.【2】金慧英.急性镉中毒的肝脏损伤机制及金属硫蛋白的保护作用J.中华劳动卫生职业病杂志,1998,16（1）:【3】陈敏，等.镉对小鼠肝脏的毒作用机理探讨J.江苏大学学报（医学版），August 2002,12（4）.【4】Xie JM,Funakoshi T,Shimada H,et al.Co

5、mparative effects of chelating agents in pulmonary toxicity of systemic nickel in miceJ.J Appl Toxicol,1996,16:317.【5】谢吉民，胡继岳，朱卫华.等.新型螯合剂对镍致小鼠肝脏毒性的影响J.中华劳动卫生职业病杂志.1997.15（6）:325.【6】谢吉民，胡继岳，朱卫华.等.几种二六代氨基甲酸盐解镍致小鼠肝肾毒性作用比较J.江苏医药.1998.24（增刊）:521.【7】李宏,张文昌,汪家梨,黄凌群.镉的雌激素样作用及相关机制体内的实验.J毒理学杂志.2005.19（3）:231.