1、入射光为平行单色光且垂直照射.吸光物质为均匀非散射体系.吸光质点之间无相互作用.辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学 现象发生,标准曲线的制作过程,1.系列标准溶液的配制:配制待测物质(用分析纯或光谱纯)的标准溶液,并稀释成 不同的倍数,使之成为一系列已知准确浓度的标准溶液(一 般57份),并且浓度应在分光光度计的测定范围之内。,标准曲线的制作过程2.标准溶液吸光度的测定:在待测物最大吸收波长下依次 测定标准溶液的吸光度。,标准曲线的制作过程,从浓度由低到高依次测定,测试过程不必用水润洗,只需用待测溶液 同化。同化过程为防止溶液流下来不易擦拭,每次倒去溶液后应将吸 收池倒扣在滤纸上
2、吸去溶液。,标准曲线的制作过程,用滤纸吸干池外液滴,再用镜头纸轻轻擦拭后放入比色管架进 行测定,记录每一标准系列溶液相应的吸光度值,计算出标准 曲线方程。,标准曲线的制作过程,思考题:标准曲线线性好准确度就一定高吗?标准曲线线性好,只能说明制作者的精密度比较高,并 不能代表测试时准确度也高。如何验证曲线的准确度呢?配制已知准确浓度的标样,采用与制作标准曲线时相同 的测定方法测定其吸光度,然后计算其浓度,与标准值相 比较。,标准曲线的制作过程3.如何配制比赛中的待测试样,使其浓度正好处于标准 曲线的中心?以2016年技能竞赛磷含量的测定曲线为例:中 心 点 的 浓 度 为 80g=0.08mg
3、10mLCmgmL=0.08mgCmgmL=0.008如果我们用比赛时配制的磷标准溶液0.5mgmL来配制 500mL,那么移取的磷标准溶液 VmL=500mL0.008mgmL0.5mgmL=8mL,标准曲线制作时的注意事项,仪器预热至少30分钟。比色液制备添加试剂数量与顺序正确;比色溶液稀释至刻线。吸收池操作进行配对测定;手必须拿吸收池毛面;,标准曲线制作时的注意事项,比色液倒入吸收池体积的2/33/4;用滤纸吸干池外液滴,再用擦镜纸擦干;吸收池内应无气泡;吸收池放在吸收池架中应垂直;,标准曲线制作时的注意事项,调换溶液时应用蒸馏水洗三次再用被测溶液洗三次,每次洗涤用量在吸收池体积的1/3
4、1/4(若从稀浓度 测到高浓度时,可直接用被测溶液洗吸收池);吸收池清洗不能用腐蚀吸收池的洗涤液;每测一个试样,应进行参比校正。,标准曲线制作时的注意事项,4.测定吸光度待仪器稳定后进行测量;从低浓度测量到高浓度;测量时溶液不能滴到仪器上;测定的吸光度读数范围应在0.2 0.8范围之间;,标准曲线制作时的注意事项,5.结束工作仪器关闭正确;吸收池清洗干净后倒放在滤纸上;玻璃仪器清洗;仪器记录登记;废液按规定要求处理;桌面清洁,物间摆放整齐。,用EXCELL绘制标准曲线,1.输入数据,用EXCELL绘制标准曲线,2.选择数据组,1.鼠标圈定用作 X和Y轴的数据,用EXCELL绘制标准曲线,3.选择图形类型,1.点击图表向导,2.选择散点图,3.点击下一步,用EXCELL绘制标准曲线,4.插入图表,点击下一步,用EXCELL绘制标准曲线,书写标题等,用EXCELL绘制标准曲线,作为新工作表插 入,用EXCELL绘制标准曲线,选择数据点,按 右键添加趋势线,用EXCELL绘制标准曲线,类型中选择线性,选项中将后三项 勾起,用EXCELL绘制标准曲线,得到图表后,点击右键,选择“绘图区格式”“清除”等选项,可对图形底色、线条颜 色、数据点的大小、网 格线进行修改,