新冠核酸检测结果分析、报告与解释（新冠肺炎核酸检测学习专家课堂）优质PPT.pptx

1、即时检测（POCT）（4个）基因测序：将测序结果与已知的SARS-CoV-2序列做同源性比对（1个）杂交捕获法：1个已有23个获NMPA批准的新冠核酸检测试剂（截至7.13）,qRT-PCR法检测SARS-CoV-2,检测原理：根据SARS-CoV-2基因序列设计引物和TaqMan探针，采用实时逆转录多重RT-PCR法扩增SARS-CoV-2基因和内标基因（常 用RNase P基因，非竞争性内标），定性检测样本是否存在SARS-CoV-2。靶标基因：1、2、3个不等，常为2个靶标。核酸提取和扩增：根据所用试剂的说明书操作。样本保存液、核酸提取试剂应与核酸扩增试剂配套。有些核酸提取试剂易受胍盐或

2、保存液中特殊成 分的影响，影响核酸提取效果。质控样本：试剂空白、阴性、弱阳性、阳性质控样本,扩增仪参数设置,以ABI Prism 7500和达安基因股份有限公司双靶标检测试剂为例在荧光定量PCR仪上设置参数：设置探针检测模式：Reporter1：FAM（N基因），Quencher 1：NONE；Reporter 2：VIC（ORF1ab基因），Quencher 2：Reporter3：Cy5（内标基因），Quencher3：Passive Reference：NONE设置样本检测位置：打开“Setup”窗口，按样本对应顺序设置阴性质控品（NTC）、阳性质控品以及未知样本（Unknown），并在

3、“Sample Name”一栏中设置样本号设置扩增条件：打开“instrument”窗口，根据试剂盒说明书设置循环条件,PCR循环条件的设置,设置完成后，保存文件（年月日+项目+批次），运行程序。,扩增结果分析流程,扩增结束后保存结果将原始扩增曲线由对数图谱转换为线性图谱，对每个检测基因（ORF1ab、N、内标）分别进行分析，分别调节其基线和阈值，点 击Analysis获得分析结果先分析质控样本结果，再分析临床样本结果应分析每个样本的所有扩增曲线在“Report”窗口读取检测结果,结果判断标准,阳性判断标准：ORF1ab和N基因Ct值40，且有明显的S型扩增曲线阴性判断标准：ORF1ab和N基

4、因无扩增曲线或Ct值40，且内对照有扩增曲线可疑判断标准：ORF1ab和N区，仅有其中一个Ct值40，且有明显的S型扩增曲线复检规则：对于检测结果可疑的样本，进行复检。若复检结果一致，判断样品为新型冠状病毒阳性；若复检均为阴性，判断为未检测到新型冠状病毒RNA。靶基因和内标均无扩增曲线，进行复检。阳性样本采用第二种试剂复检，或用灵敏度更高的试剂或方法复检。,基线（baseline）：产物积累的荧光信号能被仪器检测到的最下限。,循环阈值（cycle threshold,CT）,20200427第8批N基因扩增结果,20200427第8批ORF1ab基因扩增结果,20200427第8批内标基因扩增

5、结果,20200427第8批阳性质控品,20200427第8批弱阳性质控品（卫健委提供，不带内标）,20200427第8批试剂空白,20200427第8批阴性质控品,0424第2批临床样本内标弱阳性，复查,20200713第6批H8内标未扩增，复查,20200420第2批内标基因结果试剂空白和弱阳性质控品内标污染,20200427第13批内标基因结果 弱阳性质控品内标污染,20200425第1批阳性质控品结果（右图）靶标基因Ct值降低34，内标基因Ct值大于40，阳性质控品失控,20200708试剂空白的扩增曲线,全国第二次室间质评N、ORF1ab和内标结果,N基因结果,ORF1ab结果,内标

6、结果,结果报告,报告中应有以下基本信息：患者姓名、性别、年龄、标 本类型、诊疗卡号、条码号、科别、床号、检测方法、标 本接收时间、报告时间、检 测者和审核者签名等。,结果解释,报告方式：阴性/阳性或检出/未检出，应统一阴性或未检出的解释：患者没有感染新冠病毒或检测样本中的病毒载量低于试剂检测限阳性的解释：患者感染了新型冠状病毒临床高度怀疑新冠病毒感染而检测结果阴性时，建议重新采集或更换部位采集样本重测应避免报告不规范，如病毒名称写为COVID-19阳性结果应在12h内进行传染病上报和后续流行病学调查工作,报告时限,6小时内,12小时内,24小时内,临床假阴性问题,即临床高度疑似COVID-19

7、（临床症状和影像学支持），而新冠 核酸检测结果多次或始终阴性。其原因如下：患者体内病毒载量低，样本中的病毒量达不到试剂的最低检测限所使用的病毒核酸检测试剂灵敏度不够高实验室未严格遵循临床基因扩增检验的质量管理，如样本灭活以后未及时进行核酸提取、核酸提取程序未用标准程序等样本的质量问题，是否规范采集、是否采集到含病毒的细胞病毒在流行过程中发生基因突变，可能导致假阴性与疾病进程有关，疾病不同阶段不同检测样本的阳性率不同,实验室检测的假阴 性,所采集样本中病毒载量高于所用检测试剂的检测限，而实验室确没有检出。需要实验室严格遵循临床基因扩增检验的质量管理，尽量避免。,检测方法的局限性,样本检测结果与样本采集、处理、运送及保存质量有关，不合理的样本采集、转运、储存及处理过程均可能导致错误的检测结果样本处理时应严格按操作规程操作，否则可能出现假阳性或假阴性结果检测结果与检测试剂的灵敏度有关病毒在流行过程中发生基因突变，可能导致假阴性结果,谢谢!,