1、葡糖基转移酶(GTF/GTase)葡聚糖结合蛋白(GBP)果糖基转移酶(FTF)果聚糖酶(Fru)表面蛋白(PAC、SPA),细菌基因标记酶名称氨基酸数目合成的葡聚糖,主要致龋菌的葡糖基转移酶及其基因,*1SG:非水溶性葡聚糖SG:水溶性葡聚糖葡糖基转移酶(GTF/GTase)由于合成葡聚糖而诱导细菌对牙面的黏附,葡糖基转移酶及葡聚糖结合蛋白结构,氨基端信号肽,酶催化活性区,羧基端氨基酶重复区,葡聚糖结合蛋白,葡糖基转移酶,N端/氨基端,C端/羧基端,变性链球菌葡萄糖基转移酶C端缺损对功能的影响ISG:非水溶性葡聚糖,变异链球菌候选致龋基因,牙周病相关细菌,伴放线放线杆菌actinobacil
2、lus actinomycetemcomitans,牙龈卟啉菌Prophyromonas gingivalis,中间型拟杆菌Bacteroid intermedia,核酸杂交法检测牙周病相关细菌,核酸杂交:两条核酸单链可以通过序列互补形成双链化合物的过程。有DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA等杂交类型。核酸杂交是一种很重要的、被广泛应用的技术。探针 probe:是一小段单链DNA或者RNA片段用于检测与其互补的核酸序列 探针的敏感性检测到所有属内的细菌探针的特异性性检测某个特异性细菌 探针:DNA、oligonucleotide核酸杂交的应用及临床意义:1、省时大样本研究2、早期诊
3、断3、病程判断4、监控疗效、调整治疗方案,微生物的分类和鉴定,传统方法:菌落形态、革兰氏染色、生化反应等。依赖于菌的分离和培养。很多菌无法检测(可能超过99%)。,基于16S rRNA基因分析的口腔微生物分类和鉴定,原理:rRNA基因存在于所有细胞生物中,存在于所有细胞生物中,具有功能和进 化的同源性,可作为一个通用的分子指标对各种微生物进行分析比较。16S rRNA编码基因有由保守区和可变区组成。保守区:细菌共有 可变区:种属特异性方法:提取和纯化总DNA用通用或专一引物PCR扩增16S rRNA基因PCR纯化、克隆、构建16S DNA文库筛选克隆、测序及序列分析结果判断,16S rRNA基
4、因分析原理,第五节口腔遗传病生物学基础,口腔遗传病生物学基础,染色体病:染色体结构数目异常单基因病:单个基因突变多基因病:多个单个基因突变线粒体病:线粒体中DNA改变体细胞遗传病:体细胞遗传病只在特异的体细胞中发生。体细胞遗传物质的改变,颅骨锁骨发育不全(CCD)家族成员疾病表现度差异,B:患病母亲(II:2)全颌曲面断层片 D:患病女儿(III:1)全颌曲面断层片,A:家系图 C:II:2胸片 E:III:1胸片,颅骨锁骨发育不全第6染色体p21基因突变,激活蛋白酶基因第16号外显子发生了同义突变,该突变未改变,所编码 的氨基酸(甘氨酸)似乎是一个沉默突变。然而,该突变导致了第16外 显子内
5、的一个隐蔽剪接供体序列(AGGGCAAAAG)的激活,形成异常剪接,导致第16外显子编码序列的丢失和移码。,同义突变引起剪接异常,FAM83H基因突变导致无活性的截短蛋白-釉质发育不全,A,B,A:釉质发育不全口内照及全口曲面断层片:示釉质钙化不全及病变未累及根管B:箭头示FAM83H mRNA第973个碱基由C置换为U后导致其编码的氨基酸由精氨酸变为终止码,牙本质磷蛋白 DPP基因 突变后改变氨基酸序列E,AD:牙本质发育不全患者口内照及全口 曲面断层片E:牙本质发育不全患者DPP基因移码突变 后改变氨基酸序列,S等磷酸化位点缺失 导致疾病发生,遗传性牙本质发育不全,突变型EDA基因的mRN
6、A第855个碱基G缺失后导致移码突变,产生 一个截短蛋白EDA基因移码突变导致截短蛋白,无汗性外胚层发育不全,EDA蛋白三维结构模拟图,野生型EDA蛋白,突变型EDA蛋白(c.855delG),第六节口腔肿瘤分子生物学,一、细胞增殖与细胞凋亡(一)细胞增殖(二)细胞凋亡二、口腔肿瘤发生的分子机制(一)癌基因(二)抑癌基因三、口腔肿瘤转移的分子机制(一)口腔肿瘤细胞转移过程(二)口腔肿瘤细胞转移的分子机制四、口腔肿瘤相关基因的筛选与功能研究策略,一、细胞增殖与细胞凋亡,(一)细胞增殖细胞增殖是指通过细胞分裂增加细胞数量。细胞周期是指细胞完成一次有丝分裂的过程。真核细胞的细胞周期分为4个时期:DN
7、A合成前期(G1期)DNA合成期(S期)DNA合成后期(G2期)分裂期(M期)休眠细胞暂时退出细胞周期,但在适当的刺激下 可重新进入细胞周期,称G0期细胞。,对细胞分裂增殖有调控作用的细胞生长因子。周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK),这两种蛋白是细胞周期进 展的主要推动力。CDK抑制剂,负责负向调控CDK的活性。细胞周期检查点调控蛋白,负责监控细胞遗传物质的 忠实复制。肿瘤是失去调控的非正常细胞增殖。,4.细胞周期的调控,细胞凋亡是一种程序性细胞死亡,是一种主动的 细胞死亡。细胞凋亡的过程受到了严格的调控,细胞凋亡的 缺陷可以导致细胞的过度增生。细胞凋亡主要途径:线粒体/细胞色素C途径。通过TNF受体家族激活Caspase-8。,(二)细胞凋亡(apoptosis),二、口腔肿瘤发生的分子机制,(一)癌基因原癌基因:调控细胞生长和增殖的正常细胞基因。突变后转化成 为致癌的癌基因。同时也是细胞生长必不可少的关键 基因癌基因:顾名思义,癌基因是一类会引起细胞癌变的基因。在 癌症中,原癌基因发生突变或表达水平过度增加后就 会形成能够致瘤的癌基因。,(二)抑癌基因,抑癌基因编码的蛋白产物抑制细胞生长或引起 细胞死亡。抑癌基因的突变或表达缺失可以导致其抑制细 胞生长功能丧失,有利于癌症的发生。,抑癌基
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