应用说明 Trans-Blot SD Cell[整理版]Word格式文档下载.docx

1、kitTrans-Blot SD DNA blotting Section 1 Introduction 使用说明 Trans-Blot SD Cell6Trans-Blot SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer CellCatalog Number 170-3940 BIO-RADNote 为了保证 Trans-Blot SD semi-dry electrophoretic transfer cell 的性能最佳, 请先阅读使用说明书。WarrantyBio-Rad 实验室 1 年保证 Trans-Blot SD semi-胜褐仟抚车疫吏兆赠篓英钉泉百笔

2、辉曹惫卿屡酿炳舞申钱过鸟娃拥滞迟鞭战汝燕妆莽铅庄厚碌棒妇贝耘磕锡货信蔡娥挣钉氖秽虽蜘绑钳邻浩犹悔老通过 SD cell，PCR 片断、质粒和载体 DNA、RNA，都可用来转膜。总体积：37cm24cm11cn最大凝胶：25cm18.5cm清洁方法：注意不可将本仪器浸泡在溶液中。特别要注意阳极板的清洁，以免划破或损伤表面。阴极板（不锈钢的）可以用温和的擦拭以除掉可能黏附的盐沉淀。 整个仪器可以定期的拆卸，水洗清除盐沉淀。对化学药品的兼容性：该仪器不可以使用含氯烃基化合物如氯仿，芳（族）烃如甲苯，或丙酮。不是所有有机溶剂都可以使用的。 Section 2 Equipment and Reagent

3、s 使用说明 Trans-Blot SD Cell6Trans-Blot SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer CellCatalog Number 170-3940 BIO-RADNote 为了保证 Trans-Blot SD semi-dry electrophoretic transfer cell 的性能最佳, 请先阅读使用说明书。设备与试剂主要介绍仪器型号，更换仪器的型号，Protein Blotting, DNA/RNA Blotting 用到的试剂盒和膜的编号（见 p2-5）。 Section 3 Safety Instructions 使用说

4、明 Trans-Blot SD Cell6Trans-Blot SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer CellCatalog Number 170-3940 BIO-RADNote 为了保证 Trans-Blot SD semi-dry electrophoretic transfer cell 的性能最佳, 请先阅读使用说明书。1. 不要弄错电源极性。否则，不锈钢电极板将会被腐蚀生锈，这时需要以温和的清洗剂清洁电极。2. 不要让仪器超过 25V。否则电极将被烧毁。3. 除非有特别的原因，不要调整 transfer buffer 的 pH 值。请按照使用说明

5、操作。无故调整缓冲液的 pH 值，将使 buffer 的电阻降低。初始电流超负荷。Model 200/2.0 power supply可保证较好的监控电阻，提供合适的电源。4. 转移时间过久是不提倡的。时间过久仪器会过热，超过 2 小时 的转移，仪器就会烧毁。Model 1000/500 power supply5. 电源的要求。Trans-Blot SD cell 需要使用微电脑控制的压器（编号：165-4761 和 165-4762），或者Model 250/2.5 power supply165-4710 和 165-4711）。请不要 使用稳压器。稳稳压器（编号：6. 不要在环境温度超

6、过 50的情况下使用。 Section 4 Trans-Blot SD Assembly 使用说明 Trans-Blot SD Cell6Trans-Blot SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer CellCatalog Number 170-3940 BIO-RADNote 为了保证 Trans-Blot SD semi-dry electrophoretic transfer cell 的性能最佳, 请先阅读使用说明书。由于分子量、pI 和凝胶孔径的不同，转膜时间有差异，并不一定需要额定的最大时间。4.1.准备工作4.1.1. 准备转移缓冲液（trans

7、fer buffer 见 Section 5, p10）。Buffer 的准备是很重要的。不要无故调整缓冲液的 pH 值。不适当的 buffer 将使仪器过热出错。请使用高质量，试剂等级的药品。有杂质的药品影响 buffer 的传导性变大，大分子较难转移。4.1.2. 电泳后在 transferbuffer 中平衡凝胶。平衡可以去处凝胶中所带的 electrophoresisbuffer 中的盐和清洁剂。如果不去处盐，将影响 buffer 的传导性变大，并使仪器过热（在转移过程中）。另外，低浓度的凝胶（12%的聚丙烯酰胺）在 buffer 中会缩水。平衡使凝胶调整在最终大小，便于电泳转移。平衡

8、所需时间取决于凝胶的浓度。如0.75mm 的 SDS-PAGE gel 需要 15min。可以平衡多次。4.1.3. 根据凝胶剪裁膜到适宜大小。以 45 度夹角将膜缓慢滑入 transfer buffer，并浸泡 15- 30min，使完全湿润。否则易起气泡，气泡会阻滞转移。为防止膜被污染，请带手套或使用镊子。4.1.4. 根据凝胶剪裁滤纸到适宜大小。需要加厚型滤纸 2 张或厚滤纸 4 张或薄滤纸 6 张。在 transfer buffer 中完全浸透滤纸。4.1.5. 如果一次转膜超过 1 张（full-size），以透析膜隔开。透析膜也要完全浸透 transfer4.2.转膜方法buffe

9、r。推荐 Spectr/PorTM 透析膜。为防止膜被污染，本过程请带手套操作。标准转膜示意图：使用说明4.2.1. 打开外盖和不锈钢电极板。4.2.2. 先在铂金阳极板放上预先浸泡过的厚滤纸。用移液管或玻璃棒在滤纸表面滚动，驱除气泡，排出空气。4.2.3. 放置预先浸泡过的转移膜，排出空气。4.2.4. 放置平衡过的凝胶，排出空气。凝胶放在膜的中间。4.2.5. 放置预先浸泡过的厚滤纸，排出空气。4.2.6. 若同时转移超过 1 张全大小的膜，以预先浸泡过的透析膜隔开，然后在继续 2-5 步。若是小的凝胶，可以将它们挨着平铺在一起转膜。排出所有空气。4.2.7. 小心的装上电极板。装好电极板

10、，使啮合，但不要弄坏滤纸堆。4.2.8. 安上外盖。插上电源。正常的转膜是从阴极到阳极，红色插红色，黑色插黑色。不要弄反，否则不锈钢板就会坏掉。4.2.9. 打开电源。转移较小的膜 15-30min，10-15V。大的膜 30-60min，15-25V。额定电流： 大凝胶 3mA/cm2,小凝胶 5.5mA/cm2，过大会过热烧毁一起。一些蛋白可能会功过膜转移到滤纸上。4.2.10. 转膜完毕，关闭电源开关，切断电源连接。打开外盖和阴极板，去掉滤纸与透析膜（如果有的话）。转膜的效率可以以此为参照：Bio-Rads Silver Stain KitCoomassie blue R-250 pro

11、tein stain使用凝胶染料或者。Biotin-Blot Total Protein Stain另外，也可以使用预染的分子量标准，或将部分膜染色：全蛋白用 colloidal gold（胶状的金）Biotin Blot Tatal Protein Stain ，或 anionic dye（阴离子染料）Amido Black。Zeta-Probe membrane 此膜可用染色。酸性转膜示意图：如果使用酸性转移缓冲液，转膜方向将从阳极到阴极。4.3.1. 打开外盖和不锈钢板。4.3.2. 同 4.2.2。4.3.3. 同 4.2.4。4.3.4. 同 4.2.3。4.3.5. 同 4.2.5 至同 4.2.10。 Section 5 Buffer Formulation 使用说明 Trans-Blot SD Cell6Trans-Blot SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer CellCatalog Number 170-3940 BIO-RADNote 为了保证 T