环境微生物检测PPT资料.pptx

1、采样点心远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处。检测（jin c）点数越多越准确，以2030个测点数为宜，最少测点数为56。,第六页，共51页。,（3）过滤法 过滤法是在负压下抽滤空气，使空气通过经灭菌的微孔滤膜，空气中细菌被截留在膜上，然后将膜转移（zhuny）到培养基上，使滤膜与培养基完全贴紧，倒置于37恒温箱培养24h。通过计平板上的菌落数，测定空气中细菌的数量。,第七页，共51页。,空气中微生物总数目前用CFUm3，计量。即每立方米空气落下的细菌数，一般以室内空气中细菌总数5001000 CFUm3以作为（zuwi）空气污染指标。,第八页，共51页。,11.1.2 空气（kng

2、q）微生物污染的控制,控制空气微生物污染，必须减少空气中微生物的来源，特别是微生物污染严重的医院，肉类加工等行业废水废物的处理消毒工作；搞好室内外环境卫生。减少微生物滋生（zshng）；绿化造林也是净化市气、除尘、杀菌和吸收有害气体的重要途径；另外空气消毒和空气净化器对净化空气也起一定的作用。,第九页，共51页。,日本建议的评价空气清洁（qngji）程度的标淮见表,第十页，共51页。,11.2 水的微生物检测（jin c）及控制11.2.1 水质的细菌学检测（jin c）,我国生活饮用水卫生标准GB5749-85关于（guny）饮用水中的细菌标准与大肠菌群数量标准为1细菌总数100个/ml2大

3、肠菌群 3 个/L,第十一页，共51页。,一、伤寒杆菌,病症：伤寒或副伤寒。表现：持续发烧，牵涉到淋巴组织，脾脏肿大，躯干上出现（chxin）红斑，胃肠壁溃疡产生腹泻。,伤寒（shnghn）沙门氏菌,第十二页，共51页。,二、痢疾杆菌,痢疾杆菌可引起（ynq）细菌性痢疾（与阿米巴痢疾不同），症状为急性腹泻，通常大便中有血及粘液，某些病例中有发烧。,第十三页，共51页。,三、霍乱弧菌,病症：霍乱症状（zhngzhung）：轻型病例中，只造成腹泻。在较严重或较典型的病例中，除腹泻外，症状（zhngzhung）还包括呕吐、“米汤样”大便、腹疼和昏迷等。病程短，严重的常常在症状（zhngzhung）出

4、现后12h内死亡。,电镜照片使用的是结晶（jijng）紫单染色，若革兰氏染色则为阴性红色,第十四页，共51页。,四、寄生虫,真菌一般通过接触传染，不通过水传播，引起疾病的原生动物和小型后生动物也由水传播，通常称为寄生虫。在目前发现的几千种原生动物中只有20种能引起人类疾病传播方式：除了饮水不卫生外，更多的是通过食物以及昆虫血液（xuy）传播如疟疾是蚊子传播，食用生肉感染肉类寄生虫等,第十五页，共51页。,11.2.2 水质（shu zh）指示微生物大肠菌群,大肠菌群是人肠道中正常的寄生菌，是一群需氧和兼性厌氧的，能在37，24h内使乳糖发酵产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌，又称总大肠菌群。大肠菌群

5、作为水体被粪便（fnbin）污染的指标，也是饮水、食品等的细菌学常规检验指标之一，通常用“大肠菌群指数”和“大肠菌群值”表示。,第十六页，共51页。,这些寄生菌通常与人体构成互利共生关系，当人体免疫力下降时，他们则有可能成为引起肠炎的致病菌，他们中的个别（gbi）变种还会变为极具毒性的病菌。如大肠埃希氏菌可引起幼儿腹泻，引起美国和日本传染病流行的O-157也是大肠埃希氏菌的变种菌株。,第十七页，共51页。,中国（zhn u）水质标准中规定的大肠菌群数（个L）饮用水 3 游泳池水 100 地表水 第一级 500 第二级 10000 第三级 50000,第十八页，共51页。,11.2.2.1 大肠

6、菌群检测的目的（md）和原理,（一）生理习性与肠道病原菌类似，即在外界的生存（shngcn）时间基本一致；（代表性）（二）在粪便中的数量较多；（比病原菌多，不会漏 检）（三）检验技术较简单;（操作方便）,第十九页，共51页。,11.2.2.2 大肠菌群的检测（jin c）方法,常用的大肠菌群的检测方法有多管发酵（f jio）法与膜滤法。1多管发酵（f jio）法（即最大可能数法，MPN）发酵（f jio）法是大肠菌群测定的国家标准方法。分为三步。A初发酵（f jio）目的：水中大肠菌群存在与否的初步判断。,第二十页，共51页。,A.初发酵（f jio）,方法为将水样置于糖类液体培养基中，在一定

7、温度下，经一定时间培养后，观察（gunch）有无酸和气体产生，即有无发酵，而初步确定有无大肠菌群存在。如采用含有葡萄糖或甘露醇的培养基，则包括副大肠杆菌；如不考虑副大肠杆菌，则用乳糖培养基。由于水中除大肠菌群外，还可能存在其它发酵糖类物质的细菌，所以培养后如发现气体和酸并不一定能肯定水中含有大肠菌群，还需根据这类细菌的其它特性进行下两阶段的检验。,第二十一页，共51页。,试验中的培养基中加入了酸碱指示剂紫色的溴甲酚紫，产酸时指示剂变黄，同时（tngsh）培养基中口朝下放置了装满同样培养基的小试管，产气时小试管中会封闭一段气体，被作为培养中是否产气的依据。,第二十二页，共51页。,目的：鉴定产酸

8、产气菌的染色特征、好氧与否、芽孢特征。根据：大肠菌群在固体培养基上可以在空气生长，革兰氏染色呈阴性（ynxng）和不生芽孢的特性,B.平板（pngbn）分离,第二十三页，共51页。,复发酵（f jio）,在此阶段，先将上一试验产酸的菌种移植于品红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基）或伊红美蓝培养基表面（划线接种是为了分离出单菌落，防治菌落不纯干扰结果），这一步氧气可以阻止厌氧芽抱杆菌的生长，而上述培养基所含染料物质也有抑制许多（xdu）其它细菌生长的作用。,第二十四页，共51页。,C.复发酵（f jio）,目的：验证将可疑的菌落再移植于糖类培养基中，观察其是否发酵，是否产酸产气，最后肯定有无大肠菌群

9、存在。对于（duy）自来水厂出水，初步发酵试验一般都在10个小发酵管和2个大发酵管（或发酵瓶）内进行，复发酵试验则在小发酵管内进行。根据肯定有大肠菌群存在的初步发酵试验的发酵管或瓶的数目及试验所用的水样量，即可利用数理统计原理，查表得出结果。,第二十五页，共51页。,（2）膜滤法 使用的滤膜是孔径为0.450.65m的微孔滤膜；转移（zhuny）至伊红美兰平板上。,第二十六页，共51页。,11.2.3 水微生物污染的控制 控制水体微生物的污染首先必须从源头做起，即控制排放废水，尤其是医院废水等微生物的含量（hnling）,避免大量有害微生物进入水体；其次，消除微生物兹生的环境。净化水体，对地表

10、水、游泳池水要进行定期检测，必要时加入消毒剂以杀灭微生物。,第二十七页，共51页。,11.3 发光（f un）细菌的微毒检测,发光细菌法是20世纪70年代后期提出的一种微生物检测环境水质毒性的新方法。发光细菌法简便、快速、灵敏、精度高，凡有毒化合物、废水、废物的生物毒性均可测定（cdng）。发光细菌法已被中国国家环境保护总局规定为测定（cdng）水环境急性毒性的国家标准。,第二十八页，共51页。,11.3.1 发光细菌检测（jin c）的原理,细菌的发光过积是菌体内一种新陈代谢的生理过程。菌体含有荧光素、荧光酶、ATP等发光要素，在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。毒物浓度与菌体发光

11、强度呈线性负相关关系，发光细菌法就是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对细菌发光强度的抑制程度进而反映环境中毒物毒性大小，用发光度表征（bio zhn）毒物所在环境的急性毒件。,第二十九页，共51页。,第三十页，共51页。,11.3.2 发光细菌（xjn）法检测的操作,目前国内外发光细菌的测定常用的有两种方法。新鲜发光细菌培养测定法 即将发光菌接种于液体培养基中，在适当条件下（200.5）振荡培养到对数生长期，配制含3NaCl盐度的适当浓度（nngd）的菌悬液加入测试管中，再加入待测液，使之与菌液接触，作用515min后，读出并记录对照管和样品管发光强度。此法操作较为简便。,第三十一页，共51页。

12、,冷冻干燥发光细菌制剂测定法 即把培养到对数生长期的发光细菌，以冷冻干燥法制成干粉剂（fn j），使用时加入冷的2NaCl溶液复苏，使其恢复到原来的生理状态和发光水平，然后用于测定。这是国家标准方法，其优点是可实行测定的质量控制。冻干粉可长期保藏方便使用，操作简便，节约时间。,第三十二页，共51页。,11.3.3 发光细菌（xjn）法的应用,在水质监测中的应用在工业废水、固体废物、废气的急性毒性检测中的应用 对重金属急性毒性效应（xioyng）的测定和评价对化学品的毒性评价和安全性评价,第三十三页，共51页。,11.4 污染物致突变性检测（jin c）（Ames）试验,该试验是通过测定有污染物

13、存在时鼠伤寒沙门（shmn）菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his-）菌株发生回复突变的概率来判断污染物的致癌、致突变效应。其阳性结果与致癌物吻合率高达83。列为评价化学物质安全性的首选力法。,第三十四页，共51页。,11.4.1 Ames试验的原理（yunl）和方法,鼠伤寒沙门菌的组氨酸营养缺陷型菌株，在不含组氨酸的培养基上不能生长。但当受到致突变物作用后，大量细胞在遗传物质的特定座位（zu wi）发生基因回复突变而成为野生型，能自行合成组氨酸，此时培养物中虽不含组氨酸。组氨酸缺陷型菌株亦能生长并形成菌落。Ames试验就是通道在培养物中加入待测物，根据不

14、含组氨酸的培养基上组氨酸营养缺陷型茵株长出回复突变菌落数目的多少判断待测物的致突变性。,第三十五页，共51页。,（1）试验菌株 采用（ciyng）鼠伤寒沙门菌变异株TA97，TA 98，TAl00，TAl02四种菌种，又增加了TA1535，TA1537，TA1538共七株。,第三十六页，共51页。,（2）试剂 牛肉膏蛋白（dnbi）陈培养基 牛肉膏5.0g，蛋白（dnbi）胨10.0gNacl 5.0g,水1000mL.pH7.27.4 S9mix 大鼠肝匀浆S9与NADP、G-6-P、KCl、Na2 HPO4、KH2PO4和水配成混合液。,第三十七页，共51页。,（3）菌种鉴定 在试验之前都

15、要进行全面（qunmin）的生物学特性和敏感性鉴定，符合要求才能使用。脂多糖屏障丢失 判定是否是缺陷型R因子 判断菌体是否存在或失去了某种 抗药性质粒。紫外线损伤修复缺陷,第三十八页，共51页。,自发回变回变特性（txng）诊断性试验 组氨酸营养缺陷型（4）操作方法 Ames试验的典型操作方法有平板掺入试验和斑点试验两种。,第三十九页，共51页。,11.4.2 Ames试验（shyn）的应用,检测食品添加剂、化妆品等的致突变性，由此推测其致癌性。检测水源水和饮用水的致突变性，探索较现行方法更加卫生安全的消毒措施。检测城市污水和工业废水的致突变性，结合化学分析，追踪污染源，为研究防治对策（duc）提供依据。,第四十页，共51页。,检测土壤、污泥、工业废物堆肥、废物灰烬的致突变性。以防止维系生命的土壤受致突变物污染后，再通过农作物危害人类（rnli）。检测气态