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1、食用菌论文食用菌生产过程中消毒与灭菌的方法摘要：食用菌生产的环节很多，包括菌种制作、播种、栽培、生产管理、成品采收、产品贮藏等。在这诸多环节中，防污染始终是一个不容忽视的问题。防止污染的关键在于生产环境消毒、培养基灭菌、接种操作、培养管理等技术环节。本文将对食用菌生产过程中消毒与灭菌的方法做一一的讲解。关键词：食用菌 消毒 灭菌中国是食用菌生产的大国。食用菌产业己经成为我国农业产业结构的重要组成部分，现在已经成为广大农民致富的一条重要途径。食用菌不仅改善了人们的膳食结构，而且大量出口，为国家创造了大量外汇收入。目前，食用菌的生产规模越来越大，范围越来越广，展现了喜人的前景。食用菌产业具有两大风

2、险，一是市场风险，二是技术风险。市场风险关键在于消费水平的发展变化。随着国内消费水平的提高，消费市场需求量稳步上升，市场波动相对稳定。而技术风险相对突出。在食用菌生产中始终存在着一个严重的问题，就是污染导致减产，严重的污染甚至导致绝收，给菇农造成极大的损失，因而影响菇农的积极性，进而限制了食用菌生产的更大发展。因此在食用菌生产中如何采取有效措施防污染，是影响经济效益的关键问题。接下来笔者将谈谈食用菌生产过程当中的防污染措施消毒与灭菌1基本概念1. 1消毒消毒是指杀死病原微生物，但不一定能全部彻底杀死病原微生物的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。用于消毒的化学药物叫做消毒剂，例如医用酒精兑

3、制成75%酒精等。1. 2灭菌灭菌是指把目标物体上所有的微生物(包括细菌、芽抱在内)全部彻底杀死的方法，通常用物理方法来达到灭菌的目的。无菌即不含活菌的意思，是灭菌的结果。1. 3无菌操作防止病原微生物进入机体、物体或培养基中的操作技术称为无菌操作。例如一级菌种、二级菌种、三级菌种和菌袋栽培袋中的接种过程即为无菌操作。2消毒剂与灭菌工具设备2. 1常用消毒剂2. 1. 1酒精 利用医用消毒酒精或用95%工业酒精兑制75%酒精，用于器皿、菌种瓶、菌袋表而、接种工具表而消毒。2. 1. 2气雾消毒(剂)盒 主要成分二氧化氯，用于接种箱、接种室、菌种菌袋培养室、菇棚环境消毒。2. 1. 3高锰酸钾

4、强氧化剂，用于器皿、菌种瓶、菌袋表而、接种工具表而消毒。2.1. 4硫磺 用于接种室、菌种菌袋培养室、菇棚环境消毒。2. 1. 5甲醛高锰酸钾烟雾剂 用于接种室、菌种菌袋培养室、菇棚等环境消毒。由于甲醛剧毒危害人与环境，不提倡使用。2. 1. 6来苏儿 用于接种室、菌种菌袋培养室、菇棚环境消毒。2. 1. 7生石灰 用于接种棚、菌种菌袋培养室、菇棚等过道地而的消毒。2. 2常用灭菌工具与设备2. 2. 1酒精灯 常用于食用菌实验室、接种箱、接种室、接种帐内接种等无菌操作。酒精灯点燃后火焰外焰温度达600-750摄氏度。可在几秒时间内杀灭接种铲、接种钩、菌种瓶口表而杂菌;并使火焰上方几厘米内成为

5、无菌区，接种操作同时用于封闭菌种袋(瓶)和被接种袋(瓶)口，防比空间游离杂菌进入。2.2.2紫外线灯 常用于食用菌实验室、接种箱、接种室、接种帐内接种等无菌操作和菌种培养室空气净化。紫外线可以杀灭各种微生物，包括细菌繁殖体、芽抱、分支杆菌、病毒、真菌、立克次体和支原体等，凡被上述微生物污染的表而、水和空气均可采用紫外线消毒。2. 2. 3电力高压灭菌锅 大型容积70-100L,，小型容积10L左右，额定工作压力1. 5MP/平方厘米，灭菌温度121-125摄氏度。常用于接种工具、试管菌种培养基、小容量培养基灭菌。多用于试管母种(一级种)培养基灭菌。使用方便、快捷，灭菌效果好。2. 2. 4超净

6、工作台 超净工作台原理是在特定的空间内，室内空气经预过滤器初滤，由小型离心风机压入静压箱，再经空气高效过滤器二级过滤，从空气高效过滤器出风而吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断而风速，可以排除工作区原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，以形成无菌的高洁净的工作环境。常用于实验室、接种室等菌种生产的无菌操作。2.2.5臭氧离子风机 臭氧是一种强氧化剂、消毒剂和催化剂，在消毒学上属于过氧化物类消毒剂，具有广谱高效杀菌作用。臭氧能破坏或分解细菌的细胞壁，迅速扩散透入细胞里，氧化破坏了细胞内的酶而杀死病原菌。臭氧在水中分解的中间产物氢氧基具有很强的氧化性，可以分解一般氧化剂难以破坏的有机物，而且反应完全

7、、速度快。臭氧为气体消毒剂，其杀菌过程为强氧化作用，使微生物细胞中的多种成分产生反应，从而发生不可逆转的变化而死亡。臭氧灭活病毒是臭氧直接破坏核糖核酸或脱氧核糖核酸。臭氧杀灭细菌和霉菌类微生物是臭氧首先破坏细胞膜，使细胞膜受损，导致新陈代谢障碍并抑制其生长。常用于接种室和培养室消毒。 226燃料高压灭菌锅 容积1.0-1.5立方米，额定工作压力1.5MP/平方厘米，灭菌温度121-125摄氏度。常用于二级菌种、三级菌种和小型菌袋培养基灭菌。2. 2. 7蒸汽高压灭菌柜 容积1.0-1.5立方米，额定工作压力1.5MP/平方厘米，灭菌温度121-125摄氏度。常用于二级菌种、三级菌种和小型菌袋培

8、养基灭菌。228常用蒸汽灭菌灶(槽) 一般为砖混结构底座，上而铺钢筋铁帘或木制帘，帘下设有承重支撑底座、通气道、冷凝水排水孔。灭菌灶(槽)底座高400cm、平面面积25平方米左右，四周边缘台而宽600cm，镶嵌钢筋钩环和钢管立柱。灭菌灶(槽)底座留有1 -2个通气孔和管道，外接常压锅炉供气。2. 2. 9高压蒸汽锅炉 常使用中小型高压蒸汽锅炉，根据灭菌锅容量和菌袋数量来选择锅炉大小。大锅炉供气充足，灭菌效果好。2. 2. l0常压蒸汽锅炉 常使用中小型常压蒸汽锅炉，根据灭菌锅容量和菌袋数量来选择锅炉大小。可以同时用2个小型锅炉供气，加水时可持续供气，供气充足，灭菌效果好。3消毒灭菌方法与注意事

9、项3. 1菌种接种室、接种帐、接种箱和培养室的消毒处理3. 1. 1接种室消毒 经常使用的接种室要每隔5-7天消毒杀菌1次。先用3%来苏儿向地而喷洒，向空气喷雾以及擦洗四壁和桌而进行消毒;借来苏儿喷雾后的湿度，然后用二氧化氯气雾杀菌剂点燃熏蒸，使用剂量依说明书，如果2日内不接种，剂量可加倍;若要准备接种，要在前一天将菌种、接种袋(瓶)、接种工具、工作服放入接种室后，用来苏儿喷雾处理和二氧化氯气雾熏蒸，次日接种前用紫外线灯照射30分钟后，方可接种。接种室的日常湿度不宜过大，也不宜过低，湿度过大容易滋生杂菌，尤其是雨季更要通风降低湿度;过于干燥容易起尘，空间杂菌飞扬增加感染几率。3. 1. 2接种

10、箱消毒 接种箱一般放在接种室内，使用前一定要严格消毒处理，与接种室消毒处理同时进行。接种前一天用高锰酸钾水溶液里外擦洗一遍，再用二氧化氯气雾杀菌剂熏蒸1日，次日使用。接种前将菌种、接种袋(瓶)、接种工具放入接种箱内，用来苏儿喷雾处理和二氧化氯气雾熏蒸30分钟后开始接种。接种箱封闭要严，要有多层纱布通气孔，保持酒精灯氧气供给和杂菌过滤。接种箱接种方便，低成本，接种成功率高。3. 1. 3接种帐消毒接种帐一般安排在接种棚内，接种后菌袋就地培养，接种帐流动作业。接种棚要按照接种室消毒处理方法预先进行消毒杀菌处理。接种帐的消毒杀菌处理与接种室、接种棚相同，每次接种处理一次。一般经一夜熏蒸，烟雾自然消散

11、，即可进入接种。接种帐接种数量大、时间长，最好每帐不超过3 000袋，每次接种时间不超过3小时。接种室(棚)、培养室(棚)一定要保持清洁干净，不宜乱放杂物，尤其是有机物料和杂菌污染袋，要及时清除。采用夏季休闲、阳光照射、雨季开放、阶段消毒杀菌方式来防比环境杂菌积累。3. 2试管母种(一级种)的灭菌3. 2. 1首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水而与三角搁架相平为宜。注意防比水量太少出现干锅现象。3.2.2装入待灭菌工具与试管培养基。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。注意防比物品堵塞排气阀和安全阀通气孔。3. 2. 3清理密封胶圈锅口，加盖封闭，勿使漏气，关闭排

12、气阀。3. 2. 4供电加热，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到0. 05MPa/cmz压力时，停电排除冷空气，直到锅内压力为0，关闭排气阀。供电继续加热，直到0. 15MPa/cmz压力后，持续30分钟。325关闭电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出试管培养基。33原种栽培种(二、三级种)的灭菌通常采用中大型高压灭菌锅(柜)。灭菌操作过程基本与小型高压灭菌锅大致相同，只是增加排污和灭菌时间。当压力达到0. 05MPa/cmz压力时，通过打开底部排水阀排放冷气，排放内锅沉积的污水。如果灭菌物是菌种瓶需达到额定压力持续灭菌时

13、间1. 5 - 2. 0小时。如果是1. 1 kg菌袋需持续灭菌时间2. 0 2.5小时。3. 4栽培袋的灭菌通常采用常压灭菌锅(灶)灭菌。最好用自制的菌袋周转筐，装好料袋，整齐摆放在帘子上，不用铺麻袋片，灭菌时间短，效果好，料袋保持原型和松紧度。如果不用周转筐直接摆放堆置，要求稳固整齐，不倒堆，一般堆放3 000标准袋(扁径15 X55cm)。用棚膜和棚被扣盖，用绳子绑紧，固定在铁栏上，棚被底角用沙袋压实，准备灭菌。使用常压蒸汽锅炉供气，装锅前锅炉先点火，或和装锅同时起火。大火攻头，保证气压，争取在46小时内使菌袋达到1000C，达到100后不掉火，不降温，保持2428小时，即可达到灭菌效果

14、，料袋数量增加，适当加长灭菌时间。4接种过程中的无菌操作4. 1试管母种(一级种)接种操作411操作过程事先做好接种室、接种箱或净化台的消毒处理。消毒以后进入接种室。在净化台前或接种箱内，用75%的酒精溶液棉球擦双手、接种铲(钩)及母种试管口处。点燃酒精灯。左手持住母种试管(上)和空白斜而试管(下)，使两试管口处于火焰上方，火焰封口;右手持接种钩(上)小指夹持棉塞(下)。将接种钩用火焰杀菌后，挑取母种豆粒大小菌丝块，迅速移接到空白斜而中央，将棉塞塞回试管。4. 1. 2注意事项4. 1. 2. 1酒精灯火焰要高酒精灯火焰不够高时，火焰周围的无菌范围小，不利于无菌操作，也易造成接种钩灼烧灭菌不彻

15、底，影响接种后的成品率。4. 1. 2. 2母种试管表而和管口要灭菌彻底作为接种物的母种试管表而并未处于无菌环境下保存，因此，接种时要注意试管表而和管口的灭菌。拔下棉塞后，在酒精灯火焰上转动2-3圈，这样可有效地减少杂菌造成的污染。4. 1. 2. 3拔塞、取种、接种及塞棉塞必须在火焰上方或附近操作母种试管和待接种的试管一旦打开棉塞，就不能远离火焰，因为只有在火焰周围很小范围内才是无菌的。4. 1. 2. 4接种钩要灼烧彻底接种钩最好用较薄的材料制成，灼烧时烧至红色。并注意接种钩灼烧的长度，灼烧长度以试管长度为度，在火焰上方反复灼烧34次即可。 4. 1.2.5接种时掉到地上的棉塞小能使用接种

16、时棉塞要夹于右手指间，不可放在操作台上。一旦掉到台而上，塞之前要在火焰上过一遍再用。掉到地上的棉塞严禁使用。接种钩火焰灭菌后要冷却。不经冷却的接种钩会烫死菌种。冷却一般在无菌待接种的试管上部空间进行，也可在斜而上端冷却。操作要熟练、到位，动作轻盈、敏捷、快速、准确。4. 2原种栽培种(二三级种)接种操作原种栽培种的接种操作通常在接种室、净化台前或接种箱内进行。事先做好接种室、接种箱和净化台的消毒处理。消毒以后进行接种，需两个人共同操作。用75%的酒精棉球擦双手、接种铲、母种试管或菌种瓶;点燃两个酒精灯，一个人左手持母种试管或原种瓶，右手持接种铲，菌种瓶口于火焰上方开启，接种铲经火焰杀菌;另一人

17、右手把握接种袋或接种瓶，将袋(瓶)口对着火焰上方，左手打开袋(瓶)口，前者用接种铲将菌种块迅速放入后者开启的接种袋或接种瓶中，后者迅速封口。两人要密切配合，互不等待，瞬间完成。两个瓶口不离开火焰上方，接种铲时常火焰消毒，防比携带或空间游离的杂菌进入感染。4. 3栽培袋的接种操作栽培袋的接种通常在培养室(暖棚)里的接种帐内进行。事先按上述方法进行消毒杀菌处理，次日进入接种。一般4个人配合完成。甲负责菌袋搬运堆放，乙负责袋表消毒和打眼，丙和丁负责接种(点种)。4个人各负其责，密切配合，互不交叉。甲将菌袋搬运堆放好后，乙用消毒酒精棉球擦拭菌袋表而消毒，然后用火焰杀菌后的打孔棒均匀扎4个孔，孔径2cm,深度在3cm左右。丙和丁的手经过酒精严格消毒，将菌种册成适度大小的长锥形菌种块，待打孔棒拔出菌袋后，立即塞入孔内。要挤满孔径，实撑饱满，突出表而。各种消毒杀菌环节处理严格到位，打孔与接种人密切配合，互不等待，瞬间完成。操作要熟练、到位，动作要轻盈、敏捷、J决速、准确。