无菌检验隔离器系统验证.docx

1、无菌检验隔离器系统验证文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮 助欢迎下载支持无菌检验一一隔离器系统验证USP Sterility Testing Validation of Isolator System/General informance这部分是用于无菌检验隔离器系统的简明验证指南（注意：在这个章 节 中，“己灭菌”指的是物品或者表而的微生物被清除的状态）在19世纪80年代中期，建立一个无菌检验环境的隔离器就己经开始使 用。隔离器可以通过密封的方法或者采用过滤除菌空气保持正压的方法，创造 一个无菌的环境。当隔离器处于密闭状态时，仅仅能够在隔离器内部和快速 传递仓传递物品；

2、当隔离器打开时，允许通过一个特殊设计的并经过验证可 以避免污染物进入的开口递出物品。隔离器采用柔软的塑料（例如聚氯乙 烯）、硬塑料、玻璃或不锈钢制造。由于隔离器系统从根本上避免了分析人员与物品的直接接触，因此在无 菌检验操作时可以避免物品和辅助设备被污染。当隔离器内部与环境完全隔 离时，隔离器内部的物品是无菌条件下的传递。操作者穿着半身衣在隔离器 内部进行无菌操作，半身衣是连接在隔离器墙体上的柔软的部分，操作者穿 着半身衣有足够的范围在隔离器内部进行操作，操作者也可以通过连接在隔 离器墙体上的袖子和手套进行操作。在隔离器中，不要求操作者穿着特殊的 无菌衣进行操作，允许操作者穿着标准的实验室服装

3、进行操作。为确保隔离 器内部无菌。使用杀范子剂对隔离器内部进行灭菌处理。隔离器设计和建造 空气处理系统用于无菌检验的隔离器需要配备除菌过滤器（HEPA过滤器是被要求的）。 静态时，要求隔离器尘埃粒子符合美国联邦标准209E的100级空气质量要求 （看洁净室微生物评价和其他环境控制1116）。动态时，不要文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮 助欢迎下载支持.求隔离器符合100级空气质量要求，不要求隔离器内部的空 气流速或者空气交换频率。隔离器系统是要求防止泄漏的，然而，它不是通常 意义上的防止隔离器与外界环境进行的空气交换。当与外界环境直接相连的门 打开时，隔离器内部的正压保

4、证隔离器内部的无菌环境不被污染。用于无菌检 验的隔离器内部空气流可以是单向流或者湍流。传输仓和门隔离器有一个附属的“传递通路”杀菌器，通过传输通道杀菌器可以直接 将无菌的培养基、无菌的稀释液、无菌的装备等传递进隔离器系统。一般设计 成快速传递仓或门（RTPs），通过快速传递仓或门可以把两个隔离器彼此相连， 无菌的物品就能够从一个隔离器传递到另一个隔离器。通过快速传递仓，两个 隔离器或者一个隔离器和一个容器就可以在普通环境中连接。通过密封圈或法 兰，将传递仓的非无菌表面连接。用垫圈压紧来保证气密性，避免微生物进入。当两个传递仓法兰连接形成一个密封通道时，存在一个狭长的垫圈带，这 个部位可能存在微

5、生物污染。因此一旦连接完，在使用传递仓传递物品 之前， 必须立即用杀也子剂对垫圈暴露部分进行处理。并且在传递物品时，应当注意 无菌技巧的使用，避免物品或手套接触垫圈。将垫圈装配在法兰上时，应当按照传递仓生产商的建议进行预防性的维护 和润滑。传递仓垫圈应当按照（生产商的）的要求定期更换并且定期检查，破 损的垫圈不能够保证真正的密封。用于无菌检验的隔离器不需要安装在洁净区，但是安装在一个限制非 授权人员进入的区域仍然是重要的。安装时，应当使隔离器周围有足够的文档 收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮助欢迎下载支持.范围，以便移动隔离器，传递物料，以及通常的维护。隔离器所在的房间不要

6、 求逬行环境监测。隔离器房间温度和湿度对于操作者的安全和舒适是重要的，温湿度对于除 菌和净化技术的影响效果也很尖键。如果隔离器位于空气补给窗的气流通道中， 当隔离器采用蒸汽灭菌时，空气气流会使隔离器个别部位温度较低形成冷凝水。 当采用对温度敏感的灭菌方法时，隔离器房间的温度应当是均一的。无菌检验合格与否是产品放行的前提时，在进行无菌检验之前，隔离器系 统的验证必须完成。为了核实隔离器及其辅助设备能够用于进行无菌检验，隔 离器系统的验证可以分成三个部分：安装验证、性能验证、操作验证。在进行 无菌检验隔离器系统验证过程中，应当考虑到下面的观点。在验证程序的特定 阶段（例如IQ、OQ、PQ）,各个阶

7、段试验的任务是不被确定的，在隔离器用于 确定的检测前，隔离器的功能应当被验证并且有文字记录。安装确认IQ阶段包括隔离器系统详细的外观描述，例如隔离器尺寸、内部结构、所 用的材料。矢于接触面和传递系统，要清晰的画图并标注尺寸。设计的隔离器 是否符合使用的规格需要被核实，例如空气补给、真空、外部排气、温湿度控 制等。其他与隔离器系统一起使用的设备也要详细描述；任何设计规格的修订 都应当详细描述。设备指南和复印件应当编成目录并保存，在需要的时候，操 作者可以得到并重新查阅。一旦设计规格符合性被核实，所有的图纸、方法和 设备图要编成目录，保存并能够重新得到。文档收集于互联网，已重新整理排版word版本

8、可编辑，有帮 助欢迎下载支持所有的文档应重新被审阅，便于核实能够反映出安装系统的矢键属性要求。这样就建立了符合隔离器系统设计规格和安装要求通用的基准。在故障模式下或高风险情况下进行分析时，可能导致试验失败的潜在的 过 程控制问题和设备问题可能被发现，这些问题应当进行鉴定并记录在文 档中。 如果必要，系统可以被修改，以便将失败的风险降到最低点,并且矢键点的控 制方法被建立。安装确认的结果被总结成为一个安装确认报告，建议包括下列文档。设备-一设备应符合设计规格并被列表记录。IQ报告应核实：符合设计 规 格的设备被接收，并且按照生产厂商的要求进行安装。结构材质一-隔离器系统矢键部位的结构材质经检测是

9、符合设计要求 的。 对隔离器材质的杀菌方法兼容性应当被核实。仪表-一仪表被核实符合其精度要求并列表。功能规格-一所有操作功能，例如在操作手册、流程、仪器图表中指明的功 能，都应当被核实能够执行并且符合规格要求。隔离器系统和其他系统的所有 连接部分应逬行审核，其功能应被核实符合设计要求。过滤器证明一HEPA过滤器和微生物截留过滤器的测试和证书；测试结果 和证书复印件应包括在IQ报告中。核对采购合同，核实空气过滤系统符 合规 格要求。计算机软件-一所有的和隔离器系统有尖系的计算机软件列出名称、规格、 文档编号。计算机系统盘被检查贴签并安全保存。操作验证0Q阶段核实隔离器系统的操作能够符合说明书的功

10、能。操作性能检查-一这个试验核实所有的警报和警报的功能符合说明书要文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮 助欢迎下载支持.求。系统所有设置点和可调整的参数都应当被核实符合规定 的要求。隔离器完整性检测-在通常的操作条件下，隔离器应保持完整性。在隔离 器载物并使用化学杀菌剂灭菌前，一个泄露试验可以证明隔离器符合厂家说明 书要求并且是安全的。为了避免外界污染，隔离器通常在20-50Pa正压下进行 操作。如果隔离器系统要求一个恒定的正压，验证过程中必须核实：操作时的 压力设置值能够维持并且可以控制。灭菌周期确认-一执行一个无菌周期，以便核实操作的实际数值与无菌 周 期的各个步骤情况

11、以及设置数值一致。可以采用几种不同的灭菌方法来除去隔离器和辅助系统的微生物。可以用 于隔离器灭菌的化学试剂包括过氧乙酸、二氧化氯、臭氧、过氧化氢，不同的 试剂有不同的暴露条件和过程控制。选定的灭菌方法应符合厂家的 操作要求， 并且在实用规程中对这些方法逬行描述是十分矢键的。使用过氧化氢蒸汽灭菌 时，隔离器房间的温度和湿度的控制是尖键的。隔离器内部的温度也是重要的， 尤其在使用过氧化氢蒸汽灭菌过程中的影响是非常重要的，尖键在于保持过氧 化氢的浓度，避免低于过氧化氢的冷凝点。一些化学试剂，例如二氧化氯和臭 氧，要求在灭菌前预先增加隔离器的湿度。如果采用对湿度有较高的要求的灭 菌方法时，在0Q中，控

12、制湿度的能力必须被核实。灭菌剂的浓度和浓度分布情况也是重要的。当灭菌剂以气态或蒸汽状态存 在时，它的浓度可以通过化学指示剂、光谱方法或电极检测。灭菌剂分布情况 也可以使用化学指示剂测量（注意：化学指示剂仅能够提供定，性的而不是定量 的信息）。采用灭菌剂在气态或蒸汽的状态下进行灭菌时，要求隔离器内部使用文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮 助欢迎下载支持.风机来均匀分布灭菌剂。风机的位置和方向可以进行调节以 保证适宜的气流分布。由于架子、设备、手套、袖子装置和半身衣，能够影响 气流分配模式，必须对隔离器满载状态下的气流分布进行检测，物品的摆放情 况进行详细描述并以文件形式记录

13、。有时使用更小的传递隔离器作为便携式表而灭菌单元，待验物品和辅助 用 具通过传递仓进入隔离器之前，这些物品和用具在便携式表面隔离器中进行化 学灭菌。在0Q过程中，应制定出便携式表面灭菌器中物品和用具的摆放情况， 审核摆放图并记录在0Q上。（注意：化学灭菌剂作用在设备表面，因此，一 些被遮盖的设备表而能够残留微生物并存活）。当达到杀菌剂作用时间后，可以使用通过除菌装置的新鲜空气或其他 方 式处理过的新鲜空气将杀菌剂从隔离器中移走。通过一个向外开放的通道，气 体通过排风口排入大气；或者通过一个密闭的通道，在通道中使用一个杀菌装 置移走并消除灭菌剂。如果使用一个向外开放的排风通道，排放系统的气流和

14、安全性应当被检测。灭菌周期的研究-一当0Q完成后，进行灭菌周期的研究以便建立日常灭菌 控制过程必要的参数。一些普遍使用在工业中的无菌工艺验证的方法是可行的， 例如生物负荷量和过度杀灭。灭菌工艺进行生物指示剂挑战试验。生物指示剂 的抱子数和耐热性是已知的。无论如何，应该得到生物指示剂 真实的D值； （看生物指示剂-一耐热性能试验55）；从生物指示剂供应 商处获得D值 是可以接受的。如果不可能获得准确的D值，同时无法证明灭菌剂浓度的有效 性，可以使用半个周期（循环）的方法对整个周期（循 环）进行确认。性能验证文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮助欢迎下载支持.PQ是核实隔离器系

15、统的功能是符合操作者的要求。PQ过程完成后，灭 菌 周期是适合的，排出口的灭菌剂被检测是适合的，所有的PQ过程的数据应该被统计，分析，存档清洗确认-一，在通常情况下，对于无菌检验来说，清洁不是尖键的，但 是，残留的产品可能会对检验有影响，有杀菌效果产品的残留对检验结果的 影响尤其显著，在检测低水平污染时，这些残留的物质会对检测产生 影响。 由于粉末容易扩散，杀菌性粉末产品的残留对检验结果的影响是重要的。对 于无菌检验隔离器系统和操作者的要求来说，没有肉眼可见污染这种清洗水 平是合适的。清洗方法、周期、设备、清洗隔离器中所用的材 料记录在文件0无菌验证-一隔离器内表面、隔离器内的设备、拿进隔离器

16、的各种物料 都 应当去除微生物。隔离器表面、无菌检验设备、检验物品的灭菌和产品接触 部位或者产品药物成分接触部位的灭菌是不同的。隔离器灭菌可以用 过度灭 菌的log降低值来评估实现。如果超过灭菌周期，无菌保证水平不再被确 定。隔离器灭菌操作完成之后，通过空气过滤系统的维持，好的物 品传递技 术的采用，更重要的是：经过无菌处理的隔离器手套完整性的保 持，隔离器 的无菌性被保证。通过阴性分数法或者过度杀灭法可以证实，用于隔离器、试验物品、无菌 检验用设备的灭菌方法可以使某种合适的、高抗性的生物指示剂的微 生物数 下降6个log降。（看用于灭菌的生物指示剂1035）。过度杀灭分析法适 用于每单位10

17、坷辺子数的生物指示剂，而阴性分数法适用于每单位范子数大 于等于10,的生物指示剂。使用足够数量的生物指示剂进行试验可以从统计学 上证明灭菌效果是可以再现的以及灭菌剂的分布是合适文档收集于互联网， 已重新整理排版word版本可编辑，有帮助欢迎下载支持.的。隔离器内设备和物品满载时，需要用更多的指示剂进行试验。因此，没 有一个或者更多的足够量的传感器来测量杀菌剂的浓度时，增加生物指示剂 的放置是可以考虑的。在连续三次灭菌试验中，六个log降的杀菌能力是证 明可以灭菌的。操作者建立隔离器再次灭菌的周期。这个周期可以是短短的几天，也 可 以是几周的时间，建立的依据是无菌保持能力（看隔离器内部环境无菌保

18、持） 包装完整性确认一些材料对杀菌剂有影响，这些材料能抑制微生物的生长。我们矢注的 是 杀菌剂在产品包装上的穿透（能力），在一些辅助设施例如过滤装置和管道的 穿透力、在一些能够和产品、培养基、无菌试验的稀释剂接触的材料上的穿透 力。在灭菌过程中，操作者有责任核实包装物、培养基、辅助物品在被批准使 用的灭菌过程中没有受到影响。带旋转帽的管状容器、胶塞密封的小瓶、卷曲 的褶皱己经被证明能够降低杀菌剂的穿透力。金属箔包装并且密封的容器能够 防止杀菌剂的进入；然而，这些情况也能够导致一些表面不被灭菌。在多数情况下，在进行无菌检验之前，操作者使用杀菌剂处理产品包装 表 面来减少进入隔离器物品的生物负荷量

19、。操作者有责任通过验证证明：使用杀 菌剂处理产品包装这个过程，存在于产品内部的低水平的微生物污染没有受到 杀菌剂的影响，不会影响到检验的检出限度。建议用化学和微生物试验来检测 包装物对污染的抵制能力。经过隔离器全部的灭菌过程后，杀菌剂对于细菌和 真菌的抑制情况的验证需要进行（参照无菌检验71）。对于医疗装置的包 装、药品的包装和密封系统包装的要求都是一致的。文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮 助欢迎下载支持不论无菌检验用培养基还是环境控制用的培养基，在无菌检验时，都必须 符合需氧菌、厌氧菌真菌的生长促进试验（无菌检验71）。在一个无菌周期内，隔离器系统保持内部环境无菌的能

20、力必须被验证。隔离器系统出现故障或者隔离器内部的偶然污染情况下的微生物必须被检测。微 生物检测通常包扌舌一个例行的取样程序，它可以包括，例如，灭菌后的第一 天和无菌保持期的最后一天。放置在隔离器中的培养基被证明是 无菌的。隔离器内部可以使用平面接触双碟或者棉签搽拭监控。然而，因为培 养 基残留会使隔离器产生染菌的风险，因此，最好在检验完成后进行检测。如果 试验中有培养基残留，细心地从隔离器内部清理干净。空气取样和培养基检测 双碟可以使用，但它们在检测隔离器内部非常低水平的污染时不 是很灵敏。最可能污染的途径是检验用具和样品进入隔离器的过程。验证所有进 入 隔离器内部的物品是无菌的这一点是尖键的

21、，也应当定期检查垫圈，确保其完 整，避免微生物的进入。手套和半身衣是另一个可能产生污染的来源。因为操 作者戴着手套处理无菌检验物品，所以手套是应当特别尖注的，手套上微小的 破损很难检查出来，手套在使用时，在拉伸情况下，手套上微小的破损可以体 现岀来（注意：培养基接触法检测手指菌落的方法，在检测低水平的污染时灵 敏度是不足的。用0.1 %的蛋白月东水溶液浸泡手套，将溶液过滤，然后将滤膜 放在生长培养基碟子上检测，这个方法可以检测出其他方法检测不出的泄露。）隔离器内部进行连续的尘埃粒子检测是理想的，这样可以快速检测到文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编辑，有帮助欢迎下载支持. 过滤器的

22、泄露。第二个选择是使用便携式的尘埃粒子检测器进行周期检测。尘 埃粒子检测取样不能对隔离器内部的无菌环境产生风险。无菌检验结果的解释如果人员没有直接接触工作区，验证过的传输通道没有破损，隔离器内部 微生物被去除并有一个高的无菌保证水平，那么，无菌检验中的假阳性是很难 出现的。然而，隔离器是一种机械装置，好的无菌操作技术仍然是必须的。只 有充分地符合“无菌检验检测和调查71的情况下，才能下阳性结果无效这1文档来源为:从网络收集整理“ord版本可编借.个结论。培训和安全因为无菌检验操作在洁净室进行，操作者针对隔离器专门程序进行培 训。 所有的培训记录和操作者操作的评估应有一个单独的记录并且存档。对所有进 行操作或者维护隔离器的人员进行必要的安全培训是必须的。人员使用杀菌剂的安全性必须被评估。使用杀菌剂的直接区原材料的安 全 数据或者一个类似安全数据文件是必要的。贮藏和安全方而的预防措施应当符 合规定。在隔离器使用之前，隔离器和所有连接的通道安全检查应 当被执行。