长春碱的提取分离.docx

1、长春碱的提取分离1.长春碱简介分子式：C46H58N4O9 性质： 又称长春质，又名长春花碱。吲哚类生物碱。存在于夹竹桃科植物长春花中。相对分子质量810.96，针状结晶（甲醇），熔点211216.溶于醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿，几乎不溶于水和石油醚。硫酸盐C46H60N4O13S,熔点284285.2.长春花简介学名：catharanthus roseus基本资料：英文名：Madagascar periwinkle科属：夹竹桃科，长春花属别名：五瓣莲、日日草、山矾花形态特征：多年生草本，做一年生栽培，全草长30-50cm。叶对生，长椭圆状，基本楔形，短柄，全缘，两面光滑，主脉白色明显，长3-6

2、cm，宽15-25cm，先端钝圆，具短尖。花单生或数朵腋生，花筒细长，约3cm，花冠五裂片，花色为蔷薇红，纯白及白色，喉部具红黄斑。萼片线状。气微，味微甘、苦。花期春至深秋。此植物，喜欢温暖、稍干燥和阳光充足的环境，若生长在荫庇处，叶片会发黄、落叶。药用历史及药用前景：长春花最早为观赏植物，也为南非、斯里兰卡和印度等的传统民间用药，多用于治疗糖尿病，后被发现具有抗癌作用，现为国际上应用最多的抗癌植物之一，在中国长春花作为药用，始于植物名实图考，主要产于非洲及中国南方各省区。随着当今世界肿瘤发病率日益增高，对抗肿瘤药物的需求与日剧增，长春花具有显著而独特的抗肿瘤作用，已成为当今抗肿瘤的重要药物，

3、由于传统方法提取生物碱收率低，故化学合成和生物合成技术已应用于该领域，今后在扩大长春花生物碱的来源和产量的同时，应着眼于降低生物碱的毒性和增强对肿瘤细胞的靶向性，将长春花的抗肿瘤作用更好的用于临床。3.长春花中长春碱的提取首先取成熟的长春花地上全株，烘干，待用。（1）所用试剂：苯 6%酒石酸溶液 氯仿，氨水 无水乙醇，5%硫酸 甲醇 氧化铝 蒸馏水 75%乙醇基本思路：（2）具体流程： 长春花全草干粉1：0.3（生药：水）拌匀加生药的1.5倍量苯冷渗氯仿液硫酸长春新碱硫酸长春碱前段（长春碱）氧化铝柱色谱层析，苯氯仿（1:2）洗脱游离弱碱加无水硫酸钠、兑水、蒸干氯仿液加水溶解、加氨碱化、加氯仿提

4、取加无水乙醇（2g/ml）加5%体积分数硫酸与无水乙醇的混合液调节ph至3.84.1、放置生物碱硫酸盐结晶纯化总生物碱中段（长春次碱）后段（长春新碱）溶于无水乙醇加5%无水乙醇与硫酸的混合液调节ph至3.84.1，放置溶于无水乙醇加5%无水乙醇与硫酸的混合液调节ph至3.84.1，放置具体说明：渗漉：长春花全草干粉（过80目筛孔），加自来水以1:0.3的比例拌匀，放置约0.5小时，投入预先放好苯的渗漉桶中浸没，加盖密闭48小时后开始渗漉，随时添加苯以防表面流干。萃取：收集生药粉5倍量的苯渗漉液，与6%的酒石酸在四支串连的玻璃管中，进行液液逆流萃取，当第一管的酸水PH为4时，放出，换入新配置的酒

5、石酸溶液继续萃取，直至苯液全部交换完，放出13管中的酸水液，置分液漏斗中。再萃取：先加入0.4倍的氯仿，然后加约14%氨水调节PH至67，振摇，放出氯仿层，以后又用水溶液体积的0.2倍氯仿振摇3次，氯仿提取液静置去水。减压蒸干，然后加少量丙酮抽松，得总弱生物碱。纯化：将总弱生物碱加11.5倍甲醇溶解，放置过夜，滤去结晶，收集甲醇滤液减压蒸干、抽松。再纯化：将上一步得到的游离碱加0.5倍无水乙醇溶解成浓溶液，然后加5%硫酸乙醇溶液至PH3.84.1，放置过夜，析出混合长春碱硫酸盐。滤出结晶。萃取提纯：将上步的结晶，加1.52倍的蒸馏水溶解，移入分液漏斗中，先加1.5倍量氯仿，然后加约14%的氨水

6、调节PH至89，摇晃，将游离碱提入氯仿，直至最后振摇的氯仿不呈现明显的生物碱反应为止，共约提6次，氯仿提取液加无水硫酸钠干燥，滤出硫酸钠，滤液减压蒸干，得纯化游离弱碱。长春碱长春新碱的分离：将上述纯化游离弱碱，在真空干燥器中充分干燥后，按1g用30g氧化铝的比例，在氧化铝柱上层析分离，洗脱溶剂为苯氯仿混合液（相对密度1.30）。后处理：将前段洗脱液抽干（放入P2O5的真空干燥器中干燥12小时以上），称重，加无水乙醇1.52倍溶解，再加5%的硫酸乙醇混合液调节PH至2.84.1，密塞再25。C下放置48小时，析出长春碱硫酸盐结晶，滤出少量无水乙醇，立即移至真空干燥器中干燥，即为硫酸长春碱粗品。中

7、段洗脱液为长春次碱及交叉混合物。后段洗脱液经减压蒸干，置真空干燥器中干燥后称重，加无水乙醇1.52倍溶解，再加5%硫酸乙醇混合液调节PH至3.84.1“（偏3.8），在25。C下放置48小时，析出的晶体即为长春新碱的硫酸盐粗品。 精制：（补充）加蒸馏水和甲醇使硫酸长春碱粗品在60C左右全部溶解，过滤，容器用甲醇洗涤，滤液合并，减压回收甲醇，立即将150倍量预先加热至沸的无水乙醇加入，迅速摇匀后放置，很快析出白色结晶，放置一段时间之后，滤出针晶，干燥，既得硫酸长春碱精品，熔点284C硫酸长春新碱粗品加少量甲醇溶解，过滤，减压浓缩掉部分甲醇，加入30倍量无水乙醇摇匀，放置过夜，滤出析出的结晶，放置

8、于干燥器中抽干，即为精制硫酸长春新碱,熔点218220C。4.长春碱结构分析的一般思路：作为结构较复杂的吲哚类生物碱，长春碱的结构分析，必须采用多种方法，统筹分析，面面俱到。主要介绍各个方法在此的作用： 生物碱分子的化学裂解法：主要作用是了解N原子在分子中的结合状态，主要有Hofmann 降解法和 Emde降解法。波谱分析：紫外光谱（UV）:主要用于分析分子结构中的共轭系统。随共轭体系的差别，紫外光谱各异。红外光谱（IR）：测定分子结构中的特殊功能基，如：氨基、酚羟基、羰基、芳烃基、酯基等，尤其是对不同化学环境羰基的吸收峰特征性比较强。以下对比硫酸长春碱和硫酸长春新碱的红外图：硫酸长春碱红外光

9、谱图硫酸长春新碱红外光谱图质谱：主要用途是：通过辨认图谱中的分子离子峰，可以了解化合物的分子量，分辨质谱还可以推算分子式。：通过质谱裂解碎片的分析，可推算生物碱的结构类型，再结合其它波谱数据综合分析，最后确定结构式。5.长春花中长春碱的含量分析： 薄层扫描法及薄层紫外分光光度法是常用的方法，两种方法测定结果基本一致，前法快速、灵敏、简便，后法不需特殊仪器设备。6.参考资料： 1.David E. Thurston 抗癌药物的化学与药理学 2.徐怀德 天然产物提取工艺学 3. 韩公羽，沈企华，韩绍玫 中国人最应知道的植物药有效成分 4.杨红 天然药物化学基础（供高职高专使用） 5. 潘百红 园林花卉学 6. 国家中医药管理局科技教育司组织 中药化学 7. 祖元刚 长春花生活史研究 8.中国医科大学学报 1995.26（3）9. 赵中振，肖培根 当代药用植物典 （第三册）10.何凤梅 常用药与新药600种