细菌室工作流程.docx

1、细菌室工作流程细菌室工作流程简介一、标本接种与涂片染色一）标本的接种：培养基选择及接种方式：标本类型培养基组合接种方式痰、咽拭子血平皿 +中国蓝平皿 +流感嗜血杆菌平皿 三区划线法尿血平皿 +中国蓝平皿血：直、曲线法，中：三区划线法分泌物血平皿 +中国蓝平皿三区划线法大便SS 平皿 +TCBS 平皿三区划线法输液液体、腹水、 普通肉汤管直接倾倒胆汁、胃液、脓液等血、脑脊液、骨髓、 血培养瓶用注射器注入胸水、关节液培养类别选择性培养基接种方式真菌沙氏培养基直接划线淋球菌巧克力淋球菌培养基直接划线结核杆菌罗氏结核菌培养管直接划线L 型细菌高渗肉汤培养管直接接种霍乱弧菌碱性蛋白胨培养管直接接种血培养

2、瓶选择如下：培养瓶瓶的颜色抽血量（ ml）标准需氧培养瓶蓝色 510 标准厌氧培养瓶紫红色 5 10中和抗生素需氧培养瓶绿色 5 10中和抗生素厌氧培养瓶橙黄色 510小儿血培养瓶浅黄色 12结核杆菌血培养瓶黑色 5 10（二）标本涂片和染色1、看湿片（未染色片） ：正常人体的下呼吸道是无菌的， 上呼吸道有正常菌群栖居。 下呼吸道 标本来源有多种：痰、支气管肺灌洗吸出液、气管抽出液或刷子、肺穿 刺或活组织等。痰标本在接种前需涂片镜检， 以确认留取的标本是否有临床意义。 在低 倍镜下计数每低倍视野白细胞和上皮细胞的平均数目， 按照以下标准判 定标本是否适合做培养：白细胞上皮细胞是否适合A： 25

3、V10是B： 25V 25是C：V 10 25否不合格的标本应电话告诉临床科室重留标本。霍乱弧菌（投标样动力，运动似流星）2、革兰氏染色：涂片革兰氏染色找细菌：革兰氏阳性菌：球菌（G+C）、杆菌少（G+b） 革兰氏阴性菌：杆菌（G-b）、球菌少（G-C）涂片革兰氏染色找真菌：找菌丝、孢子菌群分析：大便标本球、杆菌比例。备注：加德纳尔氏菌是细菌性阴道症的主要致病菌之一，此症有如下特点：八、1） 阴道排出物过多；2） 阴道 PH4.5;3） 阴道上皮细胞被G-小b覆盖形成为线索或线球细胞；4） KOH 试验阳性：阴道分泌物滴加 10%KOH 后，立即出现鱼腥味和氨味；3、 抗酸染色： 查找抗酸杆菌

4、。如结核杆菌、麻风杆菌。4、 墨汁染色：查找新型隐球菌。特点：有荚膜，夹膜折光性强。5、 看菌落形态：1.肉眼看：血平皿上： 有脐窝状的可能是草绿色链球菌， 微黄色可能是奈瑟氏菌， 干燥的可能是真菌，乳白色的可能是葡萄球菌，湿润的可能是肠球菌。中国蓝上：微黄色可能是奈瑟氏菌，有选择性地促进革兰氏阴性菌生 长，发酵型革兰氏阴性杆菌因分解乳糖能力不同， 在此平皿上的菌落颜 色不同。流感嗜血杆菌平皿上：微黄色可能是奈瑟氏菌，（三）转种：1.阳性血培养瓶：1）涂片革兰氏染色：找到细菌T向临床科室报告； 未找到细菌T暂不报告，待转种生长后再报；2）转种：血平皿、中国蓝平皿。2.肉汤管： 1）培养 3天后

5、仍然透明清亮：转种血平皿一个；2）浑浊：转种血平皿、中国蓝平皿各一个。二、细菌鉴定（视标本、科室而定）（一）标本培养的菌落计数及有意义菌落的筛选1 、痰：（ 1 ）菌落计数1 ）只有第一区生长，计 103/ml ；2） 第一、二区生长，第三区不长，计 1 05/ml ；3） 三个区均生长，计 1 07/ml ；（ 2）菌落筛选1） v 103/ml :视科别而定，除ICU、CCU、急诊科、老年科和呼吸科危重病号外，一般报告为：无致病菌生长；2） = 103/ml :除非细菌生长较纯或可能为葡萄球菌需进一步处理外一 般报告为：无致病菌生长；3） 103/ml :根据菌落形态将其中意义不大的标本报

6、告单发出，一 般报告为：无致病菌生长；微黄色报告奈瑟氏菌； 血平皿上有脐窝状可能为草绿色链球菌，需做如下鉴定：4） 血平皿：草绿色链球菌做 OPTOCHIN ；中国蓝：真菌（ YBC ）转沙氏、种芽管。2、尿：1）菌落计数：定量接种环涂抹法：用10 u l定量接种环取一环尿液在血平皿上做均匀划线接种，置于35C 24h培养，计数生长的菌落数，再乘以 100,即为 每毫升菌落数。菌落生长过多不可计数时，报告 105cfu/ml。2） 一般情况下细菌数不会超过 103cfu/ml，诊断泌尿系感染的细菌学标准是：菌落计数A 105cfu/ml。3、 前列腺液：1） 密集生长分纯（选乳白色的菌落）鉴定

7、2） 偶有生长-报告为：无致病菌生长3） 无菌生长报告为：无细菌生长4、 大便：中国蓝及SS平板：找细小、无色、透明的菌落 KIA试验：血清学鉴定：报告无致病菌生长TCBS 平板：黄色菌落氧化酶： +： O/F 试验：上机药敏：报告无致病菌生长：很少，可能为梅氏弧菌，报告无 致病菌生长5、 其他标本（血、脑脊液、静脉管等）的细菌鉴定：一般不需计数， 只要有细菌生长（污染菌除外） ，就需进行鉴定处理。三、鉴别试验：1、血平板（链球菌属） 细小、圆形、表面光滑、灰白色、半透明（ 1）选血平皿上有脐窝状的菌落（可能是草绿色链球菌） ：在血平皿上做OPTOCHIN （奥卜托欣）试验：1）+:报告肺炎链

8、球菌 2）:报告草绿色链球菌（2）牛奶美蓝试验：1）+:粪肠球菌2）:手工生化反应组鉴别菌类（ 3）卫星现象（用金黄色葡萄球菌做） :1） 血平皿：+:流感或付流感t M-H平皿：+:付流感：无致病菌生 长:无致病菌生长 :流感2） 细菌与生长因子:血平皿上有 V+X 因子，（药平皿） M-H 平皿上有 V 因子。 细菌名称所需生长因子流感嗜血杆菌V +X付流感嗜血杆菌V杜克氏菌X2、涂片:阳性杆菌t上机BAC卡阳性球菌t做触酶（H2O2）阴性杆菌t做氧化酶（OX）真菌（YBC ）t转沙氏（分纯）、种芽管（看是不是白色念珠菌）可疑金黄色葡萄球菌要加做凝固酶加以确定3、用 KOH （氢氧化钾）拉

9、丝试验（鉴别阴性菌还是阳性菌） 拉丝：是阴性菌 拉丝：是阳性菌4、触酶（ H2O2）：先挑取菌落1个，加1滴H2O2,马上出现气泡的为阳性，其次为阴性。 在革兰氏阳性菌中，链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌、微球菌均阴性。5、凝固酶：可疑为金黄色葡萄球菌做凝固酶： 100ul 血浆 300ul 生理盐水 1 个菌 落。6、上机、药敏：G-b 做氧化酶， G+C 做触酶（ CAT） 革兰氏阴性菌 G-b 要做氧化酶（试纸片法） 。中国蓝上生长G-b的菌落（非真菌）：氧化酶+:上机GNI反应卡0涂 黑-、革兰氏阴性菌药敏 3板（）氧化酶：上机 GNI反应卡0-0、革蓝氏阴性菌药敏4板（）中国蓝不生长 G

10、+C 的白色菌落做触酶： 1）+-凝固酶：玻片法+ -试管法+:报金黄色葡萄球菌、G +药敏+葡萄球菌+ （0X） 苯唑 ：上机GPIO、G +药敏+葡萄球菌+（ 0X）苯唑西林:上机GPIO、G +药敏+链球菌2）:牛奶美蓝1）+:粪肠球菌、肠球菌药敏2）：手工生化反应组鉴别菌7、种芽管（鉴定是否是白色念珠菌）同时转沙氏：种芽管： 300ul 血清 1个真菌菌落1） +:报告为白色念珠菌不用上机T直接做真菌药敏；2） ：上机 YBC （真菌）卡室温放置 24h 后放入检测仪，如不能鉴定 其种属，需再室温放置 24h 后放入检测仪鉴定，如仍不能鉴定其种属则 需做手工生化鉴定T真菌药敏。四、分纯

11、平板上不纯的菌落经涂片1） 一般原则是血T血，中国兰T中国兰，沙氏T沙氏。2） 革兰氏阳性菌:转血平板；3） 革兰氏阴性菌:转中国兰；4） 真菌:转沙氏培养基。五、上机药敏1 、常用的几种生化反应卡1） 革兰氏阴性菌: GNI 反应卡，将菌液充入卡中直接上机；2） 革兰氏阳性球菌: GPI 反应卡，将菌液充入卡中直接上机；3） 革兰氏阳性杆菌: BAC 反应卡，将菌液充入卡中直接上机；4） 真菌：YBC反应卡，将菌液充入卡中于室温放置 24h后再上机读卡2、上机孔标记:1）革兰氏阴性菌：GNI反应卡，氧化酶阳性（）2） 革兰氏阴性菌：GNI反应卡，氧化酶阴性（00）3） 革兰氏阳性菌：GPI反

12、应卡，触酶阳性（4） 革兰氏阳性菌： GPI 反应卡，触酶阴性（00）5） BAC 反应卡：不需涂黑6） YBC反应卡：室温放置24h，读卡，）室温放置 48小时。3、 药敏1） 革兰氏阴性菌：氧化酶： 1、2、3 号革兰氏阴性菌药敏板： 1、2、3、4 号革兰氏阴性菌药敏板2） 革兰氏阳性球菌：触酶： 1 革兰氏阳性菌药敏板、葡萄球菌药敏 板及苯唑西林（ OX ）： 1 号革兰氏阳性菌药敏板、链球菌药敏板3） 革兰氏阳性杆菌：一般不做药敏，如临床医生要求，贝V使用 Etest法 判读最小抑菌浓度 MIC 。4） 真菌： 1、2 号真菌药敏板5） ESBL：4、 次日测量药敏结果并在计算机细菌

13、鉴定系统中查记鉴定出的前一天 上机细菌的菌名， 如非真菌类细菌未被鉴定出， 贝须人工查阅鉴定手册， 如仍不能查出，可进行手工生化鉴定或重新上机； 如真菌类细菌未被鉴 定出，贝须将生化反应卡再于室温放置 24h 后上机读卡即可获得结果。六、报告结果1） 将中文菌名印于原始化验单上；2） 对于痰标本培养，将其湿片结果及菌落计数印于化验单上；对于尿标本培养，将其菌落计数印于化验单上；3）打印非真菌（革兰氏阴性、阳性菌）药敏单，贴于化验单上；4）打印真菌药敏单，贴于化验单上；5） 超广谱B内酰胺酶（ESBL）阳性的要在报告单上注明；6） 将报告日期、报告者姓名印于化验单，然后在登记本上记录结果， 最后

14、向临床科室发出报告单（包括化验单和药敏单） 。七、其他项目（一）接种项目1、 淋球菌培养：35 C 48h培养后，细小、透明似水滴状，凸起、光滑、 圆形、无色素菌落-氧化酶（1）+:糖类分解试验及有关试验：葡萄 糖（）麦牙糖、乳糖、蔗果糖、硝亚硝（）多糖体合成及 DNA 酶（）（2）：报告为无淋球菌生长，阳性的要加做纸片法药敏。2、 L 型细菌：由串珠状链杆菌变异而来，形态及染色性多变，最突出 的特点是细胞壁缺失，确认通常靠观察菌落形态和染色性。 低倍镜下：细胞壁缺失的细菌典型的 L 型：“油煎蛋”样菌落，中心部位致密，透光度差，嵌入生长，周围透明；不典型的 G 型：比 L 型菌落大，无透光度

15、差的核心，整个菌落呈透明颗粒状；不典型的 F 型：菌落有时可见致密核心，其周边或全部由长丝构成； 备注： L 型细菌具“返祖”特性，利用此点可与支原体（不返祖）相 鉴别，而且只有反祖后才能进行种别鉴定，其对作用于细胞壁的抗生素（如青霉素、头孢霉素等）常有耐药性，而能干扰细菌蛋白合成的抗生 素（如卡那霉素、链霉素、庆大霉素等）对 L 型细菌的抑制作用较强 3、支原体培养专用肉汤管： 1）红色清亮透明：报告为有尿素支原体 生长；2）红色浑浊：可能有其他细菌污染，报告为无支原体生长；3）培养 3 天后不变红、保持原色，报告为无支原体生长；4）药敏有专用试剂盒：判断药敏结果的方法与判断有无支原体生长的

16、 方法基本相同：颜色变红的为耐药，即生长；颜色不变的为敏感，即不 长；药物浓度高的不变色，浓度低的变红为中介，即在高浓度的药物中 不生长，而在低浓度的药物中可生长。4、空气培养（计数） ：所有平板的菌落数之和十平板数X 157 =报告结果。（二）试剂盒项目（免疫法） 原理：抗原抗体反应，凝集反应。 沙眼衣原体抗原（免疫法）肺炎支原体抗体（免疫法） 肺炎衣原体抗体（免疫法）军团菌抗体（免疫法）八、细菌培养基制备（一） 平板基础液 血平皿中国蓝平皿药敏平皿空气平皿沙氏平皿 SSTCBS（二） 肉汤管普通肉汤管高渗肉汤管碱性蛋白胨管支原体肉汤管三）斜面罗琼氏培养基（结核杆菌培养基）枸橼酸盐管双糖管（四）生化反应管糖类氨基酸类醇类其他（五）倒好培养基后要做无菌试验（六）储存于冰箱冷藏备用。（此文档部分内容来源于网络， 如有侵权请告知删除， 文档可自行编辑修改内容， 供参考，感谢您的配合和支持）