常用培养基配方.docx

1、常用培养基配方常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分）渤海大学生物与食品科学学院2006年3月01糖发酵管02 ONPG培养基03西蒙氏柠檬酸盐培养基04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)05克氏柠檬酸盐培养基06丙二酸钠培养基07葡葡糖铵培养基08HughLeifson培养基(O/F试验用)09 马尿酸钠培养基10营养明胶11苯丙氨酸培养基12 氨基酸脱羧酶试验培养基13蛋白胨水(靛基质试验用)14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15 尿素琼脂16 氰化钾(KCN)培养基17 氧化酶试验18 硝酸盐培养基19 细胞色素氧化酶试验20 过氧化氢酶试验21 过氧化物酶试验22 磷酸盐缓冲液

2、23明胶磷酸盐缓冲液24 乳酸苯酚溶液25 肉浸液肉汤26肉浸液琼脂27牛肉(或牛心)消化汤28血消化汤29豆粉琼脂30血琼脂31营养琼脂32营养肉汤33 乳糖胆盐发酵管34乳糖发酵管35 EC肉汤36 缓冲蛋白胨水(BP)37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41 GN增菌液42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂45 HE琼脂46 SS琼脂47 WS琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52

3、克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE培养基57 Honda氏产毒肉汤58 Elek氏培养基(毒素测定用)59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN1培养基70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基72 改良克氏双糖73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂74 DNA酶甲

4、基绿琼脂(DTA) 75 CaryBlair氏运送培养基76 Skirrow氏培养基77 TTC琼脂78 甘氨酸培养基79 改良磷酸盐缓冲液80 氯化镁孔雀绿肉汤81 胰酪胨大豆肉汤82 BairdParker氏培养基83 7.5%氯化钠肉汤84 匹克氏肉汤85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂86 3.8%柠檬酸钠溶液87 酪蛋白琼脂88 木糖明胶培养基89 庖肉培养基90 卵黄琼脂培养基91亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂(SPS) 92液体硫乙醇酸盐培养基(FT) 93含铁牛奶培养基94 动力-硝酸盐培养基（A法）95 动力硝酸盐培养基(B法) 96 血清肉汤97 马丁氏肉汤98 明胶培养基99 察氏

5、培养基100 高盐察氏培养基101 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA) 102 马铃薯琼脂103 孟加拉红培养基104 玉米粉琼脂105 大米粉培养基106 亚硒酸盐煌绿增菌液107 煌绿肉汤增菌液108 肠毒素产毒培养基109 0.1%蛋白胨水稀释剂110半固体琼脂01 糖发酵管成分：牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLpH7.4制法：1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121高压灭菌15min。2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121高压

6、灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。 注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于361培养，一般观察23d。迟缓反应需观察1430d。02 ONPG培养基成分：邻硝基酚D-半乳糖昔(ONPG) 60mg(ONitrophenylDgalactopyranoside)0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5)30mL制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm75mm试管，每管0.5mL，用

7、橡皮塞塞紧。试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于361培养13h和24h观察结果。如果半乳糖苷酶产生，则于13h变黄色，如无此酶则24h不变色。03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分：氯化钠5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g柠檬酸钠5g琼脂20g蒸馏水1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.8制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121高压灭菌15min。放成斜面。试验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于361培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。04 缓冲葡萄糖

8、蛋白胨水(MR和VP试验用)成分：磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水1000mLpH7.0制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121高压灭菌15min。甲基红(MR)试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于361培养25d，哈夫尼亚菌则应在2225培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。VP试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于361培养24d。哈夫尼亚菌则应在2225培养。加入6%萘酚乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻

9、或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在361下培养4h再进行观察。05克氏柠檬酸盐培养基成分：柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法：加热溶解，分装试管，121高压灭菌15min。放成斜面。试验方法：用琼脂培养物接种整个斜面，在361培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。06 丙二酸钠培养基成分：酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH6.8制法：先将酵母浸

10、膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121高压灭菌15min。试验方法：用新鲜的琼脂培养物接种，于361培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。07 葡葡糖铵培养基成分：氯化钠5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.8制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121高压灭菌15min，放成斜面。试验方法：用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20100之间为

11、宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于361培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。08 HughLeifson培养基(O/F试验用)成分：蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法：将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2

12、。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121高压灭菌15min，直立凝固备用。试验方法：从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于361培养。09 马尿酸钠培养基成分：马尿酸钠1g肉浸液100mL制法：将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌12120min。试剂：三氯化铁(FeCl36H2O)12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。试验方法：用纯培养物接种，于42培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。经离

13、心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经1015min，观察结果。结果：出现恒久之沉淀物为阳性。10营养明胶成分：蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mLpH6.87.0制法：加热溶解、校正至pH7.47.6，分装小管，121高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.87.0。试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在2225培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。11苯丙氨酸培养基成分：酵母浸膏3gDI苯丙氨酸(或L苯丙氨酸1g) 2g磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水

14、1000mL制法：加热溶解后分装试管，121高压灭菌15min，使成斜面。试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在361培养4h或1824h。滴加10%三氯化铁溶液23滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分：蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸馏水1000mL1.6%滇甲酚紫乙醇溶液1mLL氨基酸或DL氨基酸 0.5或1g/100mLpH6.8制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L氨基酸按0.5%加入，DL氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸

15、。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115高压灭菌10min。试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于361培养1824h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。13蛋白胨水(靛基质试验用)成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法：按上述成分配制，分装小试管，121高压灭菌15min。靛基质试剂柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。欧波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。然后缓慢加

16、入浓盐酸20mL。试验方法：挑取小量培养物接种，在361培养12d，必要时可培养45d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分：牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.4制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115高压灭菌15min，取出直立候其凝固。试验方法：挑取琼脂培养物，沿管

17、壁穿刺，于361培养12d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。 15 尿素琼脂成分：蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g0.4%酚红溶液3mL琼脂20g蒸馏水1000mL20%尿素溶液 100mLpH7.20.1制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121高压灭菌15min。冷至5055，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.20.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。试验方法：挑取琼脂培养物接种，在361培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基

18、变为红色。16 氰化钾(KCN)培养基成分：蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸二氢钾 0.225g磷酸氢二钠 5.64g蒸馏水 1000mL0.5%氰化钾溶液 20mLpH7.6制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为110000)，分装于12mm100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。17 氧化酶试验试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。1%-萘酚乙醇溶

19、液。试验方法：取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。18 硝酸盐培养基成分：硝酸钾 0.2g蛋白 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法：溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121高压灭菌15min。硝酸盐还原试剂：甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。试验方法：接种后在361培养14d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果

20、。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。 注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。19 细胞色素氧化酶试验试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。1%-萘酚乙醇溶液。试验方法：取37(或低于37)培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各23滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。结果：于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现

21、微弱或可疑反应均作为阴性结果。20 过氧化氢酶试验试剂：3%过氧化氢溶液：临用时配制。试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。结果：于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。21 过氧化物酶试验试剂：2%儿茶酚溶液。3%过氧化氢溶液。试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20)中3060min，观察结果。结果：阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。注：过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。22 磷酸盐缓冲液储存液磷酸二氢钾34g1mol/L氢氧化钠溶

22、液175mL蒸馏水825mLpH7.2制法：先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121高压灭菌15min。23明胶磷酸盐缓冲液成分：明胶2g磷酸氢二钠4g蒸馏水1000mLpH6.2制法：加热溶解，校正pH，121高压灭菌15min。24 乳酸苯酚溶液成分：苯酚10g乳酸(比重1.21)10g甘油20g蒸馏水10mL制法：将苯酚在水中加热溶解，然后加入乳酸及甘油。用途：检验真菌形态时用。25 肉浸液肉汤成分：绞碎牛肉500g氯化钠5g蛋

23、白胨10g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000mL制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.47.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121高压灭菌30min。26肉浸液琼脂成分：肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL琼脂1720g制法：加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121高压灭菌30min。根据需要，倾注平板或放成斜面。27牛肉(或牛心)消化汤成分：绞碎牛肉(或牛心)1000g15%氢氧化钠溶液 27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1mL

24、氯化钠10g蒸馏水2000mL制法：1称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80，维持15min。2加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40。3加胰蛋白酶、氯仿，在361放置45h，每小时摇动一二次。44h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。5加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。6煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。7次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。8校正pH7.47.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121高压灭菌20mi

25、n。注：此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。28血消化汤成分：绞碎猪胃100g绞碎猪血块100g蒸馏水1000mL浓盐酸10mL制法：1洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。2用绞肉机将猪血块绞碎。3将蒸馏水加热至55，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55水浴中24h，时常加以摇动。4从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。5吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.27.4。6用滤纸过滤，分装烧瓶，121高压灭菌20min。29豆粉琼脂成分：牛心消化汤(PH7.47.6)