上海市高等学校青年科学基金项目.docx

1、上海市高等学校青年科学基金项目上海市高等学校青年科学基金项目申 请 书 项 目 编 号：项 目 名 称： 肾癌微转移诊断及其临床意义研究申 请 人： 单 位 名 称： 联 系 电 话： 申 请 日 期： 2001年5月上 海 市 教 育 委 员 会简 表研究项目名 称肾癌微转移诊断及其临床意义研究研究类别基础研究 应用研究 实验发展 软科学起止年月2001 年 10 月 至 2004 年 10 月申请金额（万元） 5.5批准金额（万元）密 级机密 秘密 内部 一般项目编号学 科领 域学科名称1泌尿外科学科代码1C03030305学科名称2学科代码2申请人姓 名性别男女出生年月 1967年 8

2、月职 称学位博士 硕士 学士 其它单 位联系地址邮编电话总人数高级中级初级辅助人员博士生硕士生83113主要研究内容及意义采用RT-PCR方法诊断肾癌患者外周血、骨髓及肾周淋巴结中的微转移病灶，探讨肾癌微转移在围手术期及免疫治疗后的变化及与预后的关系。肾癌微转移确诊，为手术术式选择、观察治疗效果提供客观依据，并可能是肾癌预后的一个重要指标。 （限100字）注：学科领域请参照国家标准GB/T1374592学科分类及代码表填写一、立论依据（项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要参考文献）肿瘤的浸润与转移是恶性肿瘤的重要特征，也是肿瘤患者死亡的主要原因。许多恶性肿瘤患者虽然切除了原发肿瘤和转移灶

3、，甚至常规病理学检查为转移阴性的患者，最终仍死于肿瘤的复发与转移。可见，常规方法尚不能检出已转移的少量肿瘤细胞。近年来，随着免疫学和分子生物学技术的飞速发展，使判断肿瘤的微小转移成为可能。肿瘤微转移的检测为手术方式的选择及清扫范围提供了一个更客观、更直接的依据，还可作为疗效和早期复发监测的指标，有助于建立在治疗强度、持续时间上不同的、个体化的治疗方案1。细胞角蛋白（Cytokeratin CK）是细胞骨架蛋白之一，泌尿道、生殖道及腺体导管中均含有不同程度的CK，CK18、CK19是诊断肿瘤微转移的常用生物学指标2。CK20是最近发现的一种细胞角蛋白，在上皮源性的肿瘤中存在表达，而外周血和淋巴组

4、织中无表达。CK20的这种表达特性已广泛用于子宫内膜癌3、膀胱癌等肿瘤微转移的诊断。肾癌是来源于肾小管上皮的常见恶性肿瘤，易发生血行及淋巴转移，目前，对肾癌微转移的研究甚少，肾周淋巴结微转移的研究及利用CK20诊断肾癌微转移国内外均未见文献报道。 目前，肾癌的治疗仍以手术治疗为主，术后辅以免疫治疗。手术方法及免疫治疗对血行微转移的影响国内外均未见文献报道。而这些问题的阐明对手术方法的改进、肾癌转移机制的进一步了解及判断免疫治疗的确切效果均具有十分重要的意义。本研究拟采用RT-PCR方法检测肾癌患者外周血、骨髓及肾周淋巴结CK18、CK19、CK20 mRNA的表达，Southern杂交判定结果

5、，如为阳性，即表示存在血行或淋巴微转移，探讨CK18、CK19、CK20在肾癌微转移诊断中的价值；阐明肾癌微转移在围手术期及免疫治疗后的变化及与预后的关系，为肾癌患者制订个体化的治疗方案提供客观依据。参考文献1. Matsumoto-M, Natsugoe-S, et al. Clinicalsignificance oflymph node micrometastasis of pNO esophageal squamous cellcarcinoma. Cancer-Lett. 2000 May 29; 153(1-2): 189-972. Slade-MJ, Smith-BM, Sinn

6、et-HD, et al. Quantitative polymerase chain reaction for the detection of micrometatases in patients with breast cancer. J Clin Oncol.1999;17(3):870-93. Fishman-A, Klein-a, Zemer-R, et al. Detection of micrometatasis by cytokeratin-20 (reverse transcription polymerase chain reaction) in lymph nodes

7、of patients with endometrial cancer. Gynecol-Oncol. 2000,77(3):399-4044. Gudemann-CJ, Weitz-J, Kilenle-P, et al. Detection of hematogenous micrometatasis in patients with transitional cell carcinoma. J-Urol. 2000 Aug, 164(2):532-6二、研究方案1研究目标、研究内容和拟解决的关键问题研究目标：寻找诊断肾癌微转移的良好生物学指标；阐明肾癌治疗方法对微转移的影响及微转移与预后

8、的关系。研究内容： 1、采用RT-PCR方法检测30例肾癌患者外周血、骨髓及手术清扫肾周淋巴结CK18、CK19、CK20 mRNA的表达，10例健康志愿者的外周血、骨髓及10例非癌患者肾周淋巴结作为对照，Southern 判定结果，如阳性，即表示存在血行或淋巴微转移，探讨CK18、CK19、CK20在肾癌微转移诊断中的价值。 2、检测肾癌患者术前、术后1小时、术后3天外周血、骨髓CK18、CK19、CK20 mRNA的表达变化，探讨手术对血行微转移的影响。 3、检测肾癌血行微转移阳性患者免疫治疗结束后外周血、骨髓CK18、CK19、CK20 mRNA的表达变化，探讨免疫治疗对血行微转移的影响

9、。 4、对患者进行随访，探讨微转移与患者预后之间的关系。拟解决的关键问题： 1、阐明CK18、CK19、CK20在肾癌微转移诊断中的价值。 2、明确肾癌手术对血行微转移的影响。 3、明确免疫治疗对血行微转移的影响，以确切判断免疫治疗的效果。4、明确肾癌微转移与患者预后之间的关系。2拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析外周血、骨髓及手术清扫肾周淋巴结总RNA抽提反转录成cDNAPCR扩增Southern blot 判定结果围手术期及免疫治疗后微转移变化及与预后的关系可行性分析： 外周血取自周围静脉、骨髓取自髂骨穿刺、淋巴结取自肾周清扫组织，因此，标本容易获得；CK18、CK19诊断肾

10、癌血行微转移各有一篇文献报道，CK20在诊断其他肿瘤微转移的研究中有大量文献报道；本研究所用实验方法成熟，因此具有很好的可行性。3本项目的特色与创新之处（1） CK20诊断肾癌微转移的研究国内外均未见文献报道。（2） 肾癌患者淋巴结微转移的研究国内外均未见文献报道。（3） 围手术期肾癌患者血行微转移的变化研究国内外均未见文献报道。（4） 免疫治疗对肾癌患者血行微转移的影响研究国内外均未见文献报道。（5） 肾癌患者微转移与预后的关系研究国内外均未见文献报道。 4计划进度2001.10-2004.6 标本收集、RNA抽提、RT-PCR、Southern blot 。2004.7-2004.10随访

11、、资料分析、论文撰写。三、研究基础1与本项目有关的研究工作积累和已取得的工作成绩2已具备的实验条件、尚缺少的实验条件和拟解决的途径 3合（协）作形式和合（协）作单位意见 （1）合（协）作形式 （2）合（协）作单位意见 对合作、协作内容、形式、参加人员素质及保证工作条件具体意见负责人签章单位公章 年 月 日四、申请者简介4申请者学历(应注明学位论文名称及导师姓名与工作单位)和研究工作简历，获得的科研成果、荣誉称号，发表的著作、论文名称(应注明出处)： 五、预期研究成果1. 预期的研究成果、考核指标及提供成果的形式(1) CK18、CK19、CK20是诊断肾癌微转移的较好指标。(2) 肾癌手术对肾

12、癌血行微转移有一定影响，对选择手术方 法具有一定的指导意义。(3) 血行微转移变化可作为判断肾癌免疫治疗效果的客观指标。(4) 肾癌微转移与预后密切相关。2. 项目完成的经济、社会效益和理论意义（1）发表论文5-8篇（2）培养研究生2-4名（3）指导肾癌患者的治疗六、经费预算申请资助总金额(万元)5.5万元其它经费来源及金额预算科目金 额 (万 元)计算根据及理由1.小型设备仪器购置费1购买电泳仪、双蒸器、震荡器等2.科研业务费0.5标本收集、出差、随访、检索等3.实验材料费3购买RNA抽提试剂盒、杂交试剂、PCR常用试剂、引物合成、液氮、硝酸膜、PCR管、冻存管等4.管理费0.55.其它费用

13、0.5论文撰写及发表费用等七、项目组成员情况表八、申请者正在承担的其它研究项目(包括国家级、各部委、省市的任务等的名称、任务来源、起止年月、负责或参加等情况)九、申请者承担（负责或参加）市教委基金资助项目的情况项目编号项目名称起止年月负责或参加进展或完成情况十、申请者所在单位的审查与保证1对立题、经费预算及能否保证计划实施所需人力物力等签署具体意见已按填表说明对申请人进行了资格审查，对审请书内容进行了审核，保证在项目获得资助后做到以下几点：（1） 保证对研究计划实施所需的人力、物力和工作时间等条件给予支持。（2） 严格遵守有关资助项目管理、财务等各项规定。（3） 督促项目负责人和本单位项目管理

14、部门按基金委员会的规定及时报送有关报表和材料。行政领导签章 公 章 年 月 日十一、单位人事部门意见2对申请者在研究期间时间上的保证和工作岗位的稳定签署意见人事部门负责人签章 公 章 年 月 日十二、上海市教育委员会审核意见盖 章 年 月 日项 目 合 同经上海市教育委员会（甲方）与 同济大学 （乙方）共同协商，现就下列条款取得一致意见并承担各自的义务：一、签署双方一致同意上海高等学校科学技术发展基金管理办法中所列的各项条款，并按照执行。二、为研究本项目，甲方同意资助承担方 万元，拨款时间为：200 年拨款 万元；200 年拨款 万元；项目完成后拨款 万元。三、乙方应在本合同生效之日起 个月内，即200 年 月底前完成申请书中规定的内容并填写总结报告。四、合同其它条款如下：五、合同一式四份，分存甲方一份、乙方三份。签订合同各方：资助单位（甲方）：上海市教育委员会 （公章）代表： （签章）年 月 日承担单位： （公章）项目主持人： （签章）单位保证人： （签章）年 月 日