PCR仪使用手册.docx

1、PCR仪使用手册BiometraTgradient用户手册型号050-810Tgradient48050-811Tgradient96BiometrabiomedizinischeAnalytikGmbHRudolf-Wissell-Str.30,D-37079GoettingenTel.:0551/50686-0;Fax:0551/50686-66email:1目录1目录2介绍3使用前3.1安全警告3.2警告标志4Tgradient的初始操作步骤4.1Tgradient前视图4.2Tgradient后视图4.3Tgradient控制板4.4初始自检4.5Tgradient的显示4.6操作可调

2、节的热盖4.7盖子卡住时如何放开转轮5创建一个程序5.1选择一个目录5.2选择一个程序储存库5.3输入子目录的名称5.4输入程序名5.5输入热盖的温度5.6选择/取消热盖预热5.7输入温度和时间设置5.8设置温度梯度5.9查看模块的温度梯度值5.10设置循环次数5.11冷却到环境温度以下5.12储存程序6浏览/编辑程序数据6.1删除/插入程序档6.2拷贝程序6.3删除程序7其他选项的设置7.1设置时间增量7.2设置“触地”（touchdown）PCR7.3调节加热和冷却坡度8运行程序8.1选择和开始程序8.2操作过程中的显示8.3浏览剩余的运行时间8.4察看当前的温度梯度8.5暂停/停止程序9

3、特别功能9.1打印协议9.2警报声的开关9.3选择语言9.4标准模式/测试模式9.5RS232-控制器10微板的密封10.1在PCR中密封微板10.2取下热封膜11维护12问题解答12.1减慢加热和冷却的速度12.2由于断电重新启动12.3来自其他PCR仪的协议的更改13.Tgradient96技术参数2介绍Tgradient是Biometra产品系列中新型的高端热循环仪。开发一款快速优化反应参数以及常规分析的高性能仪器一直是Biometra的目标。而通过新型的模块构建和最先进的Peltier技术，实现了这两个目标。为了增加PCR反应的特异性，退火温度是最关键的参数之一。利用新型的Tgradi

4、ent，通过一次试验可以测试出最佳的退火温度，在程序的任何步骤设定的温度梯度最大可以达到40C。Biometra通过不懈努力使温度梯度尽可能的呈线性。同时确保每一排均一的温度分布也非常重要，每一排的温度可以通过帮助菜单进行查看。新型的Tgradient是一款出众的仪器，不仅提供先进的温度梯度，还保证了常规运用时的高速度和可靠的准确性。镀金银模块设计保证了高效的热传导性，确保了快速的升降温速度和模块的温度平衡。新型的Tgradient会大大加快实验室的工作效率，因为它在优化反应条件和常规运用中节省了大量的时间。3使用前3.1安全警告设备连接电源之前，请确认仪器后部的电压选择器设置在正确的电压上了

5、。电击危险！打开Tgradient之前请拔下电源线。没必要在试管和槽之间加油，以促进热量传输。如果您仍然决定用油，不要使用硅油，只能用矿物油。3.2警告标志在操作过程中热槽和热盖会达到很高的温度。如果用裸露的皮肤接触会烫伤。样品的快速加热可以导致液体滚动翻腾。在操作过程中一定要带好护目镜。启动一个程序之前应关好盖子。保证设备后部和底部的通风口没有堵塞。通风不充分可能会导致设备的温度过高。4Tgradient的初始步骤4.1Tgradient前视（图形见英文说明书）热盖的高度调节轮图形显示键盘电源开关4.2Tgradient后视（图形见英文说明书）平行打印端口（centronics）串行接口RS

6、232电源线插头保险丝盒，可放2个保险丝，具体规格见设备后面的型号标识板4.3Tgradient控制板（图形见英文说明书）（由左向右）图形显示电源开关：背光电源打开功能键：相应的具体功能在屏幕上指示光标键：用来在设置程序的时候自由移动。用来在列表中滚动。容易清洁的键盘4.4初始自检启动Tgradient之后，会显示设备的序号和软件版本。TgradientSerialNo1234567opTgradient检查所有目录下的程序（也叫RAM检查）。4.5Tgradient的显示Tgradient的显示提供关于设备的信息和运行程序的状态。ProgStepTemp25.2?CTimeLid25.4?C

7、AinfoBstart/stopCprogramsD+A,B,C,D键的各自的具体功能是由显示屏指出的，与所处状态相关。4.6可调节的热盖的操作为了向试管施加理想的压力，Tgradient装有一个可调节高度的热盖，可以进行自动的压力控制（智能盖技术）。关上盖子：把样品放置到槽中之后，把盖子关上。顺时针旋转盖子，直到听到咔哒一声。在这种状态下，即使你继续旋转转轮，压力不会再增加了。注意：盖子的压力在满槽的时候达到最佳。如果槽中的试管很少，你应该在四个角的位置上放置一些空薄壁管，以避免压力过大使试管损坏。打开热盖：逆时针旋转转轮释放压力。不再有阻力的时候就说明压力已经释放了。现在您可以打开盖子。重

8、要：请注意顺序！有压力的时候千万不能打开盖子，因为这样可能会损坏门锁系统。4.7在盖子卡住的情况下释放转轮注意：如果盖子处于最高或最低的位置上，转轮可能脱钩了。在这种情况下，离合器机械装置在两个方向上都可以启动（在任一方向都可以发出咔哒的声音）。要把转轮打开，用一支圆珠笔按住金属针，小心的旋转转轮。这个针会克服自动离合器装置。因此，要注意不要施加过大的压力。盖子卡在顶部：按住金属针，顺时针小心的旋转转轮，直到您可以感觉到正常的阻力（不再有咔哒声，离合器已经放开了）。把金属针松开，把盖子放下，直到离合器装置启动（咔哒声，施加理想压力）盖子卡在底部：按住金属针，逆时针小心的旋转转轮，直到您可以感觉

9、到正常的阻力（不再有咔哒声，离合器已经放开了）。把金属针松开，逆时针旋转转轮，直到压力全部放出。打开盖子。重要：在离合器装置启动的状态下（施加理想压力时），千万不要使用金属针继续增加压力。这会导致试管和设备的损坏！5创建一个程序5.1选择一个目录在Tgradient中，程序既可以储存在主目录中，也可以储存在9个单独的子目录中。在每个子目录中，最多可以储存100个程序。为了方便的识别选择的储存位置，子目录可以被命名。（见5.3）由主菜单开始。ProgStepTemp25.2?CTimeLid25.4?CAinfoBstart/stopCprogramsD+按Cprograms进入编辑模式。Edi

10、t|-3.subdirect.:|-4.subdirect.:maindirect.-|-5.subdirect.:|-6.subdirect.:|-7.subdirect.:A?BCquitDenter现在您位于主目录中。屏幕显示出子目录的结构。5.2选择一个程序储存库程序可以储存在主目录或者子目录中。要在主目录中创建一个程序请按Denter。要进入一个子目录，用光标键?将光标向右移动，然后用光标键?选择一个子目录。选择的目录会以强光突出出来。Edit|-3.subject.:|-4.subject.:maindirect.-|-5.subject.:|-6.subject.:|-7.sub

11、ject.:A?BnameCquitDenter5.3输入子目录的名称为子目录和程序命名的方法是一样的。有关程序的命名见5.4。按Denter进入选择的子目录。Directory:5Programno:name:EditAlistBCquitDenter按Alist浏览该目录下所有已建立文档和空文档的列表。0empty1empty2empty3empty4emptyAbackBforwardCquitDenter用光标键?在列表中滚动，然后用Denter确认其中一个记忆库。注意：如果既没显示程序名，又没显示“empty”，那这个位置可能存了一个没有命名的程序。对于新的协议，应选择一个空的记忆库

12、。没有用的程序应该删除，以提供新的记忆库。5.4输入程序名每一个程序都指定了一个程序号和一个子目录号。要想更方便的检索一个程序，您可以输入一个由字母，数字和符号组成的名称。Directory:5Programno:0name:?ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ-()#?C/,&+.%!AABCBfilesCquitDenter要输入程序名请按AABCDirectory:5Programno:0name:?ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ-()#?C/,&+.%!AnameBblankCnameOKDenter用光标键?从字母中选择一个，用Denter确认

13、。Directory:5Programno:0name:T?ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ-()#?C/,&+.%!AnameBblankCnameOKDenter选择的字母会在显示屏上出现，光标会向右移动一格。选择下一个字母，用Denter确认。注意：如果系统接受了一个错误的字母该怎么办？按Aname在名称内移动光标。现在您可以用光标键?在名称上移动光标了。按了AABC之后，您可以输入新的字母。您也可以使用这个功能去更改一个已存程序的名称。一旦名称输入完成了，用Cnameok确认。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:?Cpre

14、heating:onEditA?BfilesCpgmOKDenter5.5输入热盖的温度您现在可以输入热盖的温度了。一般来说，盖子的温度应该比协议中的最高温高10?C。例如：如果变性（denaturation）步骤的温度是95?C，那盖子温度就输入105?C。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:105.0?Cpreheating:onEditA?BfilesCpgmOKDenter注意：进行微板的热封应该把盖子温度设置为110?C（见10）。5.6选择/取消盖子的预热您可以在程序启动之前选择盖子是否需要预热。目的是避免在初始加热阶段出现凝结现象。注意

15、：在大多数操作中建议使用的默认设置是：preheating:on。在盖子预热过程中，槽的温度保持在25?C。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:105.0?Cpreheating:onEditAon/offBfilesCpgmOKDenter完成了所有的预先设置之后，按Denter打开设置页。5.7输入温度和时间设置在这个设置页中，您可以输入您的循环协议中需要的所有参数。此外，您可以设置特殊参数，如触地(touchdown)，坡度率，或时间增量。有关特殊参数的详细信息见6。设置页：Temp?Ctime?#gradient?Coptions?1:2:3

16、:4:A?Binsert/deleteCpgmOKDenter每一个设置都用Denter来确认。光标自动移动到下一个区域。或者，您可以通过向前移动光标键来确认一个数值。注意：您可以使用四个光标键在设置页中自由移动。用光标键?您可以回到预先设置中。您可以随时用A?启动帮助功能。现在输入协议中第一档的温度：Temp?Ctime?#gradient?Coptions?1:95.02:3:4:A?Binsert/deleteCpgmOKDenter用Denter确认温度，或则会只是将光标键向前移动。如果您移动到了下一行，设置将会储存在临时记忆库中。Temp?Ctime?#gradient?Coptio

17、ns?1:95.02:3:4:A?Binsert/deleteCpgmOKDenter为第一档输入一个时间。注意：BIOMETRA所有PCR仪的时间的设置都是相同的：小时?分钟?秒钟如果您输入了一个没有“?”的数字，这个数值将会被认为是秒钟（“300”=5分钟）。要设置分钟，应在输入了分钟数之后输入一个“?”。要设置小时，在小时数后面输入?。当然，您也可以输入小时，分钟和秒钟的组合。例如1小时，30分钟，20秒钟应该这样输入：“1?30?20”。这个时间数值将用以下形式表示出来：0h00m00s。用Denter确认时间设置，或者用光标键移动到下一个区域。5.8设置温度梯度每一个温度梯度由两个设

18、定值确定，(1)模块中部的温度和(2)温度梯度的范围。例如，如果想设定温度梯度的范围为50到60C，那么在“gradient”下面输入的温度值为55C。Temp?Ctime?#gradient?Coptions?1:95.00h5m0s2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s104:72.00h0m30s229A?Binsert/deleteCpgmOKDenter最大温度梯度可达40?C，当程序运行到第三步时模块的第1列（左起）至第12列温度为55?C至65?C。通过在gradient下面的梯度值前加一“”号，可以形成反向的温度梯度，即从右到左温度不断升高。5.9查看模块的温度梯

19、度值查看12排各排的温度时，选择A?，显示如下：TempCtime?#gradientCoptions?T16:50.050.250.952.053.254.4CT712:55.656.858.059.159.860.0C3:55.00h0m30s10C4:Temperaturedifferenceleftside/rightside第1和2排分别显示的是模块中16和712排的温度。5.10设置循环次数（?）一般来说，循环是通过选择返回循环的目标和返回循环的次数来定义的。在用?标记的列中，您可以选择返回循环的目标档。Temp?Ctime?#gradientoptions?1:95.00h5m0

20、s2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s2A?Binsert/deleteCpgmOKDenter现在输入返回循环次数（）。注意：总循环数（n返回循环）1，即，总循环数为30时应输入“29”。Temp?Ctime?#gradientoptions?1:95.00h5m0s2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s229A?Binsert/deleteCpgmOKDenter5.11冷却到环境温度以下Temp?Ctime?#gradientoptions?2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00

21、h0m30s2295:4.0pauseA?Binsert/deleteCpgmOKDenter要想无限长的保持这个温度，输入“0”。按了Denter后显示“pause”。注意：您可以设置的最低温是-3?C。5.12储存程序用Cpgmok来储存一个完整的程序。程序数据永久的储存在记忆中：Directory:5Programno:0name:TEST1Numberofsteps:5Runtime:0h43m19sABCD运行时间计算并显示出来。注意：要想随时浏览当前剩余的运行时间，按主菜单中的Ainfo。6浏览/编辑程序数据您可以通过在编辑模式下移动光标键来检查任何已存的程序。按照5.2所述选择需

22、要的程序。注意：在PCR仪工作的过程中，只能浏览正在运行的程序，不能更改。如果您想要改变运行程序的设置，以进行下面的实验，您必须将这个程序拷贝到另一个记忆库中，有关拷贝程序的内容见6.2。6.1删除/插入程序档设置页：Temp?Ctime?#gradientoptions?2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s2295:A?Binsert/deleteCpgmOKDenter要删除或者插入一个程序档，请按Binsert/delete。Insert/deletestep:2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s2295

23、:A?Binsert/deleteCpgmOKDenter输入您想要插入/删除的档号。增加的档会插入到选择的档之前。下面的档会移动一个位置。Insert/deletestep:32:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s2295:A?Binsert/deleteCpgmOKDenter注意：如果您输入了一个错误的数字，可以用Bdeleteinput来清除。用Denter确认档号。Insert/deletestep:3？2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s2295:AinsertBdeleteCquitD按Ainser

24、t在选择的位置插入一个档。按Bdelete删除选择的档。删除一个档后，下面的档会向前移动一个位置。注意：插入和删除档的操作可能会对已经存在的循环有影响。要确保循环中的所有的最新设置都是正确的。6.2拷贝程序按照5.1和5.2所述的方法选择您想要拷贝的程序。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:105.0?Cpreheating:onEditA？BfilesCpgmOKDenter按Bfiles。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:105.0?Cpreheating:onEditAcopyBdeletepgmC

25、quitDenter按Acopy将程序拷贝到另一个记忆库中。Copyto|-3.subdirect.:|-4.subdirect.:maindirect.-|-5.subdirect.:|-6.subdirect.:|-7.subdirect.:A?BCquitDenter用光标键?选择需要的子目录。选择的子目录会用强光突出出来。Copyto|-3.subdirect.:|-4.subdirect.:maindirect.-|-5.subdirect.:|-6.subdirect.:|-7.subdirect.:A?BCquitDenter用Denter确认您的选择。Copyfromdirec

26、tory5program0Toderectory6programAlistBCquitDenter用Alist选择一个空的记忆库。Copyfromdirectory5program0Toderectory6program4？Enter=okTargetprogramcontains0stepsABCquitDenter在您用Denter确认之前，会检查目标记忆库。如果目标记忆库中没有程序，会显示“targetprogramcontains0steps”(目标程序中包括0个档)。如果记忆库中有一个程序，就会显示档的数目。注意：如果您把程序拷贝到一个已经含有程序的记忆库，原来的程序将被删除！用De

27、nter将程序的拷贝储存在新的目录下。6.3删除程序按照5.1和5.2的方法选择一个程序。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:105.0?Cpreheating:onEditAcopyBdeletepgmCquitDenter按Bdeletepgm可以删除这个程序。Directory:5Programno:0name:TEST1Lidtemp:105.0?Cpreheating:onDeleteprogram0?enter=yesABCquitDenter用Denter确认您的选择，一旦删除了一个程序，就不能重新储存了！7其他选项的设置要设置一些特殊

28、的参数，您可以将显示向右滚动。用光标键?移动到显示屏的最右边。Temp?Ctime?#gradientoptions?1:95.00h5m0s2:95.00h0m30s3:60.00h0m30s4:72.00h0m30s229A?BheaderCpgmOKDenter会出现下列显示：Mainfunct.dT?Cdts?/s1:5.002:5.003:5.004:5.00A?Binsert/deleteCpgmOKDenter注意：要返回带有基本参数的显示请按光标键。或者，您可以将光标移动到最右边。Temp?Ctime?#options?1:95.00h5m0s2:95.00h0m30s3:60

29、.00h0m30s4:72.00h0m30s229A?Binsert/deleteCpgmOKDenter注意：在主显示中会指示一个特殊参数已经更改了。在options?这行中用指示。7.1设置时间增量为了对酶的活性降低作出补偿，在一个连续循环中的不同工作流程之间，档的长度可以逐渐增加。在标有dts的行中输入需要的时间增量秒。这一数值将会被加在每个工作流程的时间数值上。Mainfunct.dT?Cdts?/s2:5.003:5.004:25：5.00A?BdeleteCquitDenter注意：时间增量会对总的运行时间造成影响，改变多少由流程数目和增量的大小决定。一个包含很多流程，并且时间增量很大的程序会比标准协议的运行时间长很多。7.2程序“触地”（touchdown）PCR一些操作需要以一个较高的退火温度开始，然后随着流程的循环逐渐降低温度。我们把退火温度逐渐降低叫做“触地”，为了使退火温度随流程的循环逐渐降低，需要在标有dT?C的行中输入一个负的温度增量。Mainfunct.dT?Cdts?/s2:5.00