溶液配制方法p.docx

1、溶液配制方法p实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 组份浓度：1 M Tris-HCl，配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N）浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后

2、，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。TrisHCl冲液（0.05M，25）50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。pHX(毫升)pHX(毫升)7.107.207.307.407.507.607.707.807.908.0045.744.743.442.040.338.536.634.532.029.28.108.208.308.408.508.608.708.808.9026.222.919.917.214.712.410.3

3、8.57.0三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2-CH2OH-CHOCH2-NH2分子量=121.14;0.1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA，配制量：1 L，配制方法：1. 称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。2. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。3. 加去离子水将溶液定容至1 L，适量分成小份后，高温高压灭菌，室温保存。10TE Buffer

4、 (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA，配制量：1 L3 M 醋酸钠(pH5.2) 组份浓度：3M 醋酸钠，配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中，加入40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。PBS Buffer (1)组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2mM KH2PO4，配制：1 L配制方法：称量试剂:8g NaCl, 0.2g KCl,

5、1.44g Na2HPO4, 0.24g KH2PO4，置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。高温高压灭菌后，室温保存。PB缓冲液(pH8.0)：1L NaH2PO4 0.16537g, Na2HPO4 6.7817g.注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵，配制量：100 ml配制方法： 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2

6、. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。常用缓冲液的配制方法1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M）X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M盐酸 再加水稀释至200ml.pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml2.2 50 44.0 3.0 50 11.42.4 50 32.4 3.2 50 8.22.6 50 24.2 3.4 50 6.42.8 50 16.8 3.6 50 5.0甘氨酸分子量75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L.2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（

7、0.05M）X ml 0.2M邻苯二甲酸氢钾 +Y ml 0.2M盐酸 再加水稀释至200ml.pH X Y pH X Y2.2 5 4.670 3.2 5 1.4702.4 5 3.960 3.4 5 0.9902.6 5 3.295 3.6 5 0.5972.8 5 2.642 3.8 5 0.2633.0 5 2.032 邻苯二甲酸氢钾分子量2.4.23 0.2M邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85g/L.3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml2.2 0.40 19.6 5.2 10.7

8、2 9.282.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.852.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.402.8 3.17 16.83 5.8 12.09 7.913.0 4.11 15.89 6.0 12.63 7.373.2 4.94 15.06 6.2 13.22 6.783.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.153.6 6.44 13.56 6.6 14.55 5.453.8 7.10 12.90 6.8 15.45 4.554.0 7.71 12.29 7.0 16.47 3.534.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.614.4

9、8.82 11.18 7.4 18.17 1.834.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.274.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.855.0 10.30 9.70 8.0 19.45 0.55Na2HPO4分子量141.98 0.2M溶液含28.40g/LNa2HPO42H2O分子量178.05 0.2M溶液含35.61g/LC6H8O7H2O分子量210.14 0.1M溶液含21.01g/L4.柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液pH 钠离子浓度/M 柠檬酸C6H8O7H2O/g 氢氧化钠NaOH/g 浓盐酸HCl/ml 终体积/L2.2 0.20 210 84 16

10、0 103.1 0.20 210 83 116 103.3 0.20 210 83 106 104.3 0.20 210 83 45 105.3 0.35 245 144 68 105.8 0.45 285 186 105 106.5 0.38 266 156 126 10使用时可以每升中加入1g酚，若最后pH有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1M）pH0.1M柠檬酸/ml0.1M柠檬酸钠/mlpH0.1M柠檬酸/ml0.1M柠檬酸钠/ml3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.0

11、5.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.610418.64.89.210.8C6H8O7H2O分子量210.14 0.1M溶液含21.01g/LNa3C6H5O72H2O分子量294.12 0.1M溶液含29.41g/L6.乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2M）pH 0.2M NaAc/ml 0.2M HAC/ml pH 0.2M NaAc/ml 0.2M HAC/ml3.6 0.75 9.25 4.

12、8 5.90 4.103.8 1.20 8.80 5.0 7.00 3.004.0 1.80 8.20 5.2 7.90 2.104.2 2.65 7.35 5.4 8.60 1.404.4 3.70 6.30 5.6 9.10 0.904.6 4.90 5.10 5.8 9.40 0.60NaAc分子量136.09 0.2M溶液为27.22g/L7.磷酸盐缓冲液(PB)磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）pH0.2M Na2HPO4/ml0.2M NaH2PO4/mlpH0.2M Na2HPO4/ml0.2M NaH2PO4/ml5.88.092.07.061.039.05.910.09

13、0.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.07.06.849.551.08.094.75.36.955.045.0Na2HPO42H2O分子量178.05 0.2M溶液含35.61g/LNa2HPO412H2O分子量358.22 0.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4

14、H2O分子量138.01 0.2M溶液含27.6g/LNaH2PO42H2O分子量156.03 0.2M溶液含31.21g/L(2) 磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15M）pH1/15M Na2HPO4/ml1/15M KH2PO4/mlpH1/15M Na2HPO4/ml1/15M KH2PO4/ml4.920.109.907.177.003.005.290.509.507.388.002.005.911.009.007.739.001.006.242.008.008.049.500.506.473.007.008.349.750.256.644.006.008.679.900.106.

15、815.005.009.1810.0006.986.004.00Na2HPO42H2O分子量178.05 1/15M溶液含35.61g/LKH2PO4分子量136.09 1/15M溶液含9.078g/L8.磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05M）X ml 0.2M KH2PO4 +Y ml 0.2M NaOH 再加水稀释至20mlpH(20) X/ml Y/ml pH(20) X/ml Y/ml5.8 5 0.372 7.0 5 2.9636.0 5 0.570 7.2 5 3.5006.2 5 0.860 7.4 5 3.9506.4 5 1.260 7.6 5 4.2806.6 5 1.7

16、80 7.8 5 4.5206.8 5 2.365 8.0 5 4.6809.巴比妥钠-盐酸缓冲液（18）pH 0.04M巴比妥钠/ml 0.2M盐酸/ml pH 0.04M巴比妥钠/ml 0.2M盐酸/ml6.8 100 18.4 8.4 100 5.217.0 100 17.8 8.6 100 3.827.2 100 16.7 8.8 100 2.527.4 100 15.3 9.0 100 1.657.6 100 13.4 9.2 100 1.137.8 100 11.47 9.4 100 0.708.0 100 9.39 9.6 100 0.358.2 100 7.21 100 巴比妥

17、钠分子量206.18 0.04M溶液为8.25g/L11.硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）pH 0.05M硼砂/ml 0.2M硼酸/ml pH 0.05M硼砂/ml 0.2M硼酸/ml7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0硼砂Na2B4O710H2O分子量381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液为19.07g/L硼酸H3BO3分子量61.84 0.2M溶液为12.37g/L硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存12.甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（

18、0.05M）X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M氢氧化钠 再加水稀释至200mlpH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml8.6 50 4.0 9.6 50 22.48.8 50 6.0 9.8 50 27.29.0 50 8.8 10.0 50 32.09.2 50 12.0 10.4 50 38.69.4 50 16.8 10.6 50 45.5甘氨酸分子量75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L13.硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）X ml 0.05M硼砂 +Y ml 0.2M氢氧化钠 再加水稀释至200mlpH X/ml Y/ml pH X/ml Y/

19、ml9.3 50 6.0 9.8 50 34.09.4 50 11.0 10.0 50 43.09.6 50 23.0 10.1 50 46.0硼砂Na2B4O710H2O分子量381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液为19.07g/L14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+，Mg2+存在时不得使用pH 20 9.16 9.40 9.51 9.78 9.90 10.14 10.28 10.53 10.8337 8.77 9.12 9.40 9.50 9.72 9.90 10.08 1028 10.570.1M碳酸钠/ml 1 2 3 4 5 6 7 8 90.1M碳酸氢钠/ml

20、 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Na2CO310H2O分子量286.2 0.1M溶液28.62g/L，NaHCO3分子量84.0 0.1M溶液8.40g/L 3M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠，配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。10 M 醋酸铵，配制量：100 ml，配制方法：1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将

21、溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护

22、镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。 加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌

23、15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（2

24、4 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。10% (W/V) SDS 组份浓度：10% (W/V)SDS，配制量：100ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解; 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2; 3.将溶液定容至100ml后，室温保存。2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH，配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离

25、子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。Solution I(质粒提取用试剂)组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose，配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。2. 高温高压灭菌后，4保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1%(W/V)SDS，配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10% SDS50ml, 2N

26、NaOH 50ml;2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀，3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月，注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M 乙酸，配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4保存。1 M DTT 组份浓度：1 M DTT，配制量：20 ml，配制方法：1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5

27、.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20保存。IPTG (Isopropyl -D-1-Thiogalactopyranoside) 异丙基-D-硫代半乳糖苷，别名Isopropyl -D-Thiogalactoside白色或白色粉末,溶于水后呈清亮无色液体 分子式：C9H18O5S 分 子 量: 238.30，2-8C冷藏保存。10 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP，配制量：20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。3.

28、适量分成小份后，-20保存。饱和硫酸铵1.不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据温 度（）010202530重量百分数41.4242.2243.0943.4743.85摩尔浓度3.93.974.064.104.13每1000g水中含硫酸铵摩尔数5.355.535.735.825.911000ml水中用硫酸铵克数706.8730.5755.8766.8777.5每1000ml溶液中含硫酸铵克数514.8525.2536.5541.2545.92. 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25）在 25 硫 酸 铵 终 浓 度 ，% 饱 和 度硫 酸 铵 初 浓 度 ， 饱 和 度10202530333540455055606570758090100每 1000ml 溶 液 加 固 体 硫 酸 铵 的 克 数056114144176196209243277313351390430472516561662767105786118137150183216251288326365406449494592694202959789112315518922526230034038242452061925304961931251581932302673073483904