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1、诺尼果汁安全性的研究综述西沙诺丽酵素综述 诺尼的保健功效国际最新研究进展论文集Journal of Food Science, 2006, 71(8): 100-106.诺尼果汁安全性的研究综述诺尼果汁安全性的研究综述B.J.Westa，C.J.Jensena，J.Westendorf andL.D.Whitea（a大溪地诺尼国际研究发展部，普洛佛，美国；b汉堡综合大学医学院毒理学系，汉堡，德国）摘要：诺尼（海巴戟天）果在热带地区已有很长的食用和药用历史，最近诺尼作为膳食补充剂的应用大大增加。本文对诺尼果的最新研究成果和信息进行了综述，论证了诺尼果食用的安全性。众多食品安全基础实验和临床研究表

2、明，即便食用高剂量的诺尼果对人体健康也没有危害。现有的数据证明其作为安全食品可以继续使用。关键词：临床研究；膳食补充剂；果汁；海巴戟天（诺尼）果；安全性；毒性。引言诺尼是一种生长于全球热带地区的多年生常绿阔叶小乔木。Morton(1992)对诺尼果在太平洋诸岛和东南亚地区医书中的药用历史进行了报道(Dixon and others 1999；Mc Clatchey 2002)。近十年间，诺尼果汁在全球的普及正在迅速增长。一些公开出版物发表了诺尼果对健康的诸多益处(Wang and others 2002)，有些期刊则认为其安全性是有局限的。一些案例的报道认为食品安全事故与食用诺尼果汁有关(Mu

3、eller and others 2000; Carrand Bergeron 2004; Millonig and Others 2005; Stadlbauer and others 2005)，但是缺乏细节的报道和数量过少的实例难以给出充分的论据。另一方面，诺尼果汁已经通过了欧盟官方的食品安全评估，证明人食用诺尼果是安全的 (European Commission 2002)。本综述补充了报道中缺少的信息，并参考了已发表的文献，为专门从事诺尼果汁安全性评估的专家和科学家提供支持和帮助。1 用于传统食品诺尼果在波利尼西亚、美拉尼西亚和东南亚地区的传统医学中具有重要的位置，大量植物学的研究表

4、明诺尼果具有食用价值(Rock 1913；Wilder 1934；Brown 1935；Yuncker 1943；Turbott 1949；Stone 1970；Degener 1973；Uhe 1974；Seemann 1977；Whistler 1992；Krauss 1993；Terra 1996)。一些报道称人们对诺尼的食用源于早期的饥荒所迫(Krauss 1993)，但这种说法显然不能成立。这种水果被作为毛利岛原住民的食物报道（Cheeseman 1903），也是缅甸人制作咖喱粉所需准备的原料之一(Sturtevant 1919)，澳洲原著民对这种水果的热爱众所共知(Maiden 1

5、889)。探险家James Cook的奋进号船长Sydney Parkinson在1769年记载了塔希提岛原住民对诺尼的喜爱 (Parkinson 1773)，这一记载被认为是诺尼作为人类食物的早期文字记载。200年后的1943年，美国政府将这种水果认定为可食用植物资源(Merrill 1943)，大量的经验表明食用诺尼对人体无害。 2 安全性评估2.1 毒理学实验已进行了诺尼果提取物对小鼠的急性毒性试验。在对4周的雄性小鼠进行腹腔注射试验时发现，果实和叶片的甲醇提取物半数致死量（LD50）均大于1000mg/kg (Nakanishi and others 1965)。此外，诺尼果提取物没有

6、引起任何明显的毒性症状，包括抽搐，腹泻，尾勃起，或眼球突出。通过对3周龄雌性小鼠腹腔注射方法确定诺尼果水和乙醇提取物的LD50分别为7500毫克/千克和3500毫克/公斤体重(Chearskul and others 2004)。这些值与诺尼果粗提物的急性腹腔注射LD50相一致。来自大溪地的诺尼果浓浆，按剂量为15000毫克/公斤的SD大鼠进行灌胃给药。在给药2周后观察其反应。所有大鼠均未发现任何中毒症状或行为异常情况。相反的所有大鼠均健康生长并伴有体重增加，实验最后2周对大鼠进行解剖化验，结果证明，该剂量的诺尼果汁并未对大鼠产生任何致病影响，说明诺尼果汁的LD50远高于15000mg/kg

7、(Product Safety Labs 2000)。当急性口服LD50剂量高于5000mg/kg或急性腹腔内膜LD50含量高于2000mg/kg时，这种化合物认为是无毒的。诺尼果粗提物的LD50都大于无毒状态的最低标准。利用诺尼果汁提取液进行为期28天，剂量为1000mg/kg 的口服毒理学实验(Mancebo and others 2002)，临床观察未发现任何异常。同时，对实验组与对照组的小鼠，在体重增重、采食量、血液和生化指标上进行检测，结果表明，两者未发现任何显著差异，在组织病理学方面也未产生任何影响。对Wistar大鼠进行为期30天的诺尼果汁口服给药实验中，诺尼果有明显的抗焦虑作用

8、。但对其采食量、体重增重，以及临床生化指标包括：转氨酶（SGPT）、谷草转氨酶（SGOT）、血液尿素氮、碱性磷酸酶、肌酸酐Na+、K+和Cl-等含量均无明显影响。利用市场上较为普遍的大溪地（TahitianNoni）诺尼果汁产品(TNJ；Provo，Utah，U.S.A.)对Sprague-Dawley大鼠进行一系列的口服毒性试验(Wang and others 2002；West and others 2006)，共进行13周的慢性和急性毒理学试验，结果表明在每天按80ml/kg体重剂量投放，大鼠没有明显的中毒反应。其中，慢性毒理试验指标包括：组织学、临床化学、血液学、体重增重和临床观察等常

9、规检验参数。组织学试验指标包括：肾上腺、主动脉弓、大脑、盲肠、十二指肠、结睾、眼球及视神经、大腿骨、骨髓、心脏、回肠、空肠、心脏、肾脏、泪腺、肝脏、肺、乳腺、下颚、食管、卵巢、胰腺、垂体、前列腺、直肠、下颚唾液腺、坐骨神经、精囊、额骨肌（股四头肌）、脊骨、脾脏、胸骨、胃、气管、膀胱、胸腺、子宫和甲状腺（副甲状腺）等。急性临床化学试验指标包括：丙氨酸转氨酶（ALAT）、天冬氨酸转氨酶（ASAT）、碱性磷酸酶、胆红素总量、谷氨酰转肽酶（GGT）、葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、尿素、肌酐、总蛋白、蛋白电泳（ALB，1和2，和）、白蛋白/球蛋白比率、钠、钾、钙，镁、无机磷、和氯化物。血液学试验指标包括：血

10、红蛋白，红细胞细胞数量，血细胞比例，红细胞平均体积，红细胞平均值，血红蛋白细胞平均值，血红蛋白浓度，白细胞总数，差分白细胞总数，血小板总数，凝血酶原时间，纤维蛋白原。提高实验剂量并未引发55个器官中的任何一个产生病变，也没有对血细胞、凝血因子，酶，电解质产生显著的影响。本实验未观察到有损害作用的剂量（NOAEL），随后被确定为大于80ml/kg体重。2.2 过敏性实验对新食物整个过敏性的评价实验是困难的。目前对于类似食品这样需要消化且由化合物组成的样品，也还没有建立起检测I型（急性）和IV（延迟性）过敏症的标准方法，似乎也还未建立起检测II型（细胞毒素）和III型（免疫化合物）过敏症的通用标准

11、方法。另外，消化产生的影响并未考虑在本模型内。目前的标准检测方法涉及到敏化作用，通过皮肤和吸入途径给药，或者通过静脉注射的方法。仅在最近才开始使用棕色挪威大鼠作为食物过敏实验的新受试者(Pilegaard and Madsen 2004)。本实验采用大溪地诺尼果汁（TNJ）对豚鼠开展两个独立的致敏性实验。第一项研究包括2个实验组，每组6只豚鼠。其中，一组阳性对照，另一组为阴性对照(Kaaber 2000)。第一项实验使用弗氏完全佐剂对每只动物进行4次皮下注射进行诱导，2周为一个疗程，然后休息1周。阴性对照组的动物接受了口服果汁的处理，阳性对照组被进行静脉注射实验。处理24小时以后对豚鼠进行检测

12、，两组都没有对TNJ产生明显的过敏反应。第二项实验将45只豚鼠分成6组，进行3种处理（分别为NCJ，海巴戟天果泥和浓缩海巴戟天果汁处理），另有一组空白对照(Product Safety Labs 2000)。3个处理组均进行了为期2周、每周3次的腹腔内膜诱导处理，休息32天后进行口服给药处理，均被发现明显的病变反应。在处理后没有任何一组动物对于过敏性实验具有良好的反应。上述实验结果表明，口服过敏原可以引发免疫学反应(sensitization)。如在FAO/WHO的出版物中规定“豚鼠被大量使用于食品蛋白口服敏化作用的研究中，且其对实验处理的反应相当敏感” (FAO/WHO2001)。豚鼠在摄取

13、牛乳后，表现出显著的免疫反应(Devey and others 1976; Piacentini and others 1994)。这些致敏性研究的实验足可以检测到诺尼果汁中潜在的过敏原。欧盟食品科学委员会对口服毒理性实验和过敏实验均进行了评估。欧盟的官员主张欧盟批准了海巴戟天果汁可作为安全食品成分(European Commission 2002,2003)。2.3 基因毒性实验对蒽醌类成分的分析涉及到诺尼果汁潜在的基因毒性研究。蒽醌类化合物发现于茜草类植物，如M. Citrifolia。尽管这类化合物仅发现与植物的根中(Thompson 1987)。另外，对诺尼果实中的蒽醌类化合物进行分析

14、，发现其常伴有光泽烃（lucidin）和甲基异茜草素(rubiadin）这两种含有明显基因毒性的蒽醌类物质。如果汁中这两种化合物的成分低于10ppm，则很难被检测出来(European Commission 2002)。通常采用细菌回复突变实验如鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium)或Ames实验作为整体实验方案开展物质的基因毒性实验(FDA1997)。但在有效评估食源性植物特别是水果时，这类实验方法具有严格的限制条件。黄酮类物质普遍存在于水果中，而且人可安全食用这类水果已经有较长时间的历史，但是这种化合物表现出对鼠伤寒沙门氏菌的致畸突变活性(MacGregor and Jurd 19

15、78)。尽管在伤寒沙门氏菌中存在致畸活性，但在哺乳类动物中，黄酮类物质具有抗诱变的作用(Ong and Khoo 1997; Okamoto 2005)。这种差异的影响使Ames突变实验很少用于水果的有效性评价，而且必须同时使用一个哺乳动物的细胞系基础检验作为对照。为突破Ames突变实验的限制，利用诺尼果汁在中国人的V79-cell细胞中进行体外试管基因突变实验。次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HPRT)基因位点存在或缺乏于S9 mix。浓缩100倍的果汁中乙酸乙酯提取物剂量为0.003 to 3 L/mL，并未引起HPRT位点的基因突变，表面诺尼果汁中缺乏诱变活性物质(Westendorf 2002

16、a)。在体内外开展非常规的DNA合成实验(UDS)，检测诺尼果汁对DNA及其加合物的潜在损害。将用氚标记的胸腺嘧啶作为示踪物，采用射线自显迹法和银颗粒计数示踪法，检测细胞核中DNA损伤的修复能力。采用TNJ果汁对4组（每组3只）动物进行处理，2组为阳性对照，1组为阴性对照。经TNJ处理的细胞中银颗粒数与阴性(盐水处理)对照组相当，基本上均少于阳性（N-二甲基亚硝胺和2-acetylaminoflourene）对照组。因此，本实验证实诺尼果汁没有有明显的基因毒性(Westendorf 2002b)。 首先在小鼠的微核细胞中来评价服用诺尼果汁对染色体断裂的影响。将剂量为10g/kg体重的脱水诺尼以

17、口服给药的方式开展实验。用显微镜观察动物的骨髓，并记录微核中多染红细胞的出现频率。实验结果证明摄取诺尼对微核数增加及染色体断裂无明显影响，对于系统毒性也没有相关的结论。根据OECD标准在人淋巴细胞中开展染色体畸变实验(Edwards 2003)。对于不同的诺尼果干重浓度625, 1250, 2500和 5000 g/mL，不管是否存在S-9 mix，其细胞分裂中期基因突变频率均未发现有显著提高。这一结果同时也验证了上述的小鼠微核实验的结论。通常的补充实验需对样品无遗传毒性进行验证，包括体外的遗传突变实验，体外DNA损伤实验和体外基因损伤实验(FDA 1997)。诺尼果汁已经开展了上述实验，每项

18、实验结果均表明其是无毒的。显然也存在人类遗传毒性的低风险。2.4 临床安全性研究在已开展的诺尼临床研究中，关于其安全性的研究有2个，其中一例是对健康受试者进行的“单中心，双盲，3个剂量处理，平行组，安慰剂控制”诺尼果汁安全性试验(Davies andMugglestone 2003)。在96个试验受试者中，28个为男性，68个为女性，年龄范围从18到64岁。将其随机分成4组，其中1组做安慰剂处理，另外3组为试验组。实验受试者每人每天服用剂量为750ml的安慰剂或TNJ，28天后，四组分别每天同时服用750ml的安慰剂及三个不同剂量的TNJ。自服药后两周开始计算，在第0、2、4和6周对受试者进行

19、血液，生化和泌尿系统的检测。其中血液检测包括：血红蛋白，红细胞提及，细胞平均体积，红细胞数量，凝血酶原时间，活化部分凝血活酶时间，白细胞总数和差别白细胞数量（嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞，淋巴细胞，单核细胞，骨髓肝细胞）和血小板计数。生化分析包括碱性磷酸酶，谷丙转氨酶，谷草转氨酶，总胆红素，血脂（低密度脂蛋白，高密度脂蛋白，胆固醇，甘油三酯），肌酸激酶，肌酐，-谷氨酰转移酶，葡萄糖，总蛋白和尿酸半定量分析，白细胞，亚硝酸盐，尿胆原，蛋白质，pH值，血液，酮类，胆红素和葡萄糖。在必要时，尿液的细菌学实验被用来测定晶体，管型，上皮细胞，白血细胞，红血细胞和细菌。测量生命体征包括收缩压和舒张压，心率。

20、在6周的时候还对每个受试者测量了（12导）心电图。任何不良反应都记录了。第四周（结束前）和第六周（接下来的）进行了重量，生命体征，尿液分析和选定的病理结果如表1和2所示。和其它可能的后遗症相比，这个实验中的这2个时间点的值（毒性作用最好的指标）已经恢复了。本研究的任何两组间的参数和测量数据间均无明显差异。这些数据表明，每天饮用750毫升大溪地诺尼果汁是安全的。表1 服用诺尼4-6周后，体重和生命特征的临床研究测量项目周安慰剂30mlTNJ300mlTNJ750ml TNJ体重(kg)470.2367.7869.2070.61670.2267.6769.1169.57心率(bpm)464.716

21、6.7566.7963.87667.8864.5865.8863.67收缩压(mmHg)4118.00118.54122.04119.836119.21121.50119.13117.04舒张压(mmHg)469.3369.9270.7971.09668.9668.8370.7572.63表2服用诺尼4-6周后的临床病理学指标测量项目周安慰剂30mlTNJ300mlTNJ750ml TNJ血细胞比容(%)440.44 40.1140.5140.45640.05 39.8340.2540.25血红素(g/dl)413.4313.4013.5313.38613.35 13.3213.4013.32

22、平均细胞体积(l)491.9990.5090.8289.73691.76 90.5590.9490.04血小板(103/l)4259.13 242.88243.38239.916251.08 232.04251.04236.92红细胞计数(103/l)44.404.454.464.5264.37 4.424.434.48白细胞计数(103/l)45.66 5.565.635.2165.53 5.565.374.94嗜碱性粒细胞(103/l)40.0350.0270.0260.02660.030 0.0300.0260.026嗜酸性粒细胞(103/l)4 0.19 0.170.200.1460.

23、16 0.170.230.15淋巴细胞(103/l)41.79 1.691.731.7361.71 1.641.661.71单核细胞(103/l)40.49 0.490.510.4660.50 0.510.510.45嗜中性粒细胞(103/l)43.15 3.193.162.8563.14 3.202.952.61胆固醇(mmol/L)45.04 4.994.684.9764.91 4.904.614.99肌酸激酶(U/L)4102.06 109.84105.28102.70697.25 121.97100.4193.90肌酐(mol/L)473.43 73.4775.5274.12670.9

24、1 74.8674.3973.51葡萄糖 (mmol/L)44.754.584.604.6264.76 4.644.714.68高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)41.70 1.701.591.6861.73 1.731.621.76低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)43.02 2.942.752.9962.97 2.952.753.04甘油三酯(mmol/L)40.81 1.031.000.8961.08 0.961.060.89尿酸(mol/L)4265.90 284.91265.89298.116286.98 298.26271.89300.67活化部分凝血活酶时间(s)430.35 3

25、0.5030.3930.22630.40 30.8131.2430.58凝血酶原时间(s)411.54 11.5811.6511.61611.83 11.7611.8111.75第二项临床研究是美国国立卫生研究院资助的在夏威夷大学进行的诺尼果提取物的一期临床试验。主要目标是确定毒性和最大耐受剂量。29个病人被分为5组，每组至少5个。每位受试者每天口服含有500毫克的成熟诺尼果提取物的胶囊，连续服用28天。初始剂量组摄入4个胶囊（2000毫克）。当没有发现任何不良反应时，下一次的剂量将增加2000mg，以此类推，一直到最后剂量为每天10g。摄入诺尼果胶囊有较好的耐受性，无任何任何不良反应(Iss

26、ell and others 2005)。I期临床研究表明诺尼果汁的最大剂量约200毫升（约1茶杯）。如大溪地诺尼果汁的研究结果，表明高剂量和消费者典型的摄入量之间有足够的安全边界。最常见的建议份量是1-2盎司。诺尼果汁尤其是其乙醇沉淀物可作为潜在的免疫调节剂，对小鼠Lewis肺癌（LLC）有作用(Hirazumi and Furusawa 1999)。也有其它一些安全的食品和组分也有免疫调节作用，如酸奶(Vinderola and others 2005)、日本的裙带菜(Furusawa and Furusawa 1989)、-葡聚糖（燕麦和一些食用菌的主要成分）(Kobayashi and

27、 others 2005)和巧克力(Sanbongi and others 1997)。和报道的其它食物一样，诺尼果汁对LLC的作用不是由于其细胞毒性而是其抗氧化成分(Sazuka and others 1995; Chen and others 2005)。据报道，其它果汁也有类似的活性，如蔓越橘和苹果(Sun and others 2002)。这些例子表明，潜在的免疫调节和抗肿瘤作用并不一定等同于潜在的健康风险。白细胞计数的差异造成了诺尼果汁免疫调节作用潜在的不良反应。如果不加选择地刺激细胞因子的产生，可能会造成白细胞数量的变化，特别是嗜酸性粒细胞（嗜酸性粒细胞增多），因为除抗炎症的白介素

28、-10之外，诺尼的提取物诱导产生的细胞因子都是促炎症的(Lucey and others 1996; Cundell and others 2003; Leng and others 2005)。然而，在临床安全性和亚慢性毒性的动物实验研究中没有这种增殖现象，对照组和任何剂量组之间无明显差异。此外，任何其他研究都没有表明炎症条件。因此，潜在的免疫调节作用受到反馈机制的调节，这似乎是显而易见的。案例报告少数病例报告讨论了潜在的不良事件之间可能和诺尼果汁有关。报告的影响是不同的，在任何案例中都没有显示诺尼有直接的毒性作用。两种案例中涉及的营养成分是有特殊饮食限制的。然而，这种限制成分适用于许多食品

29、，不能认为是有毒的。第一案例报道的是高钾血症病人食用了从健康食品店购买的诺尼果汁(Mueller and others 2000)。作者通过互联网购买了一瓶诺尼果汁，然后送到一个外部实验室对钠和钾进行了分析。没有证据表明病人喝的果汁是来自同一制造商或包含相同的成分。诺尼果汁品牌的标签上显示葡萄汁，自然花和本杰明花作为添加成分。实验室测试钾的平均含量是56.32.5mg/ L。这是橙汁，西红柿和葡萄柚果汁正常的范围内。作者指出其他果汁也有类似的钾的含量，应限制添加到肾脏疾病晚期患者的饮食中。象其它果汁、草药和有机酸盐一样，诺尼果汁可能包含大量的其它成分。 因此，矿物含量可能相差很大。因此，在描述

30、病人的适用性时，必须让专业卫生保健机构确定具体品牌的诺尼果汁的矿物质含量。一个41岁的女人获得了华法林耐药性的报道(Carr and others 2004)。稳步增加华法林的用量没有影响国际正常化比率（INR）的下降。后来发现，病人当时已喝了特定品牌的诺尼果汁，这似乎是强化了维生素K。病人停止了喝果汁，INR升高了。大溪地诺尼果的维生素K含量是可以忽略不计的(Palu and others 2005)。因此华法林耐药事件与诺尼果汁本身无关，但只是一个可能的因素。由于市场上每一个的果汁成分的差异，华法林耐药是无法提前预料到的。在奥地利和德国南部毗邻地区据说有四例肝毒性与饮用诺尼果汁有关的报道(Millonig and others 2005; Stadlbauer and oth-ers 2005; Y uce and others 2006)。第一个案例是一个 45岁的男子的谷丙转氨酶升高（ ALAT ），天门冬氨酸氨基转移酶（ASAT） ，-谷氨酰转移酶（ GGT）和乳酸脱氢酶（LDH）都升高了。他曾几个星期前每天喝1杯诺尼果汁。经活检证实肝损伤。停止服用诺尼果汁后，这名男子的转氨酶水平在1个月内恢复了正常。蒽醌被认为可能是功能障碍的原因。同时另外有两个病例报告，一个29岁的男人和一个62岁的女人曾