生物化学实验报告参考模板.docx

1、生物化学实验报告参考模板实验一 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的含量（p24）一、目的要求 掌握考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质含量原理和方法。 二、实验原理 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色。在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰（lmax）的位置，由465nm变为595nm。

2、且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。 考马斯亮蓝染色法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。 （2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分

3、钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。 （3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。 此法的缺点是： （1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。 （2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）等。 三、材料、试剂与器具 （一）、试剂：1、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G2

4、50 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。2、标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。（二）标准和待测蛋白质溶液 1标准蛋白质溶液 纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。2待测蛋白质溶液。 人血清，使用前用0.15mol/L NaCl

5、稀释200倍。 （二）、器材：1、试管1.515cm（6）和试管架。2、移液管管0.5mL（2）；1mL（2）；5mL（1）；3、可见光分光光度计。 （三）、标准曲线制作：试管编号012345未知200ug/ml标准蛋白（ml）0.00.20.40.60.81.00.15mol/L NaCl （ml）21.81.61.41.21.0考马斯亮蓝试剂 （ml）666666摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色蛋白质浓度（ug/ml）0510152025A595nm2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（ ），在坐标轴上绘制标准曲线。1）利用标准曲线查出回归方程。2）用公式计算

6、回归方程。一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。（四）、蛋白质含量的测定：样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。一般被测样品的A595nm值在0.10. 5之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。（五）、注意事项：1、玻璃仪器要洗涤干净。2、取量要准确。3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。4、对照：用被测物质以外的物质作空白对照。5、在试剂加入后的520min内测定光吸收，因为在

7、这段时间内颜色是最稳定的。 6、测定中，蛋白染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。 实验二、紫外吸收法测定核酸的含量一、 目的1、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。2、学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。二、 原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（CC一CC一），能够强烈吸收250280nm波长的紫外光。核酸（DNA，RNA）的最大紫外吸收值在260nm处。遵照Lambert-Beer定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。在不同pH溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现

8、出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以（）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）。核酸的摩尔消光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH和离子强度发生变化。它们的经典数值（pH = 7.0）如下：DNA的（）= 6 000 8 000RNA的（）= 7 000 10 000 小牛胸腺DNA钠盐溶液（pH = 7.0）的（）= 6 600，DNA的含磷量为9.2%，含1g/mL DNA钠盐的溶液光密度为0.020。RNA溶液（pH = 7.

9、0）的（）= 7 7007 800，RNA的含磷量为9.5%，含1g /mL RNA溶液的光密度为0.0220.024。采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm波长下，浓度为1g/mL的 DNA溶液其光密度为0.020，而浓度为1g/mL的RNA溶液其光密度为0.024。因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。该法简单、快速、灵敏度高，如核酸3gmL的含量即可测出。对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品，测定误差较小，若样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质，测定误差较大，应设法事先除去。由于降解或水解作用，核酸的

10、光密度可以增高约40，这就是众所周知的增色效应（hyperchromic effect）。在大分子的核酸中，氢键和-键相互作用改变了碱基的共振行为。因此，核酸的光密度低于构成它的核苷酸的光密度，该现象称为减色效应（hypochromic effect）。蛋白质和核苷酸也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值仅为核酸的110或更低，因此对于含有微量蛋白质的核酸样品，测定误差较小。RNA的260nm与280nm吸收的比值.在2.0以上；DNA的260nm与280nm吸收的比值则在1.9左右，当样品中蛋白质含量较高时，比值下降。若样品内混杂有大量的蛋白质和核苷酸

11、等吸收紫外光的物质，应设法事先除去。三、实验材料、主要仪器和试剂（一）试剂1标准核酸溶液（酵母RNA或小牛胸腺DNA，用0.01NaOH溶液配制成500g/ml溶液）2待测核酸样品（二）器具1、紫外分光光度计2、微量注射器（50L）3、移液管3试剂（1）5%6%氨水：用25%30氨水稀释5倍。（2）钼酸铵-过氯酸试剂：取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水中。四、操作步骤（一）核酸紫外吸收光谱的测定取100L的RNA溶液于试管中，加入5 mL蒸馏水，摇匀，测定核酸溶液在220290nm波长范围的消光值，再用蒸馏水作空白调零。以该溶液在各波段的光吸收值（即A值）为纵坐标

12、，波长为横坐标，绘制核酸的吸收光谱。（二）核酸溶液含量的测定将上述测吸收光谱溶液的A260直接计算溶液的RNA含量A260 五、注意事项 如果待测的核酸样品中含有酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，则在测定时需加钼酸铵过氯酸沉淀剂，沉淀除去大分子核酸，测定上清液A值作为对照。六、思考题1采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，有何优点及缺点？2若样品中含有核苷酸类杂质，应如何校正？参考答案1用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，具有简单、快速、灵敏度高的优点，并且待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质，产生较小测定误差。但该法在测定样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质时，则会产生较大测

13、定误差，需要设法事先除去。2当样品中含有核苷酸类杂质时，需要加钼酸铵-过氯酸沉淀剂处理，沉淀除去大分子核酸，测定上清液260 nm处光密度，以此作为对照；再从未加沉淀剂测得的样品液260nm光密度中扣除。实验三 植物体内过氧化氢酶活性的测定一、目的过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。二、原理过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。以钼酸铵作催化剂，使H2O2与K

14、I反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：H2O2 + 2KI + H2SO4 I2 + K2SO4 + 2H2OI2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。三、 材料、仪器设备及试剂1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。3. 试剂及配制1.8molL1H2SO410(NH4.)6MO7O40.02 molL1 Na2S2O320KI1淀粉液CaCO3粉石英

15、砂0.018H2O2溶液配制：吸取30H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再稀释10倍。四、实验步骤1. 过氧化氢酶的提取选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入34ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。然后再取滤液10ml至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。2. 酶活性测定2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8molL1H2SO4 5ml以

16、终止酶活性，作为空白测定。2.2将各瓶放在20水浴中保温510min（若室温超过20则以室温为准）。保温后向各瓶准确加入 0.018H2O2 5ml, 摇匀并记录酶促反应开始时间。2.3将各瓶放在20水浴中让酶与底物（H2O2）作用5min。时间到后迅速取出，立即在1、2号瓶中加入1.8molL1H2SO4 5ml以终止酶活性。2.4向4个瓶中各加入20KI 1ml和3滴10(NH4.)6MO7O4，摇匀，用0.02 molL1 Na2S2O3滴定至淡黄色后再加入5滴1淀粉液作指示剂，再用0.02 molL1 Na2S2O3滴定至蓝色刚消失为滴定终点，记录Na2S2O3用量。五、酶活性计算空白

17、与样品两个重复滴定值取平均值按下公式计算出过氧化氢酶活性：被分解H2O2（mg）= 空白滴定值（ml）样品滴定值（ml） C 17.17 被分解H2O2（mg） 酶液稀释倍数过氧化氢酶活性（mgH2O2g1Fwmin1）= 样品鲜重（g）酶促反应时间（min）公式中：C Na2S2O3量浓度 17.17 H2O2摩尔质量实验四 种子粗脂肪的提取一、实验目的脂肪广泛存在于油料植物种子和果实中，测定脂肪的含量，可以鉴别其品质的优劣，也是油料作物选种和种质资源调查的常规测定项目。二、实验原理在了解了实验目的之后，关于这个实验有以下几个问题需要大家思考：1.种子成分很复杂，脂肪的提取如何进行？2.什么

18、是粗脂肪？（答：脂肪不溶于水，易溶于有机溶剂（如石油醚）。利用这一特性，选用有机溶剂直接浸提出样品中的脂肪进行测定。提取物中除脂肪之外，还有游离脂肪酸、石蜡、磷脂、固醇、色素、有机酸等物质，故浸提物称粗脂肪。）通过以上问题的思考，我们知道了脂肪的提取主要是利用其易溶于有机溶剂的特性。具体的实验操作粗脂肪的提取，一般采用索氏脂肪提取器。 利用脂类物质溶于有机溶剂的特性。在索氏提取器中用有机溶剂（本实验用石油醚，沸程为 30 60 ）对样品中的脂类物质进行提取。 图 索氏脂肪提取器1. 浸提管 2. 通气管 3. 虹吸管 4. 小烧瓶 5. 冷凝管索氏提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的，

19、提取管两侧分别有虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时，将待测样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管内。提取瓶内加入石油醚，加热提取瓶，石油醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到抽提完全为止。三、材料、仪器与试剂（一）实验材料 大豆、花生、蓖麻、向日葵、芝麻等油料种子。 （二）仪器设备 索氏提取器（ 50 mL ），烧杯，干燥器，脱脂滤纸，镊子，分析天平，烘箱，恒温水浴，脱脂棉。（三）试剂 石油醚（化

20、学纯，沸程 30 60 ）。四、实验操作 1.将洗净、晾干的芝麻种籽放在 80 100 烘箱中烘 4 小时。待冷却后，准确地称取 2 4 g ，置于研钵中研磨细，将研碎的样品及擦净研钵的脱脂棉一并用脱脂滤纸包住用丝线扎好，勿让样品漏出。或用特制的滤纸斗装样品后，斗口用脱脂棉塞好。放入索氏提取器的提取管内，最后再用石油醚洗净研钵后倒入提取管内。 2. 洗净索氏提取瓶，在 105 烘箱内烘干至恒重，记录重量。将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积的 1/2 2/3 。把提取器各部分连接后，接口处不能漏气。用 70 80 恒温水浴加热提取瓶，使抽提进行 16 小时左右，直至抽提管内的石油醚用滤纸检验无油迹为

21、止。此时表示提取完全。 3. 提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，洗涤提取管。再继续蒸馏，当提取管中的石油醚液面接近虹吸管口而未流入提取瓶时，倒出石油醚。若提取瓶中仍有石油醚，继续蒸馏，直至提取瓶中石油醚完全蒸完。取下提取瓶，洗净瓶的外壁，放入 105 烘箱中烘干至恒重，记录重量。 五、注意事项1.本法采用沸点低于 60 的有机溶剂，不能提取出样品中结合状态的脂类，故此法又称为游离脂类定量测定法。 2.待测样品若是液体，应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上在6080烘箱中烘干后放入提取管内。 3.本法使用有机溶剂石油醚（沸程 30 60 ）故加热时不能用明火。 六、思考题 1. 索氏提取法提取的为什

22、么是粗脂肪 ? 2. 做好本实验应注意哪些事项 ?实验五 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术，了解电泳技术的基本原理，测定人血清中各种蛋白质的相对含量。二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术。醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂（如：丙酮，氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动阻力小，厚度为120。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体有以下优点：电泳后区带界限清晰；通电时间较短（二十分钟至一小时）；它对各

23、种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象；对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离效果，由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低，因此必需在密闭的容器中进行电泳，并使用较低有电流避免蒸发。 本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物，分离人血清蛋白。血清蛋白中含有清蛋白、 球蛋白、球蛋白、球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及行状不同（见下表），在电场中的迁移速度不同。分子量小、等电点低的，在相同碱性PH缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。例如人血清蛋白

24、在PH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次是球蛋白（如图1）。醋酸纤维薄膜电泳已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。例如血清蛋白电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液或硼酸缓冲液；氨基酸的分离则可选用pH7.2的磷酸 盐缓冲液等。电泳时先将滤膜剪成一定长度和宽度的纸条。

25、在欲点样的位置用铅笔做上记号，点上样品，在一定的电压，电流下电泳一定时间，取下滤膜，进行染色。不同物质需采用不同的显色方法，如核苷酸等物质可在紫外分析灯下观察定位，但许多物质必须经染色剂显色。醋酸纤维素薄膜电泳染色后区带可剪下，溶于一定的溶剂中进行光密度测定。也可以浸于折射率为1.474的油中或其他透明液中使之透明，然后直接用光密度计测定。它的缺点是厚度小，样品用量很小，不适于制备。将血清样品点样于醋纤膜上，在pH8.6的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染

26、色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、1、2、球蛋白5条区带，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。人血清中5种蛋白质的等电点及分子量蛋白质名称等电点（pI）分子量清蛋白球蛋白球蛋白球蛋白4.885.065.126.857.506900200 000300 00090 000150 000156 000300 000三、材料、仪器与试剂（一）、材料：人血清（二）、仪器醋酸纤维薄膜(8X2mm)；点样器；染色皿，漂洗器，镊子；玻璃板；常压电泳仪；直流电源整流器；水平电泳槽；粗滤纸；直尺和铅笔（三）、药品巴比妥缓冲液(pH8.6 I=0.06)；氨基黑10B染色液；漂洗液；95乙醇45ml、冰醋酸5ml

27、；蒸馏水50ml；洗脱液 0.4molLnaOH；透明液；无水乙醇：冰醋酸7：3四、操作步骤1、仪器与薄膜的准备（1）醋酸纤维薄膜的选择与润湿用镊子取一片薄膜，在距醋纤膜一端1.5cm用铅笔作好标记，然后将薄膜放进缓冲液中，小心放在盛有缓冲液的培养皿中。若漂浮在液面的薄膜在1530秒内迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则此薄膜均匀可以用于电泳；若薄膜润湿缓慢，色泽深浅不一或有条纹或斑点，则表示薄膜不均匀应弃去，以免影响电泳结果。浸泡于缓冲液中约30分钟，当完全浸透后，用镊子轻轻取出，夹在两层滤纸内吸干，方可用于电泳。（2）电泳槽的准备（如下图）将电泳槽置于水平平台上，将缓冲液注入电泳槽中，两边的

28、电极槽缓冲液的高度要在同一平面。根据电泳槽支架的宽度，裁剪尺寸合适的滤纸条。在电泳槽的两个膜支架上,各放2层滤纸条,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电极缓冲液中。当滤纸条全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压膜支架上的滤纸以驱赶气泡,使滤纸的一端紧贴在膜支架上。滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维薄膜的桥梁，故称为滤纸桥。2、点样将点样器先在白瓷反应砖上的血清中沾一下，点样前应在滤纸上反复练习，此步是实验的关键，掌握点样技术后再正式点样是获得清晰区带的电泳图谱的重要环节。薄膜浸泡于缓冲液中约30分钟后，用镊子轻轻取出，夹在两层滤纸内吸干，平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）， 再在膜条一端23厘米处轻轻水

29、平落下并随即提起，使血清完全深透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均匀的直线。3、电泳用镊子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸上，点样面朝下，另一端平贴在阳极端支架上。若膜条与电泳方向不平行,则图谱不整。膜条与滤纸桥之间压严,使膜条绷直,中间不下垂。如有很多膜条同时电泳时,膜条间应相距13mm ,使之不互相接触,以免相互干扰。盖严电泳室,平衡10分钟后方可通电,否则分离不好。正确连接电泳槽与电泳仪对应的正负极，开启电源通电。电压160V，电流强度0.40.7mA/cm膜总宽。电泳时间约为25分钟。4、染色 电泳完毕后断电，用镊子取出薄膜条投入染液510分钟，染色过程中不时轻轻晃动染色皿，使染色

30、充分。5、漂洗 从染液中取出薄膜条并尽量沥去染液，投入盛有漂洗液的培养皿中反复漂洗，直至背景漂净为止。此时清晰可见5条色带，待干。6、透明将脱色后干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡23分钟后取出平铺在玻璃板上,用一直径0.5cm 的玻璃棒将其间的气泡赶出,两者之间不能有气泡。干燥后此透明薄膜,区带着色清晰,可用于光吸收扫描,长期保存不褪色。7、定量（1）洗脱比色法将各蛋白质区带仔细剪下，分置各试管中，另从空白背景剪块平均大小的膜条置于空白管中。各管加入04mollNaOH4ml,于37水浴20分钟(不时振荡)，待颜色脱净即用波长620nm比色，以空白管调零，读各管吸光度。计算： 吸光度总和(T)=+(吸光度)血清蛋白组分的相对百分数： 正常值清蛋白% = /T100% 54731 球蛋白 = /T100% 2.785.1% 2 球蛋白= /T100% 6.310.6%球蛋白% = %/T100% 5.2%11%球蛋白% = %/T100% 12.5%20%（2）光吸收扫描法将染色干