化学发光免疫技术检测肿瘤标志物的影响因素和联合应用赵春生.docx

1、化学发光免疫技术检测肿瘤标志物的影响因素和联合应用赵春生中外医学研究 2011年 3月 第 9卷 第 7期 CHINESE AND FOREIGN MEDICAL RESEARCH影像与检验化 学发 光 免疫 技 术 检 测 肿瘤 标志物 的影响 因 素 和 联 合应用赵 春生 裴 春 红哈 密 地 区 第 二 人 民 医 院 (新 疆 哈 密 839001【 摘 要 】 肿瘤 是 严 重 威 胁 人类 健康的 重 大 疾 病 , 病 死 率 高 , 因 此 人 们 害 怕 肿瘤 。 肿瘤 标 志 物 的 出 现 使 人 们 对 肿瘤 的 早期 发现 、 早期诊断 寄 予 了极 大 的 希 望

2、 , 所 以肿瘤 标 志 物 检 测 结 果 的 稳 定性和 准确 性 与 患者的 利 益 密切相关 , 肿瘤 标 志 物 的 错 误 结 果 (特 别 是 假 阳 性 结 果 会 引 起 人 们 的 过 度 恐慌 和 不 安 。 影响 肿瘤 标 志 物 检 测的 因 素 包括 分 析 前 、 分 析 中 和分 析 后 , 控制 好 这些 因 素 , 联 合 应用 肿瘤 标 志 物 的 检 测 , 得 到 最 为 准确 的 结 果 , 减少 误 差 。【 关键词 】 化 学 发光 ;肿瘤 标 志 物 ;影响 因 素 ;联 合 应用肿瘤标 志 物 是 指 在 肿瘤 的 发生和 增 殖 过 程 中

3、 , 由 肿瘤 细胞 本 身 所 产 生 的 或 者 是 由 机 体 对 肿瘤 细胞 反应 而 产 生 的 , 反 映 肿 瘤 存 在 和生 长 的 一 类 物 质 , 包括 蛋 白 质 、 激 素 、 酶 (同 工 酶 、 多 胺及癌 基 因 产 物 等 。 肿瘤 抗原 可 以 是 肿瘤标 志 物 , 但 肿瘤标 志 物 不 一定是 肿瘤 抗原 。 利 用免疫 发 光技 术 对 肿瘤 患者血 液 或 体 液 中 肿瘤标 志 物 的 检 测 , 对 肿瘤 的 辅助 诊断 、 鉴 别诊断 、 疗效 观 察 、 病 情 监 测 以 及 预后 的 评 价 具 有 一定 的价值 。理 想 的 肿瘤标

4、志 物 应 具 有 以 下 特 性 :(1 灵 敏 度 高 , 使 肿瘤 能 早 期发 现 , 早 期 诊断 ; (2 特 异性 好 , 即 肿瘤 患者 为 阳 性 , 而 非 恶 性 肿瘤 患者 为 阴 性 , 因 此 , 能 对 良 、 恶 性 肿瘤 进 行 鉴 别 ; (3 能 对 肿瘤 进 行 定位 , 即 具 有 器官 特 异性 ; (4 与 病 情 严 重 程 度 、 肿 瘤 大 小 或 分 期有 关 , 即 肿瘤 越 大 或 越 晚 期 , 肿瘤标 志 物浓 度 越 高 ; (5 监 测 肿瘤 治疗效果 , 即 肿瘤标 志 物浓 度 增 高 或 降 低与 治 疗效果 密 切 相关

5、 ; (6 监 测 肿瘤 的 复 发 , 即 肿瘤 治疗 后肿瘤标 志 物 浓 度 降 低 , 肿瘤 复 发 时 明 显 升 高 ; (7 预 测 肿瘤 的 预后 , 即 肿 瘤标 志 物浓 度 越 高 , 预后 越 差 , 反 之 亦 然 。 但至 今 还 没 有 一 种 肿 瘤标 志 物 能 完 全 满 足 上 述 要 求 。影响 血 液 和体 液 中 肿瘤标 志 物浓 度 的 因 素 :(1 肿瘤 的 大 小和 肿瘤 细胞 的 数 目 ; (2 肿瘤 细胞合 成 和 分 泌 肿瘤标 志 物 的 速 度 ; (3 肿瘤 组织 的血 液 供 应 好 坏 ; (4 肿瘤 细胞 是否 有 坏 死

6、 和 坏 死 的 程 度 ; (5 肿瘤 细胞 的分 化 程 度 和 肿瘤 的分 期 ; (6 肿 瘤 细胞 是否 表达 和 合 成 肿瘤标 志 物 ; (7 肿瘤标 志 物 在 体 内的 降解 和 排 泄 速 度 。 1肿瘤 标志物 检 测 的 影响 因 素 和 质量控制 1. 1分 析前 1. 1. 1标 本的 采 集血 液 标 本的 正 确 采 集 和 保 存 是 肿瘤标 志物 测定 结 果 准确 的 重 要保 证 。 如 进 行 前列 腺 按摩 、 前列 腺穿刺 、 射 精 、 导 尿 和 直 肠 镜 检查后 , 血 液 PSA 和 PAP 值 可 升 高 ; 肝 、 肾 功能异 常

7、和 胆 道 排 泄 不 畅 、 胆 汁 淤 滞 等 均 可 造 成 肿瘤标 志 物 如 CEA 、 ALP 、 GGT 、 细胞 因 子 等 浓 度 增 高 ; 某 些 药 物 会 影响 肿瘤标 志 物 的 浓 度 , 如抗 雄激 素 治疗前列 腺 癌 时 可 抑 制 PSA 产 生 , 导 致 PSA 假 阴 性 结 果 ; 唾 液 和 汗 液 污 染 标 本 可使 SCC 升 高 。 由 于 红 细胞 和 血 小 板 中 也 存 在 神经 元特 异性 烯 醇 化 酶 (NSE , 因 此 , 样 本 溶 血 可使 血 液 中 NSE 浓 度 增 高 。 试 管 内的 促 凝 剂 , 对 某

8、 些 项 目 的 测定 有 干 扰 。 1. 1. 2标 本的 保 存血 液 标 本 采 集 后 应及 时 离 心 , 保 存 于 4冰 箱 中 , 24h 内 测定 ; 如在 短 期 内 测定 , 则 应 20 保 存 , 长 期 保 存 应 置 70 冰 箱 , 标 本应 防 止 反 复 冻 融 。 酶 类 和 激 素 类 肿 瘤标 志 物 不 稳定 , 易 降解 , 应及 时 测定 或 低 温 保 存 。 1. 2分 析 中1. 2. 1测定 方法 和 试剂 对 检 测 结 果 的 影响从 方法 学 来 看 , 肿瘤标 志 物 测定 方法 很 多 , 有 放 射 免疫 测定 法 , 酶

9、联 免疫 测定 法 , 化学发 光 免疫 测定 法 等 , 每 种 测定 方法 有 自 己 的 精 密 度 和 重 复 性 ,但 手 工 操 作的 方法 重 复性较 差 , 误 差 比较 大 , 操 作者的 个 体 变 化 对 结 果 的 影响 也 较 大 , 操 作 时要 特别 认 真 ; 用 自 动 化 仪 器 进 行 测定 , 重 复性 好 , 误 差 小 。 不 同 的 试剂盒 测定 也 有 差 异 , 其原 因 可 能 是 由 于 使 用的 单 克 隆 抗 体 针 对抗原的 位 点不 同 所 致 。 有 时 即 使使 用 同 一 抗 体 , 也 可 能 因 抗原 异 质 性 (如原

10、发 肿瘤 转 移 后 ,失 去 了 原 有 的抗原 性 而 停 止 分 泌 原 有 的 肿瘤 抗原 或 基 质的 影响 而 得 到 不 同 的 结 果 。 有研究报 道 , 使 用 12种 不 同 的 CEA 试剂盒 检 测 某 一 混 合 血 清 中 CEA 的 浓 度 , 结 果 其 差 异 超 过 100%。 导 致 分 析 间 误 差 的 主 要 原 因 是 无 测定 的 标 准 化 , 包括 缺 乏 统 一 的抗原 、 抗原 成 分 、 校 正品 和 参考 方法 等 。 因 此 , 在 工 作 中 要 尽 量 使 用 同 一 种 方法 , 同 一 种 仪 器 和 同 一 厂 家 的

11、试剂盒 进 行 测定 。1. 2. 2“ 钩 状 效 应 ” 对 检 测 结 果 的 影响肿瘤标 志 物 的 范 围 常涵盖 几 个数 量 级 , “ 钩 状 效 应 ” 可 将 高 浓 度 结 果 错 误 报 告 为 低 浓 度 。 酶 联 免疫 测定 或 免疫 放 射 测定 时 , 若 待 测 样 本 中 抗原 浓 度 过 高 , 会 出 现 高 浓 度 后 滞 现 象 , 即 “ 钩 状 效 应 ” (hook effect , 此 时 免疫反应 被 明 显抑 制 , 出 现 错 误 的 低 值 , 要 消 除 这 种 干 扰 , 只 有 对 样 本 进 行 适 当 稀 释 后 重 新

12、测定 。 1. 2. 3交 叉 污 染 对 检 测 结 果 的 影响当 测定 很 高 浓 度 的 标 本时 , 交 叉 污 染成为 一 个 导 致假 阳 性 的 潜 在问题 , 所 以 应不 时 地 复 查 有 无 标 本 被 交 叉 污 染 。 1. 2. 4嗜 异性 抗 体 对 检 测 结 果 的 影响大 多 数 肿瘤标 志 物 的测定 中 常 使 用 一 对 鼠 单 克 隆 抗 体 来与 肿瘤 抗原反应 , 如 果 患者 血清 中 存 在 嗜 异性 抗 体 (特别 是 人 抗 鼠 抗 体 , 它 可 能 在 两 种 鼠 单 克 隆 抗 体 间 起 “ 桥梁 ” 作用 , 导 致 在 无

13、抗原的 情况 下 , 出 现 肿 瘤标 志 物浓 度 增 高 的 假 象 。 避 免的 办 法 是 在 样 本 中 先 加 入 提 纯 的 鼠 IgG , 经 温 育后 , 再 用 PEG 沉 淀 鼠 IgG 和人 抗 鼠 IgG 复合 物 , 然 后 再 进 行 测定 。 嗜 异性 抗 体 可 出 现 在 曾 被鼠 或 宠 物 咬 过 的 人 , 以 及 使 用 过 动 物 免疫 剂 (如 单 克 隆 抗 体 治疗 过 的 人 。73 DOI:10.14033/ki.cfmr.2011.07.098 影像与检验中外医学研究 2011年 3月 第 9卷 第 7期 CHINESE AND FOR

14、EIGN MEDICALRESEARCH1. 2. 5肿瘤标 志 物检 测 的质量 控制 1. 2. 5. 1检 测 结 果 的 重 复性 要 求 常规 肿瘤标 志 物 测定 的变 异 系数 , 批 内 CV 5%, 批 间 CV 10%(期 望 值 。 1. 2. 5. 2室 内质 控 标 本的 要 求 室 内质 控 应 包括 阴 性 和 阳 性低 值 和 高 值质 控 血清 , 要 能 涵盖 肿瘤标 志 物 测定 的 范 围 。1. 2. 5. 3室 内质 控 品 要 求 以 血清 为 基 质 。1. 2. 5. 4室 内质 控 图肿瘤标 志 物 很 少 有 参考 方法 , 要 坚 持 作

15、室 内质 控 图 , 以均 值 为 靶 值 , 来 判 断 试 验 的 稳定 性 和 重 复性 。1. 3分 析 后 1. 3. 1参考 值 范 围不 同 标 本如血 液 、 尿 液 、 胸 、 腹 水 等 , 必须有 不 同 的 参考 值 。 不 同 地区 、 不 同 人 群 、 不 同 方法 、 不 同 试剂 和 设备 应 建 立自 己 的 参考 值 范 围 。 1. 3. 2患者 基 础 测定 值的变 化 , 对 于 结 果 的分 析 极 有 价值 。 故应 监 测 患者 治疗前 、 治疗 中和 治疗 后 各 个 阶段肿瘤标 志 物 含 量 的变 化 , 最 好 画 一 张 肿瘤标 志

16、物 含 量的变 化 的 曲 线 图 , 以 便 综 合 分 析 。 1. 3. 3上 升 或 下 降 25%的临床意义一 般 患者的 结 果 在 排 除检 测 方法 引 起 的 误 差 后 , 上 升 或 下 降 25%都 有 临床价值 。 对 于 测定 结 果 升 高 的 标 本 必须 复 查 , 以 防 测定 误 差 。 1. 3. 4加 强与 临床的 交 流 和 沟 通由 于 肿瘤标 志 物 测定 其临床意义的特 殊 性 , 必须加 强与 临床的 交 流 和 沟 通 。 当 改 变 肿瘤 标 志 物检 测 方法 和 试剂 时 ,必须 通 知 临床 , 否 则 会 影响 结 果 的 判 断

17、 。 建 议 医师 开 化 验 单 时提 供 简 短 的患者 信 息 , 如 手 术 后 化 疗 3次 后 等 , 这 对 解 释 结 果 非 常 重 要 , 还 可 帮 助 发 现 实 验 室 的 偶 然 差 错 。 1. 3. 5必须 知 道 肿瘤标 志 物 的 半 痕 期 , 这 有 助 解 释 某 些 肿瘤标志 物 , 如 AFP 和 hCG 的 浓 度 变 化 , 对 于 临床 判 断 疗效 有 重 要意义 。 2肿瘤 标志物 的 联 合应用肿瘤标 志 物检 测 的 目 的 是 要 达 到 肿瘤 的 早 期 诊断 , 早 期 治 疗 , 因 此 , 希望 找 到 一 种 特 异性 强

18、 , 敏 感 性高 的 肿瘤标 志 物 。 敏 感 性 反 映 的 是 检 出 肿瘤 的 能 力 , 敏 感 性 越 高 , 检 出 肿瘤 的 可 能性 越 大 , 若 敏 感 性 为 100%, 则 意 味 着 能 检 出 所 有 的 肿瘤 。 特 异性 反 映 的 是 识 别 肿瘤 的 能 力 , 特 异性 越 高 , 误 诊 为 肿瘤 的 可 能性 越 小 , 若 特 异性 为 100%, 则 意 味 着 所 有 的非 肿瘤 患者 全 是 阴 性 , 只 有 肿瘤 患者 是阳 性 。敏 感 性 和 特 异性 是一 对 矛盾 , 提 高 了 敏 感 性 , 降 低 了 特 异 性 , 也就

19、 是 说 提 高 了 肿瘤 的 检 出 率 , 同 时提 高 了 肿瘤 的 假 阳 性 率 , 导 致 患者不 必 要 的 恐慌 ; 反 之 , 提 高 了 特 异性 , 降 低 了 敏 感 性 , 即 提 高 了 肿瘤 诊断的 准确 性 , 降 低 了 肿瘤 的 检 出 率 , 也就 是 说 漏 诊 , 患者 失 去 了 早 期 治疗 的 机 会 。 笔 者 至 今 尚 未 找 到 一 种 特 异性 强 , 敏 感 性高 , 能 使 肿瘤 早 期发 现 的 肿瘤标 志 物 。另 外 , 一 种 肿瘤 可 分 泌 多 种 肿瘤标 志 物 , 而 不 同 的 肿瘤 或 同 种 肿瘤 的不 同 组

20、织 类 型 可 有 相 同 的 肿瘤标 志 物 , 而 且 在不 同 的 肿瘤 患者 体 内 , 肿瘤标 志 物 的质 和 量变 化 也 较 大 。 因 此 , 单 独 检 测一 种 肿瘤标 志 物 , 可 能会 因 为 测定 方法 的 灵 敏 度 不 够 而 出 现 假 阴 性 , 联合 检 测 多 种 肿瘤标 志 物 有 利 于 提 高 检 出 的 阳 性 率 。 为 此 , 选择 一 些 特 异性较高 , 可 以 互 补 的 肿瘤标 志 物 联合 测定 ,对 提 高 肿瘤 的 检 出 率 是 有 价值的 , 如 胰腺 癌的诊断 可 用 CA 199、 CA 50和 CEA 联合 测定 ;

21、 生 殖 细胞 系 恶 性 肿瘤 用 hCG 和 AFP 一 起 测定来 提 高 检 出 的 灵 敏 度 。 常 用 肿瘤标 志 物 的 联合 应用 ; 如 :原 发 性 肝 癌 检 测 AFP 、AFU 。 干 细胞 癌 检 测 AFP 、 hCG 、 AFT ; 胃 癌 测 CEA 、CA 112; 结肠 癌 测 CEA 、 CA 199、 CA 242; 前列 腺 癌 PSA , PAP ; 非 小 细胞肺 癌 NSE 、CEA ; 绒 毛 膜 上 皮 细胞 癌 测 hCG ; 胰腺 癌 测 hCG 、 CA 199; 卵巢 癌 CA 125、 CA112; 乳 腺 癌 测 CA153、

22、 CEA ; 膀胱 癌 测 TPA ; 宫颈癌 测 SCC 、 CEA ; 胆 道癌 测 hCG 、 CA 199; 耳 鼻 喉 肿瘤 测 SCC 、 CEA 等 。 参考 文 献1陈文 彬 , 潘 祥 林 诊断 学 第 6版 北京 :人 民卫 生 出 版社 ,2006:4574612康 格 非 临 床 生 物 化 学 北 京 :人 民 卫 生 出 版 社 , 1995:85863叶 应 妩 全 国 临床检 验 操 作规 程 第 2版 南 京 :东 南 大 学 出版社 ,1997:744免疫 发光 技 术 操 作 手 册 , 美 国 雅 培 公 司 5陶 义 训 免疫 学 和免疫 学 检 验

23、第 2版 北京 :人 民卫 生 出 版社 ,2002:1126上 海 第 一 医学 院 医 用 生 物 化 学 北京 :人 民卫 生 出 版社 ,1979:597陈 启 光 , 沈 其 君 医学 统计 学 江苏 :江苏 科 学 技 术 出 版社 ,1995:738邹 雄 肿瘤 标 志 物 在 肿瘤早期诊断 中 的 研究 与 应用 进 展 中华 检 验 医学 杂 志 ,2002, 25(2 :71729秦 德兴 , 李 雅 芳 , 戚 娟芳 癌 症 广 谱 筛查 研究 之 三 中国 肿瘤学 ,2001, 10(4 :21621810Fateh Moghadam A , Stieher P 主 编

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