各种培养基琼脂原理.docx

1、各种培养基琼脂原理 ss琼脂SS培养基用于用于沙门氏菌和志贺氏菌的分离培养SS平板的原理:SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用与煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌与部分大肠杆菌的生长。对志贺菌属与沙门 菌属相对抑制性较弱。硫代硫酸钠有助于大肠菌的着色，柠檬酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒副作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。中性红指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落。碱性变黄，酸性变红变色围pH值6.8(红)8.0(橙黄)；酚红酸性变黄，碱性变红pH:6.8（黄）-8

2、.4（红）Xld琼脂酵母膏粉提供氮源、维生素、生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;木糖、乳糖、蔗糖为可发酵糖类，产酸使酚红指示剂变黄;去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌，但不影响沙门氏菌的生长;硫代硫酸钠可被某些细菌还原硫化氢，与柠檬酸铁铵中的铁盐生成黑色硫化铁;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂。GN增菌液胰蛋白胨提供碳源、氮源、维生素和矿物质；葡萄糖和甘露醇提供糖类；柠檬酸钠和去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性细菌，但不影响沙门氏菌和志贺氏菌（阴性菌）的生长；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压。高盐察氏培养基硝酸钠提供氮源；磷酸二氢钾是缓冲剂；硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁提供必须的离子；含

3、量较高的氯化钠具有抑制细菌和减缓生长速度快的毛霉科菌种的作用；蔗糖提供碳源；琼脂是培养基的凝固剂。三糖铁琼脂（TSI）1.原理分析 本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。 该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物(K)，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸（A），使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些

4、细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。2.试验方法 以接种针挑取待试菌可疑菌落或者纯造就物穿刺接种并涂布于斜面置361造就18-24h观察结果3.化学性质粉红色粉末，一种鉴别培养基，由牛肉膏、酵母菌膏、卵白胨、 胨、葡萄糖、乳糖、蔗糖、硫酸亚铁、氯化钠、硫代硫酸钠、酚红、琼脂等配合制造而成。易吸湿，加水煮沸熔解后成橘红色半透明液体，pH约7.5，冷至45开始凝固。4.结果 志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。 大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。 沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数

5、产生H2S，多数产气。 2志贺氏菌 3沙门氏菌 4大肠杆菌KIA和TSI常用于观察微生物发酵葡萄糖和乳糖的能力，只用KIA一种就可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来。KIA成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例为 1：10， 指示剂为酚红，其在PH6.8时变为黄色，而KIA的PH为7.4，产少量的酸就可导致颜色变化。生化原理：斜面部分暴露于空气中，为有氧环境。而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。因此配KIA或TSI时，最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度，两者均为3cm ，以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。用针穿刺时，取单个菌落，穿刺至底部3-5mm处，然后在斜面上往复划线。放35度培养18-24

6、小时。观察结果：有三种类型A.非发酵型：无碳氢化合物发酵，所以无酸产生，斜面上琼脂的肽降解产物是碱性物质导致斜面变红。这种类型的细菌称为非发酵型。B.非乳糖发酵型:如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基仅有0.1%葡萄糖可以产酸A。开始阶段，培养8-12h时，产生的酸足以引起斜面和底部颜色变成黄色。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸，产生的胺类很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整个斜面又转换成碱性PH，颜色有变成红色。深部（厌氧区域），氨基酸降解不足以中和形成的酸，培养基仍为黄色。C.乳糖（蔗糖）发酵型MH琼脂（MHA）用途：用于抗

7、生素敏感试验配方：（g/L）牛肉粉可溶性淀粉酸水解酪蛋白琼脂pH值7.30.16.01.517.517.025原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代产物；琼脂是培养基的凝固剂。用法：称取本品42.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121高压灭菌15分钟,待冷至50， 倾入无菌平皿,备用。质量控制：在361培养18-24小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC25923+黄色菌落大肠埃希氏菌ATCC25922+半透明菌落沙门氏菌ATCC14028+半透明菌落铜绿假单胞菌CMCC10104+绿色菌落mh琼脂(muller hinton a

8、gar)是至今被国际公认和who推荐的最适用于琼脂纸片扩散法(kirbybaner纸片扩散法)测定细菌对抗生素敏感性的培养基。究其原因，主要由于mh琼脂培养基产品批间药物敏感试验重复性比其他培养基好；接种于mh琼脂培养基上，绝大多数致病菌生长良好；mh琼脂培养基对磺胺、甲氧苄胺嘧啶、四环素的抑制成分含量低EC肉汤中文名EC肉汤菌种大肠菌群大肠杆菌英文名E.Coli Broth用途：用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准)配方：（g/L）胰蛋白胨乳糖氯化钠磷酸氢二钾磷酸二氢钾三号胆盐pH值6.90.220.05.05.04.01.51.525原理：胰蛋白胨提供碳氮源；三号胆盐抑制

9、革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；乳糖是可发酵的糖类；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。用法：称取本品37.0g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,分装到有倒立发酵管的16mm*150mm试管中，每管8ml,121高压灭菌15分钟备用。质量控制：在44.5培养24-48小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征粪大肠菌群+产气大肠埃希氏菌ATCC25922+产气金黄色葡萄球菌ATCC25923-/沙门氏菌ATCC14028+不产气HE琼脂（HE）用途：用于沙门氏菌的选择性分离培养（GB标准）配方：（g/L）蛋白胨牛肉膏乳糖蔗糖水素胆盐氯化钠琼脂溴麝香草酚兰硫

10、代硫酸钠柠檬酸铁铵去氧胆酸钠酸性复红pH值7.50.22.03.012.012.02.020.05.020.00.0646.80.82.00.125原理： 蛋白胨、牛肉膏提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、蔗糖和水素为可发酵的糖类；胆盐、去氧胆酸钠、溴麝香草酚兰和酸性复红抑制革兰氏阳性菌；氯化钠维持均衡的渗透压；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为蓝绿色。用法： 称取本品95.8g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,冷至50-55时,倾入无菌平皿,本培养基不需要高压灭菌.

11、质量控制：在361培养18-24小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC25923-/大肠埃希氏菌ATCC25922+桔黄色菌落沙门氏菌ATCC14028+无色透明菌落，有黑色中心福氏志贺氏菌ATCC12022+无色透明菌落伊红美蓝瑞氏染料培养基（EMB）伊红美蓝培养基（eosin-methylene blue medium,简称EMB medium），一般用于检测大肠杆菌。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。伊红美蓝琼脂培养基在药典中又名曙红亚甲蓝琼脂培养基。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色

12、的大菌落。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。DHL琼脂（胆硫乳琼脂）培养基蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；去氧胆酸钠和柠檬酸钠抑制革兰氏阳性菌与大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；中性红为p

13、H指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；琼脂是培养基的凝固剂。亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）用途用于沙门氏菌选择性增菌培养。成分（g/L）蛋白胨5.0g乳糖4.0g亚硒酸氢钠4.0g磷酸氢二钠5.5g磷酸二氢钾4.5gL-胱氨酸0.01gpH值7.00.1用 法称取本品23.0克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,无菌操作分装于灭菌三角瓶或试管中备用。当天制备当天使用，无需高压灭菌。质量控制和典型特征接种10-100个沙门氏菌于361培养18-24小时生长明显，溶液混浊。原 理：蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;乳糖是可发酵的糖类;亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多

14、数革兰氏阴性肠道菌;磷酸盐是缓冲剂;L-胱氨酸为还原剂。麦康凯琼脂培养基用途：用于肠道致病菌的选择性分离培养配方：（g/L）蛋白胨乳糖牛胆盐氯化钠中性红琼脂PH值20.0g10.0g5.0g5.0g0.03g14.0g7.10.2原理：蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子；牛胆盐可抑制革兰氏阳性菌的生长；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；乳糖为可发酵的糖类；中性红是pH指示剂，细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。麦康凯琼脂主要用于肠杆菌科细菌的培养，是一种弱选择性的培养基，很多弧菌、气单胞菌、假单胞菌、不动杆菌属的细菌也可以在上面生长。麦康凯平板的原理：利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开沙门菌与志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落