实验室常用试剂配制方法.docx

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实验室常用试剂配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1MTris-HCl           □组份浓度1MTris-HCl

（pH7.4，7.6，8.0）   □配制量1L

    □配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

                         2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

                         3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

                                                       pH值                     浓HCl 

                                                        7.4                        约70mL

                                                       7.6                        约60mL

                                                       8.0                        约42mL

                       4.将溶解定容至1L。

                       5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCl    □组份浓度1.5MTris-HCl

   （pH8.8）           □配制量1L

        □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

                          2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

                          3.用浓盐酸调pH值至8.8。

                            4.将溶液定容至1L。

                        5.高温高压灭菌后，室温保存。

      注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer       □组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA

（pH7.4，7.6，8.0） □配制量1L

 □配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

                              1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

                            500mMEDTA（pH8.0）20mL

                      2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

                    3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

                    4.室温保存。

4、3M醋酸钠     □组份浓度3M醋酸钠

   （pH5.2）          □配制量100mL

   □配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

                          2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

                      3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

                         4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer         □组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

                               □配制量1L

□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

                                                     NaCl                   8g

                                                     KCl                     0.2g

                                                     Na2HPO4          1.42g

                                                     KH2PO4            0.27g

       2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

     3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

       4.高温高压灭菌后，室温保存。

      注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵        □组份浓度10M醋酸铵

                               □配制量100mL

  □配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

                       2.加去离子水将溶液定容至100mL。

                          3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

                         4.密封瓶口于室温保存。

       注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚   □配置方法

       1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

      2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

       3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

         ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

          ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

          ③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

          ④重复操作步骤③。

          ⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

         ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

          ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

          ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇  □配置方法

       1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

       2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS   □组份浓度10％（W/V）SDS

                                  □配制量100mL

    □配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

                     2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

                           3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH          □组份浓度2NNaOH

                                □配制量100mL 

    □配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

      2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

    3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

     4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl        □组份浓度2.5NHCl

                                 □配制量100mL

    □配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

                        2.室温保存。

12、5MNaCl         □组份浓度5MNaCl

                                □配制量1L

  □配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

                   2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

                  3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose    □组份浓度20％（W/V）Glucose 

                                             □配制量100mL 

 □配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

                   2.加去离子水将溶液定容至100mL。

                     3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI           □组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose

（质粒提取用）        □配制量1L

    □配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（pH8.0）            25mL

                           0.5MEDTA（pH8.0）           20mL 

                           20％Glucose（1.11M）          45mL

                              dH2O                                   910mL

                          2.高温高压灭菌后，4℃保存。

                          3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

15、SolutionII          □组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS

（质粒提取用）           □配制量500mL

   □配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

                                                       10％SDS                       50mL

                                                        2NNaOH                       50mL 

                      2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

                      3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

                        注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、SolutionIII         □组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH

（质粒提取用）          □配制量500mL

 □配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

                                                       KOAc                           147g

                                                       CH3COOH                   57.5mL 

                      2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

                     3.加去离子水将溶液定容至500mL。

                       4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5MEDTA          □组份浓度0.5MEDTA

      （pH8.0）                 □配制量1L

     □配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。

                          2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

                         3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

                                 注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

                          4.加去离子水将溶液定容至1L。

                          5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

                           6.室温保存。

18、1MDTT         □组份浓度1MDTT

                                 □配制量20mL

          □配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

                            2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

                            3.适量分成小份后，-20℃保存。

19、10mMATP           □组份浓度10mMATP

                                   □配制量20mL

□配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

                    2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

                  3.适量分成小份，-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin             □组份浓度100mg/mlAmpicillin

（100mg/ml）             □配制量50mL

 □配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。

                       2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

                      3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

                      4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG                   □组份浓度24mg/mLIPTG

（24mg/mL）            □配制量50mL

     配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

                      2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

                    3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

                     4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X-Gal                 □组份浓度20mg/mLX-Gal

（20mg/mL）            □配制量50mL

          □配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

                            2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。

                         3.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

4、LB培养基             □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，1％（W/V）NaCl

                                 □配制量1L

      □配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

                                                       Tryptone                          10g

                                                        YeastExtract                   5g 

                                                         NaCl                              10g

                            2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

                          3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

                            4.高温高压灭菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培养基     □组份浓度 1％（W/V）       Tryptone

                                                    0.5％（W/V）   YeastExtract

                                                    1％（W/V）       NaCl

                                                    0.1mg/mL            Ampicillin

                                □配制量1L

        □配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

                                                      Tryptone                     10g

                                                      YeastExtract               5g

                                                      NaCl                          10g

                              2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

                          3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

                            4.加去离子水将培养基定容至1L。

                        5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

                           6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。

                                                   7.4℃保存。

6、TB培养基            □组份浓度    1.2％（W/V）     Tryptone

                                                      2.4％（W/V）    YeastExtract

                                                      0.4％（V/V）       Glycerol 

                                                       17mM                  KH2PO4