实验方案及实验结果见表7。
表7响应面分析方案及实验结果
Table7Responsesurfaceanalysisprogramandtestresults
试管号
因素
提取率
<%)
A
B
C
1
0
-1
1
4.35
2
0
-1
1
3.25
3
0
0
0
5.89
4
1
1
0
4.85
5
1
-1
0
4.32
6
0
1
-1
3.83
7
0
0
0
6.56
8
-1
0
1
4.56
9
1
0
1
4.68
10
-1
1
0
4.32
11
0
1
1
5.12
12
-1
-1
0
4.73
13
1
0
-1
3.68
14
0
0
0
6.32
15
-1
0
-1
4.03
16
0
0
0
5.93
17
0
0
0
5.78
3.3.3多元二次响应面回归模型的建立与分析
对表7的结果通过Design-Expert软件程序进行二次回归响应面分析,三个因子经过拟合建立多元二次回归响应面回归模型:
Y=6.10-0.014A+0.18B+0.49C-0.72A2-0.82B2-1.14C2+0.24AB+0.12AC+0.048BC,各因素方差分析见表8。
从表8可以看出,该模型是显著的
这和该模型回归中的线性和平方项影响显著相对应。
从表8中还可以看出,影响北芪菇多糖提取率的各因素按影响大小排列顺序依次为C(液料比>、B(提取时间>、A(提取温度>,其中液料比达到极显著水平。
根据回归方程得出不同因素的响应面分析图及相应等高线图,见图5~7。
表8二次响应面回归模型方差分析
Table8Analyzeofmeansquare
方差
来源
平方和
SS
自由度
DF
均方
MS
F值
F
Prob
>F
模型
14.12
9
1.57
14.99
0.0009
A
0.001512
1
0.001512
0.014
0.9077
B
0.27
1
0.27
2.58
0.1521
C
1.92
1
1.92
18.36
0.0036
A2
2.19
1
2.19
20.90
0.0026
B2
2.83
1
2.83
27.10
0.0012
C2
5.45
1
5.45
52.13
0.0002
AB
0.22
1
0.22
2.11
0.1895
AC
0.055
1
0.055
0.53
0.4910
BC
0.009025
1
0.009025
0.086
0.7775
残差
0.73
7
0.10
失拟值
0.30
3
0.099
0.91
0.5116
纯误差
0.44
4
0.11
总和
14.85
16
图5~7直观地给出了各个因子交互作用的响应面的3D和等值线分析图。
从响应面图可以看出,在所选范围内存在极值,不仅是响应面的最高点,而且也是等值线最小椭圆中心。
3.3.4最佳提取条件的确定
由响应面法分析数据可得北芪菇多糖最佳提取工艺为:
温度90.28℃,时间2.06h,液料比32.19:
1,理论最佳提取率为6.16078%。
通过三次验证实验,求得平均值为6.71%,该值与理论值相差0.55%。
因此响应面法优化北芪菇多糖提取工艺的方法可行,得出的结果有实际应用价值。
4结论与讨论
4.1结论
(1>通过对温度、时间、液料比的单因素实验,确定响应面实验方案,用Design-Expert软件处理响应面实验结果并得出理论最佳提取条件,然后经过验证性实验证明理论最佳条件下北芪菇多糖提取率最高,从而确定北芪菇最佳提取工艺为:
温度90.28℃,时间2.06h,液料比32.19:
1。
图5提取时间与提取温度对多糖提取率影响的响应面图
Fig.5Responsesurfaceplotsofextractiontimeandextraction
temperatureonontheyieldofpolysaccharides
图6液料比与提取温度对多糖提取率影响的响应面图
Fig.6Responsesurfaceplotsofwater/dryweightratioandextraction
temperatureontheyieldofpolysaccharides
图7液料比与提取时间对多糖提取率影响的响应面图
Fig.7Responsesurfaceplotsofwater/dryweightratioandextraction
timeontheyieldofpolysaccharides
(2>在用苯酚—硫酸法测定葡萄糖含量时,当加入浓硫酸后,会产生大量的热,所以需要迅速置于冰水浴中冷却降温。
(3>北芪菇除含有多糖外,还会有单糖,蛋白质和少量的脂肪酸等成分,虽然在实验过程中采取了脱脂、去蛋白和多次洗涤,但少量的这些成分还是会影响多糖提取率和多糖纯度,对实验结果有一定的影响。
(4>图6和图7的响应面3D曲线比较平坦,是由于液料比与温度,液料比与时间之间的相互影响的显著性相对较小。
表8中的P值越小,对Y值的影响就越显著,所以对北芪菇多糖提取率影响最大的因素为液料比。
4.2讨论
(1>正交实验设计只能处理离散水平的数据,而无法确定整个区域因素的最佳组合和响应值的最优值[21]。
响应面分析法克服了正交设计的缺陷,对各个因素水平进行了更加全面的分析,研究了各个因素之间的相互作用。
用响应面分析法优化北芪菇多糖提取工艺,求得的回归方程精度高,可以准确分析出整个区域因素的最佳组合和响应值的最优值,是比正交设计更理想的方法。
(2>水提取多糖的效率不是太高,若用超声波或微波辅助会大大提高提取率,提取速度也会加快,并且节约能源[22]。
其中超声波提取率要远远高于微波,单其提取时间比微波要长,所以对北芪菇多糖提取工艺有待进一步研究,以寻找最佳提取工艺。
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StudyonResponseSurfaceMethodologyOptimizeBeiqiMushroomPolysaccharidesExtractionProcess
Abstract:
Objective:
ThepurposeofthisarticlewasthestudyofBeiqimushroompolysaccharidesextractionprocessandtheoptimumextractionconditions.Thisarticleprovidedmethodologybasisfortheeffectivedevelopmentofnewtypeofediblefungus—Beiqimushro