pPIC9K序列.docx

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pPIC9K序列

载体基本信息

出品公司:

Invitrogen

载体名称:

pPIC9K,pPIC9K

质粒类型:

毕赤酵母蛋白表达载体

表达水平:

高拷贝

启动子:

AOX1

克隆方法:

多克隆位点,限制性内切酶

载体大小:

9276bp

5'测序引物及序列:

5´AOX1:

5´-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3´;alpha-Factor-F:

5´-TACTATTGCCAGCATTGCTGC-3´

3'测序引物及序列:

3´AOX1:

5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´

载体标签:

N-alphafactor

载体抗性:

氨苄与卡那

筛选标记:

HIS4

备注:

利用alpha分泌因子,分泌表达蛋白。

产品目录号:

V175-20

稳定性:

稳定Stable

组成型:

组成型Constitutive

病毒/非病毒:

非病毒

载体质粒图谱与多克隆位点信息

载体简介

pPIC9K载体中存在卡那抗性基因,允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝,载体其余部分与pPIC9载体完全一样。

pPIC9K载体能够使用得毕赤酵母宿主菌就是KM71与GS115。

pPIC9K载体详细信息如下:

•pPIC9载体大小9276bp,就是融合表达载体。

•载体构建过程中,可供使用得单一限制性内切酶位点为SnaBI,EcoRI,AvrII,NotI、

•利用alpha因子分泌信号肽,分泌表达蛋白基因。

•在载体构建过程中,您得基因必须保证与信号肽得起始密码子得读码框一致。

•毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。

•为了将基因插入GS115或KM71得AOX区,使用SacI限制性内切酶线性化质粒（GS115中产生His+Mut+基因型,KM71中产生His+MutS基因型）

•为了将基因插入GS115或KM71得His4区,使用SalI或者StuI限制性内切酶线性化质粒（GS115中产生His+Mut+基因型,KM71中产生His+MutS基因型）

•将基因插入GS115得AOX1区域,需要使用BglII线性化质粒（产生His+MutS基因型）。

载体序列

LOCUSpPIC9K9276bpDNAcircularSYN

DEFINITIONpPIC9K

ACCESSION

KEYWORDS

SOURCE

ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors、

MENTThiscreatedbyVectorNTI

MENTVNTAUTHORNAME|biofeng、|

FEATURESLocation/Qualifiers

source1、、9276

/organism="pPIC9K"

/mol_type="otherDNA"

misc_feature1152、、1172

/label="alpha_factor_primer"

misc_featureplement（1327、、1347）

/label="3_AOX1_primer"

CDSplement（1980、、4514）

/label="ORFframe2"

geneplement（4928、、5743）

/label="KanR2"

/gene="KanR2"

CDSplement（4928、、5743）

/label="ORFframe3"

misc_featureplement（5908、、5927）

/label="pBRrevBam_primer"

CDSplement（5909、、6631）

/label="ORFframe3"

misc_featureplement（6913、、6935）

/label="pGEX_3_primer"

rep_originplement（7332、、7951）

/label="pBR322_origin"

geneplement（8106、、8966）

/label="Ampicillin"

/gene="Ampicillin"

CDSplement（8106、、8966）

/label="ORFframe2"

promoterplement（9008、、9036）

/label="AmpR_promoter"

ORIGIN

1AGATCTAACATCCAAAGACGAAAGGTTGAATGAAACCTTTTTGCCATCCGACATCCACAG

61GTCCATTCTCACACATAAGTGCCAAACGCAACAGGAGGGGATACACTAGCAGCAGACCGT

121TGCAAACGCAGGACCTCCACTCCTCTTCTCCTCAACACCCACTTTTGCCATCGAAAAACC

181AGCCCAGTTATTGGGCTTGATTGGAGCTCGCTCATTCCAATTCCTTCTATTAGGCTACTA

241ACACCATGACTTTATTAGCCTGTCTATCCTGGCCCCCCTGGCGAGGTTCATGTTTGTTTA

301TTTCCGAATGCAACAAGCTCCGCATTACACCCGAACATCACTCCAGATGAGGGCTTTCTG

361AGTGTGGGGTCAAATAGTTTCATGTTCCCCAAATGGCCCAAAACTGACAGTTTAAACGCT

421GTCTTGGAACCTAATATGACAAAAGCGTGATCTCATCCAAGATGAACTAAGTTTGGTTCG

481TTGAAATGCTAACGGCCAGTTGGTCAAAAAGAAACTTCCAAAAGTCGCCATACCGTTTGT

541CTTGTTTGGTATTGATTGACGAATGCTCAAAAATAATCTCATTAATGCTTAGCGCAGTCT

601CTCTATCGCTTCTGAACCCCGGTGCACCTGTGCCGAAACGCAAATGGGGAAACACCCGCT

661TTTTGGATGATTATGCATTGTCTCCACATTGTATGCTTCCAAGATTCTGGTGGGAATACT

721GCTGATAGCCTAACGTTCATGATCAAAATTTAACTGTTCTAACCCCTACTTGACAGCAAT

781ATATAAACAGAAGGAAGCTGCCCTGTCTTAAACCTTTTTTTTTATCATCATTATTAGCTT

841ACTTTCATAATTGCGACTGGTTCCAATTGACAAGCTTTTGATTTTAACGACTTTTAACGA

901CAACTTGAGAAGATCAAAAAACAACTAATTATTCGAAGGATCCAAACGATGAGATTTCCT

961TCAATTTTTACTGCAGTTTTATTCGCAGCATCCTCCGCATTAGCTGCTCCAGTCAACACT

1021ACAACAGAAGATGAAACGGCACAAATTCCGGCTGAAGCTGTCATCGGTTACTCAGATTTA

1081GAAGGGGATTTCGATGTTGCTGTTTTGCCATTTTCCAACAGCACAAATAACGGGTTATTG

1141TTTATAAATACTACTATTGCCAGCATTGCTGCTAAAGAAGAAGGGGTATCTCTCGAGAAA

1201AGAGAGGCTGAAGCTTACGTAGAATTCCCTAGGGCGGCCGCGAATTAATTCGCCTTAGAC

1261ATGACTGTTCCTCAGTTCAAGTTGGGCACTTACGAGAAGACCGGTCTTGCTAGATTCTAA

1321TCAAGAGGATGTCAGAATGCCATTTGCCTGAGAGATGCAGGCTTCATTTTTGATACTTTT

1381TTATTTGTAACCTATATAGTATAGGATTTTTTTTGTCATTTTGTTTCTTCTCGTACGAGC

1441TTGCTCCTGATCAGCCTATCTCGCAGCTGATGAATATCTTGTGGTAGGGGTTTGGGAAAA

1501TCATTCGAGTTTGATGTTTTTCTTGGTATTTCCCACTCCTCTTCAGAGTACAGAAGATTA

1561AGTGAGAAGTTCGTTTGTGCAAGCTTATCGATAAGCTTTAATGCGGTAGTTTATCACAGT

1621TAAATTGCTAACGCAGTCAGGCACCGTGTATGAAATCTAACAATGCGCTCATCGTCATCC

1681TCGGCACCGTCACCCTGGATGCTGTAGGCATAGGCTTGGTTATGCCGGTACTGCCGGGCC

1741TCTTGCGGGATATCGTCCATTCCGACAGCATCGCCAGTCACTATGGCGTGCTGCTAGCGC

1801TATATGCGTTGATGCAATTTCTATGCGCACCCGTTCTCGGAGCACTGTCCGACCGCTTTG

1861GCCGCCGCCCAGTCCTGCTCGCTTCGCTACTTGGAGCCACTATCGACTACGCGATCATGG

1921CGACCACACCCGTCCTGTGGATCTATCGAATCTAAATGTAAGTTAAAATCTCTAAATAAT

1981TAAATAAGTCCCAGTTTCTCCATACGAACCTTAACAGCATTGCGGTGAGCATCTAGACCT

2041TCAACAGCAGCCAGATCCATCACTGCTTGGCCAATATGTTTCAGTCCCTCAGGAGTTACG

2101TCTTGTGAAGTGATGAACTTCTGGAAGGTTGCAGTGTTAACTCCGCTGTATTGACGGGCA

2161TATCCGTACGTTGGCAAAGTGTGGTTGGTACCGGAGGAGTAATCTCCACAACTCTCTGGA

2221GAGTAGGCACCAACAAACACAGATCCAGCGTGTTGTACTTGATCAACATAAGAAGAAGCA

2281TTCTCGATTTGCAGGATCAAGTGTTCAGGAGCGTACTGATTGGACATTTCCAAAGCCTGC

2341TCGTAGGTTGCAACCGATAGGGTTGTAGAGTGTGCAATACACTTGCGTACAATTTCAACC

2401CTTGGCAACTGCACAGCTTGGTTGTGAACAGCATCTTCAATTCTGGCAAGCTCCTTGTCT

2461GTCATATCGACAGCCAACAGAATCACCTGGGAATCAATACCATGTTCAGCTTGAGACAGA

2521AGGTCTGAGGCAACGAAATCTGGATCAGCGTATTTATCAGCAATAACTAGAACTTCAGAA

2581GGCCCAGCAGGCATGTCAATACTACACAGGGCTGATGTGTCATTTTGAACCATCATCTTG

2641GCAGCAGTAACGAACTGGTTTCCTGGACCAAATATTTTGTCACACTTAGGAACAGTTTCT

2701GTTCCGTAAGCCATAGCAGCTACTGCCTGGGCGCCTCCTGCTAGCACGATACACTTAGCA

2761CCAACCTTGTGGGCAACGTAGATGACTTCTGGGGTAAGGGTACCATCCTTCTTAGGTGGA

2821GATGCAAAAACAATTTCTTTGCAACCAGCAACTTTGGCAGGAACACCCAGCATCAGGGAA

2881GTGGAAGGCAGAATTGCGGTTCCACCAGGAATATAGAGGCCAACTTTCTCAATAGGTCTT

2941GCAAAACGAGAGCAGACTACACCAGGGCAAGTCTCAACTTGCAACGTCTCCGTTAGTTGA

3001GCTTCATGGAATTTCCTGACGTTATCTATAGAGAGATCAATGGCTCTCTTAACGTTATCT

3061GGCAATTGCATAAGTTCCTCTGGGAAAGGAGCTTCTAACACAGGTGTCTTCAAAGCGACT

3121CCATCAAACTTGGCAGTTAGTTCTAAAAGGGCTTTGTCACCATTTTGACGAACATTGTCG

3181ACAATTGGTTTGACTAATTCCATAATCTGTTCCGTTTTCTGGATAGGACGACGAAGGGCA

3241TCTTCAATTTCTTGTGAGGAGGCCTTAGAAACGTCAATTTTGCACAATTCAATACGACCT

3301TCAGAAGGGACTTCTTTAGGTTTGGATTCTTCTTTAGGTTGTTCCTTGGTGTATCCTGGC

3361TTGGCATCTCCTTTCCTTCTAGTGACCTTTAGGGACTTCATATCCAGGTTTCTCTCCACC

3421TCGTCCAACGTCACACCGTACTTGGCACATCTAACTAATGCAAAATAAAATAAGTCAGCA

3481CATTCCCAGGCTATATCTTCCTTGGATTTAGCTTCTGCAAGTTCATCAGCTTCCTCCCTA

3541ATTTTAGCGTTCAACAAAACTTCGTCGTCAAATAACCGTTTGGTATAAGAACCTTCTGGA

3601GCATTGCTCTTACGATCCCACAAGGTGGCTTCCATGGCTCTAAGACCCTTTGATTGGCCA

3661AAACAGGAAGTGCGTTCCAAGTGACAGAAACCAACACCTGTTTGTTCAACCACAAATTTC

3721AAGCAGTCTCCATCACAATCCAATTCGATACCCAGCAACTTTTGAGTTGCTCCAGATGTA

3781GCACCTTTATACCACAAACCGTGACGACGAGATTGGTAGACTCCAGTTTGTGTCCTTATA

3841GCCTCCGGAATAGACTTTTTGGACGAGTACACCAGGCCCAACGAGTAATTAGAAGAGTCA

3901GCCACCAAAGTAGTGAATAGACCATCGGGGCGGTCAGTAGTCAAAGACGCCAACAAAATT

3961TCACTGACAGGGAACTTTTTGACATCTTCAGAAAGTTCGTATTCAGTAGTCAATTGCCGA

4021GCATCAATAATGGGGATTATACCAGAAGCAACAGTGGAAGTCACATCTACCAACTTTGCG

4081GTCTCAGAAAAAGCATAAACAGTTCTACTACCGCCATTAGTGAAACTTTTCAAATCGCCC

4141AGTGGAGAAGAAAAAGGCACAGCGATACTAGCATTAGCGGGCAAGGATGCAACTTTATCA

4201ACCAGGGTCCTATAGATAACCCTAGCGCCTGGGATCATCCTTTGGACAACTCTTTCTGCC

4261AAATCTAGGTCCAAAATCACTTCATTGATACCATTATTGTACAACTTGAGCAAGTTGTCG

4321ATCAGCTCCTCAAATTGGTCCTCTGTAACGGATGACTCAACTTGCACATTAACTTGAAGC

4381TCAGTCGATTGAGTGAACTTGATCAGGTTGTGCAGCTGGTCAGCAGCATAGGGAAACACG

4441GCTTTTCCTACCAAACTCAAGGAATTATCAAACTCTGCAACACTTGCGTATGCAGGTAGC

4501AAGGGAAATGTCATACTTGAAGTCGGACAGTGAGTGTAGTCTTGAGAAATTCTGAAGCCG

4561TATTTTTATTATCAGTGAGTCAGTCATCAGGAGATCCTCTACGCCGGACGCATCGTGGCC

4621GACCTGCAGGGGGGGGGGGGGCGCTGAGGTCTGCCTCGTGAAGAAGGTGTTGCTGACTCA

4681TACCAGGCCTGAATCGCCCCATCATCCAGCCAGAAAGTGAGGGAGCCACGGTTGATGAGA

4741GCTTTGTTGTAGGTGGACCAGTTGGTGATTTTGAACTTTTGCTTTGCCACGGAACGGTCT

4801GCGTTGTCGGGAAGATGCGTGATCTGATCCTTCAACTCAGCAAAAGTTCGATTTATTCAA

4861CAAAGCCGCCGTCCCGTCAAGTCAGCGTAATGCTCTGCCAGTGTTACAACCAATTAACCA

4921ATTCTGATTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGAT

4981TATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGC

5041AGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAA

5101TACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAG

5161TGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGCTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAA

5221CAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTC

5281GTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAG

5341GAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAAT

5401CAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACC

5461ATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCA

5521GCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTT

5581TCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATT

5641GCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTA

5701ATCGCGGCCTCGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTAC

5761TGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGT

5821AACATCAGAGATTTTGAGACACAACGTGGCTTTCCCCCCCCCCCCTGCAGGTCGGCATCA

5881CCGGCGCCACAGGTGCGGTTGCTGGCGCCTATATCGCCGACATCACCGATGGGGAAGATC

5941GGGCTCGCCACTTCGGGCTCATGAGCGCTTGTTTCGGCGTGGGTATGGTGGCAGGCCCCG

6001TGGCCGGGGGACTGTTGGGCGCCATCTCCTTGCATGCACCATTCCTTGCGGCGGCGGTGC

6061TCAACGGCCTCAACCTACTACTGGGCTGCTTCCTAATGCAGGAGTCGCATAAGGGAGAGC

6121GTCGAGTATCTATGATTGGAAGTATGGGAATGGTGATACCCGCATTCTTCAGTGTCTTGA

6181GGTCTCCTATCAGATTATGCCCAACTAAAGCAACCGGAGGAGGAGATTTCATGGTAAATT

6241TCTCTGACTTTTGGTCATCAGTAGACTCGAACTGTGAGACTATCTCGGTTATGACAGCAG

6301AAATGTCCTTCTTGGAGACAGTAAATGAAGTCCCACCAATAAAGAAATCCTTGTTATCAG

6361GAACAAACTTCTTGTTTCGAACTTTTTCGGTGCCTTGAACTATAAAATGTAGAGTGGATA

6421TGTCGGGTAGGAATGGAGCGGGCAAATGCTTACCTTCTGGACCTTCAAGAGGTATGTAGG

6481GTTTGTAGATACTGATGCCAACTTCAGTGACAACGTTGCTATTTCGTTCAAACCATTCCG

6541AATCCAGAGAAATCAAAGTTGTTTGTCTACTATTGATCCAAGCCAGTGCGGTCTT