浅论RANTES.docx

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浅论RANTES

浅论RANTES

【摘要】目的?

：

探讨调节激活正常T细胞表达、分泌的细胞因子（RANTES）-403G/A、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）-2518A/G基因多态性与呼吸道合胞病毒（RSV）毛细支气管炎易感性的相关性。

方法：

应用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测150例RSV毛细支气管炎患儿和120例正常儿童上述位点单核苷酸多态性（SNPs）。

结果：

病例组RANTES-403G/A基因型和等位基因型频率分别为GG%、GA%、AA%、G%、A%，对照组为GG%、GA%、AA%、G%、A%，两组基因型频率差异有显着性（）;病例组A等位基因频率高于对照组（），与G等位基因携带者相比，A等位基因携带者患病风险增加（OR=，）。

两组MCP-1-2518基因型和等位基因频率差异无显着性（均）。

结论：

RANTES-403A等位基因与RSV毛细支气管炎易感性相关，其可能是影响发病的一个重要候选基因;未发现MCP-1-2518A/G基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性存在关联。

【关键词】呼吸道合胞病毒;毛细支气管炎;基因多态性;RANTES;MCP-1

　Abstract:

?

Objective:

Toexplorethecorrelationofregulatedonactivation，normalTcellexpressedandsecreted（RANTES）andmonocytechemotacticprotein1（MCP-1）genepolymorphismswiththesusceptibilityofrespiratorysyncytialvirus（RSV）bronchiolitis.Methods:

?

RANTES-403G/AandMCP-1-2518A/Gweregenotypedwithpolymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphismin150childrenwithRSVbronchiolitisand120healthysubjects.Results:

ThefrequencyofeachgenotypeforRANTES-403G/Awas%?

（GG），%?

（GA），%?

（AA）incasegroupand%?

（GG），%?

（GA），%?

（AA）incontrolone，respectively.Therewassignificantdifferencebetweentwogroups?

（）.Thefrequencyofeachallelewas%（G），%?

（A）incasegroup，and%（G），%?

（A）incontrolgroup.ThefrequencyofAallelewassignificantlyincreasedincasegroup?

（）;ChildrencarryingwithAalleleincreasedriskforRSVbronchiolitiscomparedwiththosewithGallele（OR=，）.TherewerenosignificantdifferencesforgenotypeandallelefrequencyofMCP-1-2518A/Gbetweentwogroups?

（）.Conclusion:

?

RANTES-403AalleleisassociatedwiththesusceptibilityandmaybeoneofcandidategenesforRSVbronchiolitis.NocorrelationisfoundbetweenMCP-1-2518A/GgenepolymorphismsandthesusceptibilityofRSVbronchiolitis.

　　Keywords:

?

respiratorysyncytialvirus;bronchiolitis;genepolymorphisms;regulatedonactivation，normalTcellexpressedandsecreted;monocytechemotacticprotein-1

　　呼吸道合胞病毒（RSV）是婴幼儿下呼吸道感染最常见的病原，研究显示，RSV感染的气道上皮细胞能产生调节激活正常T细胞表达、分泌的细胞因子（RANTES）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）等趋化因子，从而引发过度的气道炎症反应[1-2]。

RSV感染患儿鼻腔盥洗液及鼻咽分泌物RANTES水平明显增高，且与疾病严重程度相关[3-4]，有低氧表现的RSV毛细支气管炎患儿鼻炎分泌物中MCP-1水平明显升高，提示趋化因子可能在RSV感染发病中发挥重要作用。

几乎所有儿童2岁时均感染RSV，但仅1%～2%需住院治疗，造成病情差异的原因尚不清楚，许多严重RSV感染患儿并不存在早产、先天性心脏病、支气管肺发育不良等高危因素，因此，宿主的遗传因素与RSV感染发病的关系正成为研究的焦点。

既往研究已证实调控RANTES和MCP-1的基因位点存在多态性[6-7]。

本研究通过病例-对照分析，探讨RANTES-403G/A、MCP-1-2518A/G的单核苷酸多态性（SNPs）与RSV毛细支气管炎易感性的相关性，筛选与疾病易感性相关的SNP位点。

　　1对象和方法

　　对象病例组为2006年11月-2007年3月入住温州医学院附属育英儿童医院呼吸科，诊断为RSV毛细支气管炎患儿150例，其中男111例，女39例，年龄1～24个月，有早产、双胎、先天性心脏病、支气管肺发育不良、免疫缺陷等基础疾病者除外。

对照组选择同期健康体检的儿童120例，男92例，女28例，年龄2～24个月。

两组均无特应性疾病史及家族特应性疾病史，均为汉族，无血缘关系。

　　方法

　　基因组DNA提取：

用Chelex-100快速提取法提取基因组DNA。

　　聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测：

各位点信息、引物、产物长度、PCR反应条件及限制性内切酶见表1。

PCR反应体系为20μL：

PrimerF（10μmol/L）1μL，PrimerR（10μmol/L）1μL，dNTPMix（2mmol/L）2μL，MgCl2（25mmol/L）μL，10×Buffer2μL，DNA模板2μL，TaqDNA聚合酶（1?

U/μL）μL，去离子水μL。

取PCR产物5μL，限制性内切酶3U，10×Buffer1μL，余用去离子水补齐，总体积为10μL，37℃水浴箱中酶切过夜。

30g/L琼脂糖凝胶鉴定基因型（见图1、图2）。

　　统计学处理方法基因型与等位基因频率Hardy-Weinburg平衡吻合程度用x2检验;基因型及等位基因频率的比较用x2检验;用Logistic回归模型判断等位基因型对发病危险度的影响。

　　2结果

　　/A基因型及等位基因分布病例组和对照组均可见GG、GA、AA3种基因型，以GA杂合子基因型为主;经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组的遗传平衡，表明该群体来自同一孟德尔群体（x2=，）;而病例组的遗传不平衡（x2=，）。

两组基因型频率差异有显着性（x2=，）;病例组A等位基因的频率明显高于对照组（x2=，）（见表2）;与G等位基因携带者相比，A等位基因携带者患RSV毛细支气管炎的风险明显增加（OR=，95%CI:

～，）。

　　/G基因型及等位基因分布病例组和对照组均可见GG、GA、AA3种基因型，以GA杂合子基因型为主;经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组的遗传平衡（x2=，）;而病例组的遗传不平衡（x2=，）。

两组基因型和等位基因型频率差异均无显着性（见表3）。

　　3讨论

　　RANTES基因位于人染色体，该区域与哮喘等特应性疾病基因连锁，目前，RANTES基因启动子区研究最多的3个多态性位点分别为-403G/A、-109T/C、-28C/G。

其中-403位点G/A的变异，可能对其基因转录造成影响，从而影响疾病的发生发展。

Fryer等发现白人哮喘和特应性个体-403A等位基因频率高于正常个体，推断-403A与哮喘易感性和特应性有关。

文惯宇等也报道-403A可能是特应性体质的易感因素，但未发现RANTES-403G/A位点基因多态性与RSV毛细支气管炎的相关性。

Amanatidou等[10]的研究则发现，RANTES基因-28C/G、-403G/A和/C位点与RSV毛细支气管炎的易感性均无关，但基因型同时为-28C/C、-403G/A和/T的个体易患该病。

本研究结果显示温州地区RSV毛细支气管炎患儿和正常儿童均存在GG、GA和AA3种基因型，两组基因型频率差异有显着性，RSV毛细支气管炎组RANTES-403A等位基因频率高于对照组，与携带G等位基因个体相比，携带A等位基因的个体患毛细支气管炎风险增加了倍，提示RANTES-403A等位基因与RSV毛细支气管炎易感性相关，可能是影响RSV毛细支气管炎发病的一个重要候选基因。

　　MCP-1编码基因位于人染色体，由3个外显子和2个内含子组成，该段基因亦与哮喘等特应性疾病基因连锁。

目前，MCP-1启动子区研究最多的两个多态性位点为-2518G/A和-2076A/T。

Rovin等报道MCP-1-2518位点基因多态性影响MCP-1的转录及表达水平，MCP-1-2518G等位基因能使MCP-1转录增多，从而使其蛋白表达水平上调。

Szalai等[11]发现MCP-1-2518G等位基因可增加婴幼儿哮喘的易感性，并与病情相关。

目前国内外尚无MCP-1-2518G/A基因多态性与RSV感染发病的报道，本研究未发现MCP-1-2518G/A基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性之间存在关联。

　　综上所述，本研究结果提示RANTES-403A可能是影响RSV毛细支气管炎发病的一个重要候选基因，尽管未发现MCP-1-2518G/A基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性之间存在关联，但RANTES和MCP-1位于同一染色体的同一区段，两位点所形成的单体型与RSV毛细支气管炎易感性是否相关，有待进一步探讨。

另外，RANTES基因多态性只能部分解释RSV毛细支气管炎的易感性，本课题组其他研究发现TNF-α-308A等位基因、IL-8-251A与781C等位基因形成的AC单体型均与RSV毛细支气管炎的易感性相关，这些易感基因相互之间是否存在联合或协同作用，目前尚不明了，有待今后进一步研究。

【参考文献】

　　[1]BarbaraOlszewska-Pazdrak,AntonellaCasola,TadahitoSaito,etal.Cell-specificexpressionofRANTES,MCP-1,andMIP-1abylowerairwayepithelialcellsandeosinophilsinfectedwithrespiratorysyncytialvirus[J].JofVirol,1998,72（6）:

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　　McNamaraPS,FlanaganBF,HartCA,etal.Productionofchemokinesinthelungsofinfantswithsevererespiratorysyncytialvirusbronchiolitis[J].JInfectDis,2005,191（8）:

1225-1232.

　　NoahTL,IvinsSS,MurphyP,etal.Chemokinesandin-flammationinthenasalpassagesofinfantswithrespiratorysyncytialvirusbronchiolitis[J].ClinImmunol,2002,104

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86-95.

　　MuraiH,TeradaA,MizunoM,etal.IL-10andRANTESareelevatedinnasopharyngealsecretionsofchildrenwithres-piratorysyncytialvirusinfection[J].AllergolInt,2007,56

（2）:

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　　GarofaloRP,PattuJ,HintzKA,etal.Macrophageinflam-matoryprotein-1a（NotTHelperType2Cytokines）isassociatedwithsevereformsofrespiratorysyncytialvirusbronchiolitis[J].JInfecDis,2001,184（4）:

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　　HizawaN,YamaguchiE,KonnoS,etal.Afunctionalpoly-morphismintheRANTESgenepromoterisassociatedwiththelateonsetasthma[J].AmJRespirCritCareMed,2002,166（5）:

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　　RovinBH,LuL,SaxenaR.AnovelpolymorphismintheMCP-1generegulatoryregionthatinfluencesMCP-1expression[J].BiochemBiophysResCommun,1999,259

（2）:

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　　FryerAA,SpiteriMA,BiancoA,et/ApromoterpolymorphismintheRANTESgeneisassociatedwithatopyandasthma[J].GeneImmunol,2000,1（8）:

509-514.

　　文惯宇,赵德育,田曼.RANTES启动子-403G/A基因多态性与呼吸道合胞病毒致毛细支气管炎的相关性研究[J].南京医科大学学报,2007,27（5）:

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　　[10]AmanatidouV,SourvinosG,ApostolakisS,et　genepolymorphismsandsusceptibilitytosevererespiratorysyncytialvirus-inducedbronchiolitis[J].PediatrInfectDisJ,2008,27

（1）:

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　　[11]SzalaiC,KozmaGT,NagyA,etal.PolymorphisminthegeneregulatoryregionofMCP-1isassociatedwithasthmasusceptibilityandseverity[J].JAllergyClinImmunol,2001,108（3）:

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