生化与分子 复习资料.docx
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生化与分子复习资料
生物化学与分子生物学实验技术复习题
一、名词解释
1、DNA重组技术：
（recombinantDNAtechnology）按照人的意愿，在体外对DNA分子进行重组，再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝，表达相关基因的产物，是进行基因功能研究的基本方法。
2、杂种核酸分子：
由来自不同物种的生物体单链DNA复性所形成的双链DNA分子，称为杂种核酸分子。
能够形成杂种核酸分子的DNA分子，其亲缘关系较为密切。
3、DNA印迹：
DNA印迹是一种将电泳分离的DNA片段转移到固相支持物上用探针与靶DNA进行杂交的技术，又称Southem杂交。
DNA印迹技术主要用于对基因组DNA的定性和定量分析、克隆基因的酶切图谱分析、基因突变分析及限制性片段长度多态性（RFLP）等。
4、基因组文库：
某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体储存于某一受体菌的群体中，这个群体就称为该生物基因组的文库genomiclibrary
5、cDNA文库:
指某生物某发育时期所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体链接而形成的克隆的集合。
6、细菌转化：
指某一受体细菌通过直接吸收来自另一供体细菌的含有特定基因的脱氧核糖核酸（DNA）片段，从而获得了供体细菌的相应遗传性状，这种现象称为细菌转化。
7、SNP：
主要是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA顺序多态性。
其比较的不是DNA的片段长度，而是相同序列长度里的单个碱基的差别。
8、原位杂交：
用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9、RNA原位杂交：
用放射性或非放射性标记的特异性探针与被固定的组织切片反应，若细胞中存在与探针互补的mRNA分子，两者杂交产生双链RNA，就可通过检测放射性标记或经酶促免疫显色，对该基因的表达产物在细胞水平上做出定性定量分析。
10、染色体原位杂交：
指用同位素或非同位素标记互补的核酸为探针，使之与染色体DNA直接结合，经过放射自显影或免疫反应，在染色体上显示特异的DNA序列，是基因定位的一种重要方法。
11、RNA干扰：
RNA干扰现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制，是指内源性或外源性与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA，在细胞内特意地降解该mRNA，从而致使特异性的基因有效封闭的过程，是一种序列特异性的转录后基因沉默。
12、DNA芯片：
又称基因芯片、DNA阵列，是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，可得出样品的遗传信息（基因序列及表达的信息）。
由于常用计算机硅芯片作为固相支持无，所以称为DNA芯片。
二、简答
1、试说明Southern杂交的原理及主要操作。
其基本原理是：
具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:
（1）酶切DNA,凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。
（2）将DNA片段转移到固体支持物（硝酸纤维素滤膜或尼龙膜）上。
（3）预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。
（4）让探针与同源DNA片段杂交,然后漂洗除去非特异性结合的探针。
（5）通过显影检查目的DNA所在的位置。
2、简述Sanger双脱氧链终止法测序的原理及操作。
原理：
以单链DNA为模板，使用特异引物在DNA聚合酶作用下进行延伸反应时，若在反应物中加入一定量的2’，3’—双脱氧三磷酸腺苷酸（ddATP），则在正在增长的DNA链中应当掺入dATP的位置上掺入了ddATP；由于ddATP在脱氧核糖的3’位置上缺少一个经基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在增长的DNA链不可能继续延伸而终止。
这样链延伸将与随机发生但却十分特异的链终止展开竞争，而反应产物则是一系列以ddATP结尾的长短不一的寡核苷酸。
如果在4组独立的酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸混合物，它们将分别终止于模板链的每一个A、每一个C、每一个G或每一个T的位置上。
将反应物变性，在可以区分长度仅差一个核苷酸的不同DNA分子的条件下，对各组寡核苷酸进行凝胶电泳分析，只要把几组寡核苷酸加样于测序凝胶中若干个相邻的泳道之上，即可从凝胶的放射自显影片上直接读出DNA上的核苷酸顺序。
操作：
主要包括以下几个步骤
制备标记片段：
为便于分析，Sanger双脱氧链终止法合成的DNA片段必须标记，通常是预先将反应体系中的引物5’端用放射性同位素或荧光素标记。
电泳：
将四个反应体系中获得的DNA片段在同一块凝胶上走变性电泳，可以按长度分离，形成阶梯状排列的区带。
显影：
将凝胶电泳区带显影，获得DNA图谱，用于读序。
同位素标记DNA片段要用放射自显影，荧光标记DNA片段可用激光扫描。
读序：
从DNA图谱上读出DNA的碱基序列。
从凝胶底部到顶部读出的序列为新生链5’→3’方向的碱基序列。
新生链的碱基序列是待测序DNA的互补序列。
3、简述建立cDNA文库的主要步骤。
构建cDNA文库通常包括：
总RNA的提取，mRNA的分离及其完整性的确定；双链cDNA的合成；载体制备；cDNA双链和载体的连接；转化；快速鉴定菌落PCR；cDNA库扩增
4、简述噬菌体展示技术的原理。
噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码基因或目的基因片段克隆入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。
被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。
5、简述蛋白质免疫印迹的原理及操作。
蛋白质免疫印迹（Western—blotting）是将蛋白质经凝胶电泳分离后，从凝胶电转印到固相支持物（如硝酸纤维素膜）上，然后用特异性的抗体进行检测。
蛋白质转膜后，先用蛋白溶液封闭膜上剩余的疏水结合位点，再用抗待检蛋白质的抗体作为探针与之结合，洗涤，将膜与标记的二抗结合，洗涤，通过放射自显影或原位酶反应来确定抗原—抗体—抗抗体复合物在膜上的位置和丰度。
蛋白质免疫印迹主要包括三个步骤：
第一步是凝胶电泳（可以是活性聚丙烯酰胺凝胶电泳，印备聚丙烯酰胺凝胶电泳，也可以是等电聚焦电泳）；第二步是转膜，把凝胶上的蛋白质条带转移固定到薄膜上，一方面是为了固定蛋白质，避免其在凝胶中扩散，另一方面是为了方便后面的抗原抗体反应，既容易操作，又节省抗体；第三步是抗原抗体显色反应。
（第三阶段为酶免疫定位:
将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加入能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色.）
蛋白质印迹（免疫印迹）的实验包括5个步骤：
1）固定（immobilization）：
蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）并从胶上转移到硝酸纤维素膜上。
2）封闭（blocked）：
保持膜上没有特殊抗体结合的场所，使场所处于饱和状态，用以保护特异性抗体结合到膜上,并与蛋白质反应。
3）初级抗体（第一抗体）是特异性的。
4）第二抗体或配体试剂对于初级抗体是特异性结合并作为指示物。
5）适当保温后的酶标记蛋白质区带，产生可见的、不溶解状态的颜色反应。
6、简述离子交换吸附的原理及操作。
离子交换吸附法是浸出液处理方法之1。
它通过浸出液中的组分（离子或分子）与离子交换吸附剂之间进行的交换、吸附反应，达到净化浸液和富集目的组分的目的，一般适用于处理稀溶液。
常用的离子交换吸附剂有离子交换树脂和活性炭以及磺化煤等。
离子交换：
借助于固体离子交换剂中的离子与稀溶液中的离子进行交换,以达到提取或去除溶液中某些离子的目的,是一种属于传质分离过程的单元操作。
广泛采用人工合成的离子交换树脂作为离子交换剂，它是具有网状结构和可电离的活性基团的难溶性高分子电解质。
根据树脂骨架上的活性基团的不同，可分为阳离子交换树脂、阴离子交换树脂、两性离子交换树脂、螯合树脂和氧化还原树脂等。
用于离子交换分离的树脂要求具有不溶性、一定的交联度和溶胀作用，而且交换容量和稳定性要高。
离子交换反应是可逆的，而且等当量地进行。
由实验得知，常温下稀溶液中阳离子交换势随离子电荷的增高，半径的增大而增大；高分子量的有机离子及金属络合阴离子具有很高的交换势[1]。
高极化度的离子如Ag+、Tl+等也有高的交换势。
离子交换速度随树脂交联度的增大而降低，随颗粒的减小而增大。
温度增高，浓度增大，交换反应速率也增快。
离子交换树脂可以再生。
将交换耗竭的离子交换树脂和适当的酸、碱或盐溶液发生交换，使树脂转化为所需要的型式，叫做再生。
这类酸、碱或盐就叫再生剂。
设备离子交换过程常在离子交换器中进行。
离子交换器类似压力滤池，外壳为一钢罐；离子交换通常采用过滤方式，滤床由交换剂构成，底部为附有滤头的管系。
离子交换分离广泛用于：
①水的软化、高纯水的制备、环境废水的净化。
②溶液和物质的纯化，如铀的提取和纯化。
③金属离子的分离、痕量离子的富集及干扰离子的除去。
④抗菌素的提取和纯化等。
7、简述亲和色谱法的原理及操作。
原理：
在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。
例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。
生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立起来的色谱法称亲色谱法。
亲和色谱中两个进行专一结合的分子互称对方为配基。
如抗原和抗体，抗原可认为是抗体的配基，反之抗体也可认为是抗原的配基。
将一个水溶性配基在不伤害其生物学功能的情况下与水不溶性载体结合称为配基的固相化。
亲和色谱法的基本过程是：
1.配基固相化。
将与纯化对象有专一结合作用的物质，连接在水不溶性载体上，制成亲和吸附剂后装柱（称亲和性）。
2.亲和吸附。
将含有纯化对象的混合物通过亲和柱，纯化对象吸附在柱上，其他物质流出色谱柱。
3.解吸附。
用某种缓冲液或溶液通过亲和柱，把吸附在亲和柱上的欲纯化物质洗脱出来。
亲和色谱法：
将相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。
例如利用酶与基质（或抑制剂）、抗原与抗体，激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用，使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物，用来作为层析用固定相，将另一方从复杂的混合物中选择可逆地截获，达到纯化的目的。
可用于分离活体高分子物质、过滤性病毒及细胞。
或用于对特异的相互作用进行研究。
亲和色谱分离的方法随每种分离物质的不同而有不同。
一般推荐使用的程序如下：
1选择配基；2选择偶联凝胶；3偶联配基；4装填合适的柱；5平衡（2-3倍体积缓冲液）；6应用样品；7洗涤未结合物质；8洗脱结合物质→除盐；9再生
8、简述色层分析的基本过程。
层析技术所谓层析，就是利用样品中各组成成分的不同物理化学性质的差异，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，由于各组分随流动相前进的速率不同，从而把它们分离开来的技术。
这些物理特性包括分子的大小、形状、所带电荷、挥发性、溶解性及吸附性质等。
层析系统的必要组分有：
a.固定相，可以是一种固体、凝胶或固定化的液体，由某种支持基质所支撑。
b.层析床，把固定相填入一个玻璃或金属柱中，或者薄薄涂布一层于玻璃或塑料片上
或者吸附在醋酸纤维纸上。
c.流动相，起溶剂作用的液体或气体，用于协助样品平铺在固定相表面及将其从层析
床中洗脱下来。
d.运送系统，用来促使流动相通过层析床。
e.检测系统，用于检测试管中的物质。
由于不同物质固定相相互作用的强弱不同，从而使得分离目的得以实现。
要点：
层析系统中，与固定相作用强的物质受到的阻力最大，而作用弱的物质受到的阻力很小，因而不同物质在层析过程中的迁移距离和洗脱时间不同。
按照操作形式的不同，层析技术可分为纸层析、薄层层析和柱层析三类。
本节重点介绍生物化学分离中常用的几种层析方法：
一、纸层析（paperchromatography）：
纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析。
滤纸纤维与水有较强的亲和力，能吸收22%左右的水，其中6%～7%的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合。
由于滤纸纤维与有机溶剂左右的亲和力很弱，故而在层析时，以滤纸纤维及其结合的水作为固定相，以有机溶剂作为流动相。
纸层析对混合物进行分离时，发生两种作用：
第一种是溶质在结合于纤维上的水与流过滤纸的有机相进行分配（即液―液分离）；第二种是滤纸纤维对溶质的吸附及溶质溶解于流动相的不同分配比进行分配（即固―液分配）。
虽然混合物的彼此分离是这两种因素共同作用的结果。
在实际操作中，点样后的滤纸一端浸没于流动相液面之下，由于毛细管作用，有机相即流动相开始从滤纸的一端向另一端渗透扩展。
当有机相沿滤纸经点样处时，样品中的溶质就按各自的分配系数在有机相与附着于滤纸上的水相之间进行分配。
一部分溶质离开原点随着有机相移动，进入无溶质区，此时又重新进行分配；一部分溶质从有机相进入水相。
在有机相不断流动的情况下，溶质就不断地进行分配，沿着有机相流动的方向移动。
因样品中各种不同的溶质组分有不同的分配系数，移动速率也不一样，从而使样品中各组分得到分离和纯化。
可以用相对迁移率（Rf）来表示一种物质的迁移：
Rf＝组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离
＝原点至组分斑点中心的距离/原点致溶剂前沿的距离
在滤纸、溶剂、温度等各项实验条件恒定的情况下，各物质的Rf值是不变的，它不随溶剂移动距离的改变而变化。
Rf与分配系数K的关系：
Rf＝1/（1+αK）。
Α是由滤纸性质决定的一个常数。
由此可见，K值越大，溶质分配于固定相的趋势越大，而Rf值越小；反之，K值越小，则分配于流动相的趋势越大，Rf值越大。
Rf值是定性分析的重要指标。
在样品所含溶质较多或某些组分在单相纸层析中的Rf比较接近，不易明显分离时，可采用双向纸层析法。
该法是将滤纸在某一特殊的溶剂系统中按一个方向展层以后，即予以干燥，再转向90o，在另一溶剂系统中进行展层，待溶剂到达所要求的距离后，取出滤纸，干燥显色，从而获得双向层析谱。
应用这种方法，如果溶质在第一溶剂中不能完全分开，而经过第二种溶剂的层析能得以完全分开，大大的提高了分离效果。
纸层析还可以与区带电泳法结合，能获得更有效的分离方法，这种方法称为指纹谱法。
二、薄层层析（thin-layerchromatography，TLC）：
薄层层析是在玻璃板上涂布一层支持剂，待分离样品点在薄层板一端，然后让推动剂从上流动，从而使各组分得到分离的物理方法。
常用的支持剂有：
硅胶G、硅胶GF、氧化铝、纤维素、硅藻土、硅胶G硅藻土、纤维素G、DEAE-纤维素、交联葡聚糖凝胶等。
使用的支持剂种类不同，其分离原理也不尽相同，有分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析等多种。
TLC系统组成
一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
物质之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子和固体内部分子所受的吸引力不同。
在固体内部，分子之间互相作用的力是对称的，其力场互相抵消。
而处于固体表明的分子所收的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响,棉纱，就会被吸引而停留下来。
吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。
在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。
吸附层析过程就
是不断地产生平衡和不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。
薄层层析设备简单，操作简单，快速灵敏。
改变薄层厚度，既能作分析鉴定，又能做少量制备。
配合薄层扫描仪，可以同时做到定性定量分析，在生物化学、植物化学等领域是一类广泛应用的物质分离方法。
三、离子交换层析（ionexchangechromatography）：
离子交换层析是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同，经过交换平衡达到分离的目的的一种柱层析法。
该法可以同时分析多种离子化合物，具有灵敏度高，重复性、选择性好，分离速度快等优点，是当前最常用的层析法之一，常用于多种离子型生物分子的分离，包括蛋白质、氨基酸、多肽及核酸等。
离子交换层析对物质的分离通常是在一根充填有离子交换剂的玻璃交换剂的玻璃管中进行的。
离子交换剂为人工合成的多聚物，其上带有许多可电离基团，根据这些基团所带电荷的不同，可分为阴离子交换剂和阳离子交换剂。
含有预被分离的离子的溶液通过离子交换柱时，各种离子即与离子交换剂上的荷电部位竞争结合。
任何离子通过柱时的移动速率取决于与离子交换剂的亲和力、电离程度和溶液中各种竞争性离子的性质和浓度。
离子交换剂是由基质、荷电基团和反离子构成，在水中呈不溶解状态，能释放出反离子。
同时它与溶液中的其他离子或离子化合物相互结合，结合后不改变本身和被结合离子或离子化合物的理化性质。
离子交换层剂与水溶液中离子或离子化合物所进行的离子交换反应是可逆的。
假定以RA代表阳离子交换剂，在溶液中解离出来的阳离子A＋与溶液中的阳离子B＋可发生可逆的交换反应：
RA+B+?
RB+A+；该反应能以极快的速度达到平衡，平衡的移动遵循质量作用定律。
溶液中的离子与交换剂上的离子进行交换，一般来说，电性越强，越易交换。
对于阳离子树脂，在常温常压的稀溶液中，交换量随交换剂离子的电价增大而增大，如Na＋如原子价数相同，交换量则随交换离子的原子序数的增大而增大，如Li+在稀溶液中,强碱性树脂各负电性基团的离子结合力次序是：
CH3COO―弱酸性阴离子交换树脂对各负电性基团结合力的次序为：
F―两性离子如蛋白质、核苷酸、氨基酸等与离子交换剂的结合力，主要取决于它们的理化性质和特定的条件呈现的离子状态：
当pHpI时，能被阴离子交换剂吸附。
若在相同pI条件下，且pI>pH时，pI越高，碱性就越强，就越容易被阳离子交换剂吸附。
选择离子交换剂的一般原则：
1）选择阴离子抑或阳离子交换剂，决定于被分离物质所带的电荷性质。
如果被分离物质带正电荷，应选择阳离子交换剂；如带负电荷，应选择阴离子交换剂；如被分离物为两性离子，则一般应根据其在稳定pH范围内所带电荷的性质来选择交换剂的种类。
2）强型离子交换剂使用的pH范围很广，所以常用它来制备去离子水和分离一些在极端pH溶液中解离且较稳定的物质。
3）离子交换剂处于电中性时常带有一定的反离子，使用时选择何种离子交换剂，取决于交换剂对各种反离子的结合力。
为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子。
据此，强酸型和强碱型离子交换剂应分别选择H型和OH型；弱酸型和弱碱型交换剂应分别选择Na型和Cl型。
4）交换剂的基质是疏水性还是亲水性，对被分离物质有不同的作用性质，因此对被分离物质的稳定性和分离效果均有影响。
一般认为，在分离生命大分子物质时，选用亲水性基质的交换剂较为合适，它们对被分离物质的吸附和洗脱都比较温和，活性不易破坏。
主要操作要点：
1）交换剂的预处理、再生与转型
2）交换剂装柱
3）样品上柱、洗脱和收集
四、凝胶层析法（gelchromatography）：
凝胶层析法也称分子筛层析法，是指混合物随流动相经过凝胶层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。
该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高，除常用于分离纯化蛋白质、核酸、多糖、激素等物质外，还可以用于测定蛋白质的相对分子质量，以及样品的脱盐和浓缩等。
凝胶是一种不带电的具有三维空间的多空网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，像筛子，小的分子可以进入凝胶网孔，而大的分子则排阻于颗粒之外。
当含有分子大小不一的混合物样品加到用此类凝胶颗粒装填而成的层析柱上时,屏风，这些物质即随洗脱液的流动而发生移动。
大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，流程短，移动速率快，先被洗出层析柱；而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来，故流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱，从而使样品中不同大小的分子彼此获得分离。
如果两种以上不同相对分子质量的分子都能进入凝胶颗粒网孔，但由于它们被排阻和扩散的程度不同，在凝胶柱中所经过的路程和时间也不同，从而彼此也可以分离开来。
常用的凝胶类型有：
交联葡聚糖凝胶，琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶等。
凝胶层析的原理
A.小分子由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留，大分子被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过；
B.
（1）蛋白质混合物上柱;
（2）洗脱开始，小分子扩散进入凝胶颗粒内，大分子则被排阻于颗粒之外;（3）小分子被滞留，大分子向下移动,滤纸，大小分子开始分开;（4）大小分子完全分开;（5）大分子行程较短，已洗脱出层析柱，小分子尚在行进中。
五、高效液相色谱（highperformanceliquidchromatography，HPLC）：
高效液相色谱是一种多用途的层析方法，可以使用多种固定相和流动相，并可以根据特定类型分子的大小、极性、可溶性或吸收特性的不同将其分离开来。
高效液相色谱仪一般由溶剂槽、高压泵（有一元、二元、四元等多种类型）、色谱柱、进样器（手动或自动）、检测器（常见的有紫外检测器、折光检测器、荧光检测器等）、数据处理机或色谱工作站等组成。
其核心部件是耐高压的色谱柱。
HPLC柱通常由不锈钢制成，并且所有的组成元件、阀门等都是用可耐高压的材料制成。
溶剂运送系统的选择取决于：
①等度（无梯度）分离：
在整个分析过程中只使用一种溶剂（或混合溶剂）；②梯度洗脱分离：
使用一种微处理机控制的梯度程序来改变流动相的组分，该程序可通过混合适量的两种不同物质来产生所需要的梯度。
由于HPLC的高速、灵敏和多用途等优点，它成为许多生物小分子分离所选择的方法，常用的是反相分配层析法。
大分子物质（尤其是蛋白质和核酸）的分离通常需要一种“生物适合性”的系统如PharmaciaFPLC系统。
在这类层析中用钛、玻璃或氟化塑料代替不锈钢组件，并且使用较低的压力以避免其生物活性的丧失。
这类分离用离子交换层析、凝胶渗透层析或疏水层析等方法来完成。
六、气相色谱（gaschromatography，GC）：
现代的气相色谱使用长达50m的毛细管层析柱（内径为0.1~0.5mm）。
固定相通常为一种交联的硅多体，附着在毛细管内壁成一层膜。
在正常操作温度下，其性质类似于液体膜，但要结实的多。
流动相（载气）通常为氮气或氢气。
依据不同组分在载气与硅多体相之间的分配能力不同达到选择性分离的目的。
大多数生物大分子的分离受柱温的影响。
柱温有时在分析过程中维持恒定（等温――通常50~250℃），更常见的为设定一个增温的程序（如以每分钟10℃的速度从50℃升高到250℃）。
样品通过一个包含有气紧阀门的注射孔注入柱顶部。
柱中的产物可用下列方法检测出：
1）火焰离子检测法：
流出气体通过一种可使任何有机复合物离子化的火焰，然后被一
个固定
升级会员 