泰地罗新最高残留限量试行和残留检测方法标准试行.docx
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泰地罗新最高残留限量试行和残留检测方法标准试行
泰地罗新最高残留限量（试行）和残留检测方法标准（试行）
《动物性食品中兽药最高残留限量》（农业部公告第235号）无泰地罗新的每日允许摄入量（ADI）。
申报单位参照国际食品法典委员会（CAC）和欧盟的有关标准，制定了泰地罗新的ADI和在猪组织中的最高残留限量（MRLs），具体数据见表1。
表1泰地罗新的ADI及在猪组织中的MRLs信息表
活性成分
ADI
残留标示物
靶动物
靶组织
MRLs
泰地罗新
0～100μg/（kgb.w.）
泰地罗新
猪
肌肉
1200μg﹒kg-1
皮肤+脂肪
800μg﹒kg-1
肝脏
5000μg﹒kg-1
肾脏
10000μg﹒kg-1
动物性食品中泰地罗新残留检测
液相色谱-串联质谱法（试行）
1.范围
本标准规定了猪组织中泰地罗新残留检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于猪肌肉、皮肤+脂肪、肝脏、肾脏中泰地罗新残留量的检测。
2.规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：
标准的结构和编写规则。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。
3.原理
试料中的泰地罗新残留物用5%氨化乙腈的甲醇提取后，经中性氧化铝萃取柱净化，5%氨化乙腈的甲醇溶液洗脱，40℃水浴中旋转蒸发至近干，0.1%甲酸溶液∶乙腈=95∶5溶解，用液相色谱-串联质谱法检测，外标法定量。
4.试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。
4.1泰地罗新对照品：
含量98.1%。
4.2中性氧化铝萃取柱1000mg/6ml。
4.3甲醇色谱纯。
4.4甲酸色谱纯。
4.5乙腈色谱纯。
4.6异丙醇。
4.7正己烷。
4.8浓氨溶液。
4.90.1%甲酸溶液：
取甲酸0.5ml，用水稀释至500ml，混匀即得。
4.10乙腈甲醇混合溶液（70∶30；v/v）：
移取70ml乙腈和30ml甲醇，混匀即得。
4.115%氨化乙腈的甲醇溶液：
移取5ml浓氨溶液和95ml乙腈甲醇混合溶液（70∶30；v/v）中，混匀即得。
4.120.1%甲酸溶液∶乙腈（95∶5）：
即定容液，取95ml0.1%甲酸溶液和5ml乙腈，混匀即得。
4.13乙腈饱和正己烷溶液：
将乙腈和正己烷按1∶1比例混匀，吸取上层液体即得。
4.142mg/ml泰地罗新储备液：
精确称取泰地罗新对照品20mg，用乙腈溶于10ml容量瓶中，涡旋使充分溶解，混匀，采用0.1%甲酸溶液∶乙腈（95∶5）配制成浓度为2mg/ml的泰地罗新储备液。
-20℃冰箱中保存，有效期1个月。
4.1520μg/ml泰地罗新标准工作液：
准确量取100µl标准储备液于10ml容量瓶中，用0.1%甲酸溶液∶乙腈（95∶5）稀释、定容，制成20μg/ml的泰地罗新标准工作液。
现用现配。
5.仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪（质谱配电喷雾离子源ESI）。
5.2电子天平：
感量0.0001g。
5.3涡旋振荡器。
5.4匀浆机。
5.5高速离心机。
5.6梨形瓶。
5.7超声仪。
5.8旋转蒸发仪。
6.试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。
试料的制备包括：
——取均质后的供试样品，作为供试试料。
——取均质后的空白样品，作为空白试料。
——取均质后的空白样品，添加适量的标准工作液，作为空白添加试料。
6.2试料的保存
-20℃以下保存。
7.测定步骤
7.1提取
称取试料2g±0.01g于50ml塑料离心管中，加入10ml5%氨化乙腈的甲醇溶液，涡旋1min，超声15min，震荡25min，8000r/min离心10min，取上清液转移至另一离心管中，样品残渣再加入5ml5%氨化乙腈的甲醇溶液重复提取一次，合并两次上清液作为提取液。
7.2净化
中性氧化铝萃取柱用5ml乙腈活化，取提取液过柱，收集流出液（即上样液）后，再用6ml5%氨化乙腈的甲醇溶液分3次洗脱，每次2ml，收集洗脱液，合并上样液和洗脱液于梨形瓶中，加入6ml异丙醇。
在40℃水浴中旋转蒸发至近干，准确加入5ml定容液（见4.12）溶解残渣，涡旋，超声5min，再加5ml乙腈饱和正己烷，涡旋除脂，溶液转移至10ml塑料离心管中，静置，弃去正己烷层，10000r/min离心10min，取下层清液过0.22μm滤膜，作为试料溶液，供液相色谱-串联质谱测定。
7.3基质匹配标准曲线的制备
取空白试料，按7.1～7.2操作步骤，制备用于配置系列基质标准工作溶液的空白基质提取液。
精密量取标准工作液适量，用空白基质提取液稀释成系列药物浓度为100µg/kg、200µg/kg、400µg/kg、800µg/kg和1000µg/kg的基质匹配标准工作液，对应上机浓度为40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml、320ng/ml和400ng/ml。
超出线性范围的试料溶液，上样前稀释至该范围内。
以泰地罗新特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，基质匹配标准溶液浓度为横坐标（以上机浓度表示，单位为ng/ml），绘制标准曲线。
计算回归方程和相关系数，要求标准曲线的相关系数r≥0.99。
7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
色谱柱：
BEHC182.1mm×50mm，粒径1.7μm，或相当者。
流动相：
A相为0.1%甲酸溶液；B相为乙腈，梯度洗脱，洗脱条件见表1。
流速：
0.3ml/min。
柱温：
30℃。
进样量：
5µl。
表1梯度洗脱条件
时间（min）
流动相A（%）
流动相B（%）
0.2
95
5
2.5
30
70
2.7
30
70
4.2
30
70
5
95
5
7.4.2质谱条件
离子源：
电喷雾离子源。
扫描方式：
正离子扫描。
检测方式：
多反应监测。
离子源温度：
110℃。
脱溶剂温度：
400℃。
毛细管电压：
3.2kV。
脱溶剂气流速：
700L/h。
泰地罗新定性、定量离子对及对应锥孔电压、碰撞能量参考值见表2。
表2泰地罗新质谱参数
药物
定量离子对（m/z）
定性离子对（m/z）
锥孔电压（V）
碰撞能量（eV）
泰地罗新
735.4>98.0
735.4>98.0
30
35
735.4>174.2
30
40
7.4.3测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液，作单点或多点校准。
按外标法，以峰面积计算。
试料溶液和基质匹配标准溶液中泰地罗新的峰面积应在仪器检测的线性范围之内。
试料溶液的保留时间在基质匹配标准溶液保留时间的±5%之内。
试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表3的要求。
空白试料溶液、基质匹配标准溶液和空白试料添加溶液中各特征离子质量色谱图见附录A。
表3试料溶液中离子相对丰度的允许偏差范围
相对丰度（%）
允许偏差（%）
＞50
±20
＞20～50
±25
＞10～20
±30
≤10
±50
7.5空白试验
取空白试料，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
8结果计算和表述
单点校准，试料中药物残留量按下式计算：
或基质匹配标准曲线校准：
由As＝aCs＋b，求得a和b，则
试料中药物残留量按下式计算：
式中：
X——试料中泰地罗新的残留量（µg/kg）；
Cs——基质匹配标准溶液中泰地罗新的浓度（ng/ml）；
A——试料溶液中泰地罗新峰面积；
As——基质匹配标准溶液中泰地罗新的峰面积；
V——溶解最终残余物定容后溶液体积（ml）；
m——试料的质量（g）；
C——试料溶液中泰地罗新浓度（ng/ml）。
注：
计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
9检测方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
泰地罗新在猪肌肉、皮肤+脂肪、肝脏、肾脏中的检测限为50µg/kg，定量限为100µg/kg。
9.2准确度
本方法中猪肌肉、皮肤+脂肪、肝脏、肾脏分别在100µg/kg～2400µg/kg、100µg/kg～1600µg/kg、100µg/kg～10000µg/kg、100µg/kg～20000µg/kg的添加浓度范围内，泰地罗新的回收率范围为70%～110%。
9.3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤20%，批间相对标准偏差≤20%。
附录A
（资料性附录）
泰地罗新特征离子质量色谱图
图A.1猪肌肉空白试料溶液特征离子质量色谱图
图A.2猪肌肉空白试料添加泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.3猪肌肉基质匹配标准溶液泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.4猪皮肤+脂肪空白试料溶液特征离子质量色谱图
图A.5猪皮肤+脂肪空白试料添加泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.6猪皮肤+脂肪基质匹配标准溶液泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.7猪肝脏空白试料溶液特征离子质量色谱图
图A.8猪肝脏空白试料添加泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.9猪肝脏基质匹配标准溶液泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.10猪肾脏空白试料溶液特征离子质量色谱图
图A.11猪肾脏空白试料添加泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
图A.12猪肾脏基质匹配标准溶液泰地罗新特征离子质量色谱图（100µg/kg）
注：
1-泰地罗新特征离子质量色谱图（735.4＞174.2）；
2-泰地罗新特征离子质量色谱图（735.4＞98.0）。
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