生物化学实验项目.docx
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生物化学实验项目
实验项目一蛋白质等电点测定
【实验目的】
1．验证蛋白质的两性电离和等电点。
2．掌握测定酪蛋白等电点的原理和方法
【实验用品】
器材：
试管、试管架、刻度吸管（0.5ml、1ml、5ml）、吸耳球、记号笔。
试剂：
1．0.01mol/L乙酸
2．0.1mol/L乙酸
3．1mol/L乙酸
4．5g/L酪蛋白乙酸钠溶液称取纯酪蛋白0.25g，加入蒸馏水20ml及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全容易。
然后加入1.0mol/L乙酸5ml，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。
【实验原理】
蛋白质分子中既含有酸性基团（如—COOH），又含有碱性基团（如—NH2、胍基等）是两性化合物。
这些基团在不同的PH值溶液中可发生酸式电离或碱式电离。
蛋白质在水溶液中的带电情况，不仅取决于本身的结构，还取决于溶液的PH值。
调节溶液的PH值，可使蛋白质带有不同的电荷。
【实验方法】
取干净试管5支，编号后，按下表操作
试剂12345
蒸馏水1.6—3.01.53.38
0.01mol/乙酸ml———2.50.62
0.1mol/L乙酸ml—4.01.0——
1.0mol/L乙酸ml2.4————
5g/L酪蛋白
乙酸钠溶液ml1.01.01.01.01.0
溶液PH值3.24.14.75.35.3
沉淀结果
立即混合各管，静置10分钟，观察各管沉淀情况，结果用“-，+，++，+++”表示，并记录于表中。
【思考分析】
酪蛋白质的等电点是多少
实验报告
实验名称
实验时间
实验目的
实验用品
操作方法
实验结果
结果分析及思考题
教师评语
【操作要求及考核标准】
考核
内容
分值
评价标准
素质
要求
10
工作衣帽穿戴整齐--5
回答问题语言清晰流畅--5
操作
前
准备
10
复习与实验有关的理论内容--5
能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5
操作
过程
及
实验
报告
70
称取纯酪蛋白0.25g--5
加入蒸馏水20ml及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全溶解。
--10
加入1.0mol/L乙酸5ml，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。
--10
取干净试管5支，编号加入各种试剂--10
立即混合各管，静置10分钟，观察各管沉淀情况，记录于表中--10
随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案--5正确书写实验报告--5
记录实验数据、分析实验结果--10
正确回答实验指导中的问题--5
操作
后
要求
10
清理实验物品、妥善处理废弃物—5
消毒洗手—5
合计
100
学生互评结果得分（乘以0.3系数）
教师评价结果得分（乘以0.7系数）
最后综合得分
实验项目二温度、pH对酶促反应的影响
【实验目的】
通过观察不同的温度、pH条件下，唾液淀粉酶对淀粉的作用，了解温度、pH对酶促反应的影响。
【实验原理】
唾液淀粉酶可催化淀粉水解，生成分子大小不同的糊精、麦芽糖和少量葡萄糖。
由于在不同的温度、PH条件下，淀粉酶的活性不同，使淀粉水解的程度也不一样，因而遇碘后会产生不同的颜色，根据颜色的不同，可判断淀粉水解的程度，从而了解温度、PH对酶活性的影响。
淀粉淀粉酶糊精淀粉酶麦芽+葡萄糖
加碘液（呈蓝色）（呈紫色）（呈黄色，为碘本身颜色）
【实验用品】
试剂：
1、1%淀粉溶液取可溶性淀粉1g，加5mI蒸馏水调至糊状，再加蒸馏水80mI，加热使其溶解，然后加水至100mI.
2、稀碘溶液取碘2g，碘化钾4g，溶于1000mI蒸馏水中，置棕色瓶中贮存。
3、缓冲液
（1）pH3.0缓冲液：
取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液205mI，0.1mo/L柠檬酸溶液795mI，混合后即得。
（2）pH8.0缓冲液：
取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液772mI，0.1mo/L柠檬酸溶液228mI，混合后即得。
（3）pH8.0缓冲液：
取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液972mI,0.1mo/L柠檬酸溶液28mI，混合后即得。
器材：
10mm×100mm试管、试管架、蜡笔、恒温水浴、沸水浴、冰浴。
【实验方法】
稀释唾液制备：
用自来水漱口以清除口腔内的食物残渣。
再含一口蒸馏水，作咀嚼运动，2分钟后吐入小烧杯中，然后用滤纸过滤后备用。
温度对酶促反应的影响取3支试管编号，然后按下表操作。
管号pH6.8缓冲液（滴）1%淀粉溶液（滴）放入不同温度
1201037水浴
22010沸水浴
32010冰浴
以上各管放置5分钟，各加入稀释唾液5滴，仍放回原处。
10分钟后，在各管中加入稀释碘溶液1滴，观察各管颜色变化。
1.pH对酶促反应的影响取3支试管编号，按下表操作。
管号pH3.0缓冲pH6.8缓冲pH8.0缓冲1%淀粉溶稀释唾液（滴）
液（滴）液（滴）液（滴）液（滴）
120一一105
2一20—105
3一一20105
将各试管摇匀放入370C水浴中保温。
10分钟后，在各试管中加入稀碘液1滴，观察各试管颜色变化。
【注意事项】
注意不同人在不同的时间所釆集的唾液中唾液淀粉酶活性不同，而使结果有所差异，若想得到满意的结果，应事先确定稀释倍数。
【思考题】
说明温度、pH对酶促反应的影响？
实验报告
实验名称
实验时间
实验目的
实验用品
操作方法
实验结果
结果分析及思考题
教师评语
【操作要求及考核标准】
考核
内容
分值
评价标准
素质
要求
10
工作衣帽穿戴整齐--5
回答问题语言清晰流畅--5
操作
前
准备
10
复习与实验有关的理论内容--5
能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5
操作
过程
及
实验
报告
70
试剂的配制--10
稀释唾液制备,取试管编号--10
观察各试管的颜色变化并准确记录--10
随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案—10
操作步骤正确，动作熟练--5
实验结果真实，出现预期结果—5
正确书写实验报告--5
记录实验数据--5
分析实验结果--5
正确回答实验指导中的问题--5
操作
后
要求
10
清理实验物品、妥善处理废弃物—5
消毒洗手—5
合计
100
学生互评结果得分（乘以0.3系数）
教师评价结果得分（乘以0.7系数）
最后综合得分
实验项目三Vc含量测定
【实验目的】
1.学习定量测定维生素C的原理和方法；
2.掌握滴定法的基本操作过程；
3.了解并掌握青椒中维生素C的含量测定。
【实验用品】
试剂：
1、2%草酸.
2、2,6-二氯酚靛酚.
材料：
4g青椒、三角瓶.
【实验原理】
Vc是人类营养中最重要的维生素之一。
它分布广，绿色组织和水果含量更为丰富，Vc有强的还原性，碱性条件加热并有氧化剂存在时Vc易被氧化破坏。
中性和酸性条件下，Vc能将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型2,6-二氯酚靛酚，同时Vc被氧化成脱氢Vc，因此可用2,6-二氯酚靛酚测样品中的Vc含量。
Vc全部被氧化后，稍多加一点染料，使溶液呈淡粉红色，即为终点。
如无其它干扰，则消耗的染料与样品中Vc含量成正比。
【实验方法】
1.Vc的提取：
4g青椒（加5ml2%草酸，研磨成匀浆）→转入50ml容量瓶（残渣用2%草酸提取2—3次）→并入50ml容量瓶（加2%草酸35ml）→用1%草酸定容到刻度→过滤或离心→滤液（清液）备用。
2.空白滴定：
取20ml空白液（加35ml2%草酸，用1%草酸定容到50ml）用2,6-二氯酚靛酚滴定。
3.标准液滴定，取标准Vc液20ml2—3份，置三角瓶中，用2.6-二氯酚靛酚滴定。
4.样液滴定，取样液20ml各2份，置于三角瓶中，进行滴定。
【注意事项】
1.终点的判定：
2,6-二氯酚靛酚（兰）滴至样液（标准液）呈淡粉红色，并保持15—30秒不褪色，即这终点。
2.2,6-二氯酚靛酚的体积一般在1—4ml之间，Vc含量高时，可稀释或减少用量。
3.滴定要迅速，不超过2分钟
【思考题】
试述Vc的功能？
实验报告
实验名称
实验时间
实验目的
实验用品
操作方法
实验结果
结果分析及思考题
教师评语
【操作要求及考核标准】
考核
内容
分值
评价标准
素质
要求
10
工作衣帽穿戴整齐--5
回答问题语言清晰流畅--5
操作
前
准备
10
复习与实验有关的理论内容--5
能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5
操作
过程
及
实验
报告
70
Vc的提取—10
空白滴定--10
标准液滴定—10
样液滴定—10
操作步骤正确，动作熟练--5
实验结果真实，出现预期结果—5
正确书写实验报告--5
记录实验数据--5
分析实验结果--5
正确回答实验指导中的问题--5
操作
后
要求
10
清理实验物品、妥善处理废弃物—5
消毒洗手—5
合计
100
学生互评结果得分（乘以0.3系数）
教师评价结果得分（乘以0.7系数）
最后综合得分
实验项目四血糖测定
【实验目的】
了解葡萄糖氧化酶法定测定血清葡萄糖的原理、操作方法及临床意义。
【实验用品】
器材：
试管及试管架、吸量管、水浴箱、721分光光度计。
试剂：
1．0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）溶解无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g与800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠或盐酸调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。
2.酶试剂取葡萄糖氧化酶1200单位，过氧化物酶1200单位，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，加上述磷酸缓冲液至80ml左右，调节pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。
置冰箱保存，至少可稳定3个月。
3.酚试剂酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存与棕色瓶中，用时稀释）。
4.酶酚混合试剂酶试剂及酚试剂等量混合，在冰箱内可以存放一个月。
5.葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）无水葡萄糖（预先置80℃烤箱内干燥恒重，移置于干燥器内保存）称取1.802g，以12mmol/L苯甲酸溶液溶解并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至100ml刻度处，放置2小时后放可应用。
6.葡萄糖标准应用液（5mmol/L）吸取葡萄糖标准贮存液5ml，于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸内酯，并产生一分子过氧化氢。
GOD
葡萄糖+O2葡萄糖酸内酶+H2O2
在过氧化物酶作用下，过氧化氢分解，将无色的4-氨基安替比林偶联酚，氧化缩合生成红色的醌类化合物。
其颜色深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
在505nm测定吸光度，与标准管比较可计算血糖浓度。
【实验方法】
1．取3支16mm×10mm试管，按表进行操作。
葡萄糖测定操作步骤
试剂测定管标准管空白管
血清（ml）0.02——
葡萄糖标准应用液（ml）—0.02—
蒸馏水（mL）——0.02
酶酚混合试剂（mL）3.03.03.0
混匀，置于37℃水浴中，保温15分钟，用分光光度计波长505nm，以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。
2．计算
测定管吸光度
×5=血糖mmol/L
标准管吸光度
【附注】
1．正常参考范围空腹血糖为3.9～6.1mmol/L。
2．临床意义：
（1）生理性血糖增高见于饱餐后和精神紧张状态时。
（2）病理性血糖增高主要见于糖尿病和某些内分泌性疾病，如甲状腺功能亢进、肾上腺髓质肿瘤、胰岛α-细胞瘤等。
（3）生理性血糖降低多见与饥饿或剧烈运动、注射胰岛素或口服降血糖药过量。
（4）病理性血糖降低主要见于胰岛β-细胞增生或肿瘤等。
附：
尿糖定性试验
血糖通过肾小球滤过进入原尿，原尿流经肾小管时能重吸收至血液，故正常人尿液几乎不含糖累或含量甚微。
当血糖浓度升高至8.8mmol/L时，超过肾小管重吸收的肾糖阈值，则葡萄糖从尿中排出，成为糖尿。
目前实验室开展的尿糖定性试验，主要用与临床对糖尿病患者的初步诊断，或药物治疗、饮食疗法的监护指标。
常用方法有铜还原法和葡萄糖氧化酶法。
（一）铜还原法
用含铜离子、柠檬酸钠的碱性班氏试剂与标本尿液加热煮沸，尿液中的葡萄糖能使二价铜离子还原为一价铜离子，产生氧化亚铜，尿液显橙红
（二）葡萄糖氧化酶法
用葡萄糖氧化酶法测定尿糖的原理与用该法测定血糖原理相同。
先把葡萄糖氧化酶试剂吸附于滤纸上制成试纸。
做尿糖定性时，用试纸直接接触尿液标本，在与标准色板进行比较，即可检验出尿糖结果。
【注意事项】
1．给家兔注射敌白虫后，如经15min仍末出现中毒症状者，可再静注1/3量敌白虫。
2．敌百虫刺激性较大，注射时要将家兔固定好，药液不要外漏。
3．解救药物须先用注射器吸好，待中毒症状明显后立即解救。
4．实验结束后，甲、乙两兔应分别补注解磷定和阿托品。
【思考分析】
饥饿与饱食情况下血糖浓度的变化？
实验报告
实验名称
实验时间
实验目的
实验用品
操作方法
实验结果
结果分析及思考题
教师评语
【操作要求及考核标准】
考核
内容
分值
评价标准
素质
要求
10
工作衣帽穿戴整齐--5
回答问题语言清晰流畅--5
操作
前
准备
10
复习与实验有关的理论内容--5
能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5
操作
过程
及
实验
报告
70
试剂的配制--5
取3支试管分别滴入四种试剂--10
摇匀试管内的试剂，置于37℃水浴中，保温15分钟--10
用分光光度计波长505nm，以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。
--10
计算血糖浓度--10
随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案--5
正确书写实验报告--5
记录实验数据、分析实验结果--10
正确回答实验指导中的问题--5
操作
后
要求
10
清理实验物品、妥善处理废弃物—5
消毒洗手—5
合计
100
学生互评结果得分（乘以0.3系数）
教师评价结果得分（乘以0.7系数）
最后综合得分
实验项目五尿酮体定性试验（郎格（Lange）环状）
【实验目的】
了解尿酮体定性试验的原理，掌握尿酮体定性试验的临床意义。
【实验用品】
试剂:
1.冰醋酸。
2.280g/L氢氧化铵（氨水）。
3.饱和亚硝基铁氰化钠水溶液。
器材:
试管、试管架、滴吸管、2mI吸管
【实验原理】
在含有酮体的尿液中加入亚硝基铁氰化钠后，与氨接触呈紫色环，加冰醋酸少许，以防止过量肌酐呈现的假阳性。
【实验方法】
1.取尿液2mI于中试管中。
2.加入冰醋酸2滴。
3.加入饱和亚硝基铁氰化钠水溶液2滴，充分摇匀。
4.沿管壁轻轻加入280g/L氢氧化铵液（氨水）12滴使之与尿液形成界面，静置后观察结果。
【判断结果】
立即出现紫色环+++～++++
较快出现紫色环++
10分钟内逐渐出现紫色环+
10分钟内只出现淡紫色环微量
10分钟内无紫色环出现阴性
【临床意义】
正常人24小时尿中排出的酮体量很少，一般定性试验为阴性。
当脂肪大量分解时，可使血中酮体增多，引起酮血症，酮体经尿排出称为酮尿。
严重糖尿病或长期饥饥饿时可出现酮尿，尿中酮体检验为阳性。
【思考分析】
人体什么情况下出现酮尿？
实验报告
实验名称
实验时间
实验目的
实验用品
操作方法
实验结果
结果分析及思考题
教师评语
【操作要求及考核标准】
考核
内容
分值
评价标准
素质
要求
10
工作衣帽穿戴整齐--5
回答问题语言清晰流畅--5
操作
前
准备
10
复习与实验有关的理论内容--5
能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5
操作
过程
及
实验
报告
70
取尿液2mL于中试管中--10
加入冰醋酸2滴--5
加入饱和亚硝基铁氰化钠水溶液2滴，充分摇匀--10
沿管壁轻轻加入280g/L氢氧化铵液（氨水）12滴使之与尿液形成界面，静置后观察结果--10
记录并观察试管的颜色--10
随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案--5
正确书写实验报告--5
记录实验数据、分析实验结果--10
正确回答实验指导中的问题--5
操作
后
要求
10
清理实验物品、妥善处理废弃物—5
消毒洗手—5
合计
100
学生互评结果得分（乘以0.3系数）
教师评价结果得分（乘以0.7系数）
最后综合得分
实验项目六肝中酮体生成作用
【实验目的】
证明肝生成酮体的作用，熟悉酮体定性测定的原理及方法。
【实验用品】
器材:
匀浆器、试管、试管架、滴管、解剖剪刀、小鼠。
试剂:
1．9g/L氯化钠溶液
2．洛克（Locke）溶液氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1g，将以上药品混合溶于水中，溶解后加水至100ml。
3．0.5mol/L丁酸溶液取44.0g丁酸溶于0.1mol/LNaOH溶液中，并用0.1mol/LNaOH溶液稀释至1000ml。
4．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.6）准确称取Na2HPO4·2H207.74g和NaH2PO4·H2O0.897g用蒸馏水稀释至500ml，精确测定pH值。
5．150g/L三氯醋酸溶液
6．显色粉亚硝基铁氰化钠1g，无水碳酸钠30g。
硫酸铵50g，混合后研碎。
【实验原理】
利用丁酸作为底物，与肝组织匀浆（含有铜体生成酶系）保温后即有酮体生成。
酮体可与含亚硝基铁氰化钠的显色粉反应产生紫红色化合物。
而经同样处理的肌肉匀浆，则不产生酮体，因此与显色粉作用不产生显色反应。
【实验方法】
1.肝匀浆和肌匀浆的制备取小鼠一只，断头处死，迅速剖腹，取出肝和肌肉组织，剪碎，分别放入匀浆器中，加入生理盐水（按重量：
体积为1：
3），研磨成匀浆。
2.取试管4支，编号后按下表加入各种试剂。
试剂（滴）1234
洛克溶液15151515
0.5mol/L丁酸溶液30—3030
0.1mol/L磷酸盐缓冲液15151515
肝匀浆2020——
肌匀浆———20
蒸馏水—3020—
3.将上列4支试管摇匀后，放置于37℃恒温水浴中保温。
4.40～50分钟后，取出各管，各加入15%三氯醋酸20滴，摇匀混合，离心5分钟（3000转/分）。
5.分别取出上述各管离心液放于有凹白瓷反应板上，每个放入显色粉一小匙，观察所产生的颜色反应，并说明原因。
【思考分析】
肝中酮体生成的生理意义？
实验报告
实验名称
实验时间
实验目的
实验用品
操作方法
实验结果
结果分析及思考题
教师评语
【操作要求及考核标准】
考核
内容
分值
评价标准
素质
要求
10
工作衣帽穿戴整齐--5
回答问题语言清晰流畅--5
操作
前
准备
10
复习与实验有关的理论内容--5
能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5
操作
过程
及
实验
报告
70
试剂的配制--5
肝匀浆和肌匀浆的制备--10
取试管4支，编号后加入各种试剂--10
4支试管摇匀后，放置于37℃恒温水浴中保温--10
40～50分钟后，取出各管，各加入15%三氯醋酸20滴，摇匀混合，离心5分钟--5
分别取出上述各管离心液放于有凹白瓷反应板上，每个放入显色粉一小匙，观察所产生的颜色反应--5
随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案—5
正确书写实验报告--5
记录实验数据、分析实验结果--10
正确回答实验指导中的问题--5
操作
后
要求
10
清理实验物品、妥善处理废弃物—5
消毒洗手—5
合计
100
学生互评结果得分（乘以0.3系数）
教师评价结果得分（乘以0.7系数）
最后综合得分
升级会员 