实验室常用的细菌作用及其选择.docx

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实验室常用的细菌作用及其选择

第一篇:

JM1０9，DＨ5a，BL２１这些感受态有何区别

1:

DＨ5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E。

colｉDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株.

基因型：

F－，φ80dlacZΔM15，Δ（lacZＹＡ-arｇＦ）U16９,ｄeoＲ,rｅcA1，endA１,ｈsｄR１7（rk－，mk＋），phｏA,sｕｐE44，λ—，ｔｈi—1,gyrA96,rｅｌA1

２：

BL21（ＤE3）菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如ｐET系列）的基因。

T7噬菌体ＲNA聚合酶位于λ　噬菌体DE3区，该区整合于BＬ21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：

Ｆ—,omｐT,hsｄS（ｒBB-mB－），ｇal,　ｄcm（DＥ３）

3:

BL2１（DＥ3）　ｐLysＳ菌株

该菌株含有质粒pLｙsS,因此具有氯霉素抗性.PＬysＳ含有表达Ｔ7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达．该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:

F－,ompＴhｓdS（rＢB—mB－），ｇal，ｄcm（DE3，pLysＳ，Ｃamr

４:

JM1０9菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNＡ转化或用M１3pｈａｇe载体进行转染时，由于载体DNＡ产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β－半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株

基因型：

recＡ１,endＡ1,gyrＡ９6,tｈi－１,hsdR17,sｕpＥ44，relA1,Δ（lac－proAB）/F’[trａD3６，proＡＢ+，ｌacIq，lacZΔM15]

5：

TOＰ１0菌株

该菌株适用于高效的ＤＮA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型:

F—　,mcｒAΔ（mrr—hsｄ　RMS—ｍｃrＢC），φ80　，ｌacZΔM１5,△lａｃⅩ７４，　rｅcA1,ａｒaΔ1３9Δ（ara－leu）７697，　gａｌU,ｇａlK,rｐｓ,（Strr）endA1,ｎuｐＧ

6:

HＢ101菌株

该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验

基因型:

sｕpE44,hsｄS20（rＢ-mB－），recA13,ara-1４，proA２，laｃY1，gaｌK2,rpsL2０，xyl—5,mtl—１,ｌeuＢ６，ｔhi－１

第二篇:

ＪM１10或ＳCS110

大多数大肠杆菌菌株中含有Daｍ甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATＣ序列中腺嘌呤N—6位上引入甲基，后者在CCA/TGＣ序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。

　常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响．

部分限制性内切酶对甲基化的DＮＡ不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。

大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响,如XｂaI，BcｌI等。

而且甲基化只发生在特定序列，以XｂaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbａＩ位才会被甲基化.

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：

（１）选用上述酶的同功酶，如Saｕ３AI，DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响；

（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行ＤNＡ的制备,如E.coliJM110和链霉菌等,前者Ｄam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNＡ就能被上述酶切割。

E。

coliＪM110

要排除ｄam,ｄｃm甲基化的影响，需要用特定的ｄam-,ｄcｍ—的菌株,如ＪM110

如果由JＭ１10或SCＳ１１0等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化．

第三篇:

各种感受态细胞的区别用途　特征

Xl１-Blｕe菌株

基因型:

eｎdA1gyrA96（nalＲ）thｉ-1recA1　rｅlA1lacglnＶ4４F‘［Tn１0ｐroＡB+ｌacIqΔ（lａcＺ）M１5]hsｄR17（rK—ｍK+）.

特点：

具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。

用途:

分子克隆和质粒提取.

BL2１（ＤＥ3）菌株

基因型:

Ｆ–ompTgal　dｃｍlon　ｈsｄSＢ（rB—mB—）λ（DE3[ｌacIｌacUV5-T7gene1ｉnd1　ｓaｍ7ｎin５］）。

特点:

该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。

T７噬菌体ＲNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DＥ3区的ｌacUV５启动子，该区整合于BL２１的染色体上。

该菌适合于非毒性蛋白的表达。

用途:

蛋白质表达。

BL２１（DE３）plｙ菌株

基因型:

F-ompTｇaldｃmloｎhsdＳB（rB－　ｍB—）　λ（DE３）pLyｓS（cmR）。

特点：

该菌株带有pLysＳ，具有氯霉素抗性.此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基

因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。

适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。

用途:

蛋白质表达

DH5α菌株

基因型:

Ｆ－enｄA1glnV44thi－1recA１reｌＡ1gyrA96ｄeoＲnupGΦ8０dlａcZΔM15　Δ（lacZYA-aｒgF）Ｕ169,hｓdＲ1７（rK-,λ–

特点：

一种常用于质粒克隆的菌株。

其Φ8０dlacＺΔM15基因的表达产物与pＵC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。

rｅｃA1和endA１的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒ＤNA的提取。

用途:

分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

ＪＭ109菌株

基因型：

ｅnｄＡ1glｎV44thi—１　relA1gｙrA9６recA1mcrB+Δ（ｌaｃ-pｒｏAe14—［F‘traD３6ｐroＡB+lacIｑlaｃＺΔＭ１5］ｈsｄR１7（rK-mＫ+）。

特点:

部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于M1３克隆序列测定和蓝白斑筛选.

用途：

分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

第四篇:

Ｅ．cｏｌiＥleｃtro－Ceｌlｓ

E。

coｌiElecｔro—ＣellJM10９

制品名TａＫaRaCｏdｅ包装量价格（人民币元）

Ｅ．colｉ　Elｅctｒo－Ｃｅll　JM1０９D９02２　１　Set（５0μｌ×10支）300

■Genotype

Ｅ．cｏｌiJM１09

reｃＡ1，　ｅnｄA１,gyｒA９6，　tｈi－1，hsdＲ17,supE44,reｌＡ1,

Δ（lac-prｏA／Ｆ＇[trａＤ３6,pｒoAB+，lａｃIq,ｌaｃＺΔＭ15]　

■细胞浓度

1~２×１０１0Bacｔeｒｉa/ml　

■保存

-80℃

■制品说明　

用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌,从而导致DNＡ转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。

电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一,比Ca２+处理的感受态细胞的转化效率高,在转化少量ＤＮA时，特别能发挥其特有的威力.　

TａＫａＲａ使用独自开发的菌体培养法,制作出了效果极佳的E。

cｏliEｌｅcｔro—Ceｌl　JＭ１09.

■细胞种类　

α—互补性选择宿主E.cｏｌiJM109

E。

coli　JM１09在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用Ｍ13ｐhage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacＺα多肽和JM109　Ｆ’编码的lacZΔM１5的结合，显示β—半乳糖苷酶活性（α—互补性）。

利用这一特性,可以很容易鉴别重组体菌株.因为具有Ｆ'质粒,除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外,也可作为M13载体DNＡ的宿主，调制单链DＮＡ。

■质量标准

使用10pg的质粒DNA进行转化时:

50μlE．colｉ　JＭ109Eｌeｃｔro—Cell/１0pg　pＵC１9　plａsmid转化时产生的菌落数

〉１×1０9ｔransformａntｓ/1μgpUＣ1９ｐlaｓmid

F'质粒的稳定性检测

对E。

coliJM109使用ｐＵC19DＮA进行电穿孔法转化后,在含有100μg/ｍｌ的Ampｉｃiｌｌｉn、0.2mM的ＩPＴG,　40μｇ／ｍl的X-Ｇal的Ｌ-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。

5０　μｌ的Ｅ.colｉJM109　Eleｃｔro-Cｅll在含有10０μg/ml的Ampｉcｉllin　L-琼脂平板培养基上不产生菌落.

--——-－－——---———-———-—-———---—-—-

BL２1（ＤE3）pLｙsS细菌菌株

BL21（DＥ3）pＬｙsＳ细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。

BＬ2１（DE3）pLysS对λDE３

（1）是溶源性的.λDＥ3含有T7噬菌体基因I,编码的T７RNA聚合酶受ｌａc　UV5启动子的控制。

BL２1（ＤＥ３）ｐＬyｓS含有pＬysＳ质粒，他携带编码Ｔ7溶菌酶基因。

在Ｔ７启动子控制下，T７溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由ＩPTＧ诱导的表达水平。

包装：

P9811500μl

http:

／/www。

promｅgａ.cｏm/tbs/tb095／ｔｂ0９5。

pdf

第五篇：

ＪM109，ＤH５a，BL21感受态有何区别

1:

ＤH5a菌株

DH5ａ是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coliDH５a在使用ｐUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补．可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:

Ｆ－,φ80dlacZΔM1５,Δ（lacＺYA—aｒgF）U１69,deoR，rｅcA1，ｅndA1,ｈｓdR17（ｒk—,mｋ+），ｐhｏA,suｐE44，λ-,tｈi-１,ｇｙrA96,reｌA1

2:

ＢＬ21（DE3）菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因.T7噬菌体RNＡ聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白．

基因型：

Ｆ—，ｏｍpT，　hｓdS（ｒBＢ-mB－）,gal,ｄcm（ＤＥ3）

3:

BＬ2１（ＤE3）pＬyｓS菌株

该菌株含有质粒pＬysS，因此具有氯霉素抗性。

PＬysＳ含有表达Ｔ７溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：

F—，ｏmpThsdS（rBB-mB－）,gaｌ,ｄcm（ＤE３，pLysS,Ｃamr

4:

JＭ1０9菌株

该菌株在使用ｐUC系列质粒载体进行DNA转化或用M1３ｐｈaｇe载体进行转染时,由于载体DＮＡ产生的LａcZa多肽和JM09编码的LaｃZΔM１５进行α-互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株

基因型:

rｅｃＡ1,ｅnｄA１,gｙrA９6,thi-1,hsdR１7,sｕpE４4,relA１,Δ（ｌａc-ｐroAB）/Ｆ’［trａD36,proＡＢ+,lａcIq,laｃＺΔM15］

５：

TＯP1０菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传.

基因型:

F-　，mcｒＡΔ（ｍrｒ-hsｄRＭS-mcrＢC），φ80,ｌａｃZΔM15,△lａcⅩ74,reｃA1,arａΔ１39Δ（arａ—ｌeｕ）７697,gaｌＵ,galK　,rｐs,（Stｒr）eｎdA１,nuｐG

６：

ＨB1０1菌株

该菌株遗传性能稳定,使用方便，适用于各种基因重组实验

基因型:

supE44，ｈsdS20（ｒB—mB-）,recA13,ａｒａ－1４，prｏA2,laｃY１,ｇalＫ２,rｐｓＬ2０，ｘｙl-5，mｔｌ—１,ｌeuB6,ｔhｉ-1

M1１0或　SCS110

大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Ｄcｍ甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤Ｎ—6位上引入甲基,后者在CＣA/TＧC序列的第一个胞嘧啶　C-５位置上引入甲基。

常用的菌株都会产生dａm,dcm,从而受到甲基化的影响。

部分限制性内切酶对甲基化的DＮA不能切割,如FbaI和MｂoI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。

大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响,如ＸbａI,BclＩ等。

而且甲基化只发生在特定序列，以XｂaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaＩ位才会被甲基化。

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：

（1）选用上述酶的同功酶，如Saｕ3AＩ,DNＡ识别切割位点与ＭｂｏI相同;但不受甲基化影响；

（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E.colｉJM11０和链霉菌等,前者Dam和Dcｍ甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。

E。

colｉ　JM１1０

要排除dａｍ,dcｍ甲基化的影响，需要用特定的dam—,ｄcｍ－的菌株，如JM11０

如果由ＪＭ110或ＳCS1１0等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化

=＝======＝===＝========＝=======

实验室的一般大肠杆菌拥有４28８条基因,每条基因的长度约为９50bp,基因间的平均间隔为１18ｂp（基因Ⅷ）。

E.cｏli基因组中还包含有许多插入序列,如λ—噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。

利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型　（Phenotype）,把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype）.具有不同基因型的菌株表现出不同的特性.

分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Deｍerｅc等１966年提出的命名原则,采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态，除非在基因型上另外注明。

大肠杆菌基因型的表示方法（Demerｅc,　et，al．196６）：

一、一般规则：

１、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成３个小写斜体字母来表示。

例如:

DNＡAdｅｎine　Metｈylａｓe→dam。

2、不同的基因座,其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同，其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。

例如:

Recomｂiｎaｔｉon→recA、recB、ｒecＣ。

3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。

如ｓupＥ4４（sup基因座Ｅ的44位突变）。

如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变,则用连字符“—”代替大写字母，如trp-31。

4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。

这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。

其基因符号应与基因座的表示符号明显区别,符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内;质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。

５、对于携带附加体的菌株的完整基因型描述应包括附加体的状态（游离或整合）。

以F因子为例，F-：

F因子缺失；Ｆ＋:

自主性F因子,不携带任何遗传可识别染色体片段；F’:

携带有遗传可识别细菌染色体片段的自主性F因子；Hfr:

整合到染色体上的F因子（　ｈｉghｆｒequencyof　ｒecomｂｉnaｔｉｏn）。

当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时,用（）“或"/“等以区别。

例如：

/F’[traD36、ｐroAB、laｃ　I　q、laｃZ。

　Ｍ15］

6、某个基因或某个领域缺失时,在其基因型前面加上“"表示。

例如：

ｌａc—proAB基因缺失时它的基因型表示为（laｃ-pｒoAＢ）。

７、由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化，有时也用其表现型代替基因型进行表示。

例如：

某些抗药性的获得或丧失,用如下方式表示:

Ｓtｒeptomycin抗性→Stｒ　+或Strr，Ampｉciｌlｉｎ敏感性→　Aｍp—。

（第一个字母要大写,“＋”或“ｒ”表示有抗性,“—＂表示无抗性或敏感）．

８、根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。

例如:

TH２菌株上有一种基因型表示如下：

hsｄS2０（ｒB—、mＢ－）,其中Ｓ20代表特异性识别蛋白发生变异,（）中的rＢ-、mB—表示由于Ｓ20的变异而导致　Ｂ株来源的hsdR和hsdM的功能缺失．

9、蛋白质的名称与对应的基因或等位基因相同，但不用斜体,且首字母大写,如,ＵｖｒA、UvrＢ。

三、主要的基因型说明

1、基因重组相关的基因型

reｃA（Recomｂinatioｎ）

功能:

recA基因表达ATP依赖型ＤNA重组酶，它在λ—噬菌体与基因组DNA的溶原重组时起作用,同时具有对ＤNＡ放射性损伤的修复功能.由reｃA基因的变异所产生的基因型使同源或异源DＮA的重组不能进行,保持插入ＤNA的稳定性,对DNＡ的转化有利。

一个菌株的基因型如果是　recA，则说明此菌株的表现型是重组缺陷的。

ｒeｃB（Recomｂｉnatｉon）

功能：

ｒecB基因表达ＡＴＰ依赖型DＮase和核酸外切酶V的一个亚基，对rｅcA的DＮA重组酶起辅助和促进作用。

ＤNaｓe催化双链DNA的解旋和解链，核酸外切酶V催化单链ＤNA的裂解,在DNA的重组和损伤修复中发挥重要作用。

recB基因的变异导致其DＮＡ重组和修复功能丧失，保证了外源ＤＮA的稳定，有利于DＮA转化。

recC（Recｏmｂinatiｏn）

功能：

recC基因表达四种酶,即核酸外切酶Ｖ,ATP依赖型的核酸内切酶,解旋酶及AＴP酶，它们和recA,　ｒeｃＢ所表达的酶相互协调作用,在DNA的重组及放射性损伤的修复中发挥作用.ｒecＣ基因的变异导致DNＡ重组功能缺失，保证外源DNA的稳定性.

２、甲基化相关的基因型

ｄａm（DNＡadｅｎｉｎｅmethyｌａse）

功能：

dam基因表达DNA腺嘌呤甲基化酶,它能催化特异序列GATＣ中A的甲基化,保证DNA免受限制性核酸内切酶ＭbｏI的切断，同时在ＤNＡ复制时也起一定的辅助作用.ｄam基因的变异导致腺嘌呤（A）甲基化酶活性的缺失，使腺嘌呤（A）不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。

dcm（DNAcytosineｍetｈylase）

功能:

dcｍ基因表达DNA胞嘧啶甲基化酶，它能特异性识别DNＡ双链上的CCWGG序列，并使第二个Ｃ甲基化，即CmCWGG,避免　DＮA受到相关限制酶的切断。

dｃm基因的导致胞嘧啶甲基化酶活性缺失,使外源DNA上的C不被甲基化，易于获得非甲基化质粒。

mcｒA（Moｄiｆied　cytoｓinerｅstrｉctioｎ　proteiｎa）

功能:

mcrＡ基因表达大肠杆菌防御体系中起重要作用的mcrA酶,这种酶能特异性地作用于外来ＤNA上的被甲基化的胞嘧啶序列,即C5ｍＣGＧ特异序列,使之分解,对大肠杆菌本身起保护作用。

ｍcrＡ基因的变异，导致上述功能缺失,对外来DNＡ中被甲基化的胞嘧啶特异序（C5ｍCGG）失去作用,有利于限制酶及甲基化酶的克隆体的稳定。

mｃrB,C（Ｍeｔhyｌcｙtｏsine—sｐｅｃｉfｉcreｓtrｉction）

功能:

mcｒB，C基因表达两种特异性蛋白,即mcｒB蛋白和mｃrC蛋白,它们在大肠杆菌的防御系统中起重要作用。

一般情况下，只有这两种蛋白同时存在时才表现出活性,　mｃrC具有识别和调节功能，它能特异性的结合到外源　DNＡ上被甲基化的胞嘧啶（C）的特异序列G５mＣ上,然后由mcrB蛋白切断（mｃrB蛋白是特异性切断外来　DNA中G5mC序列的限制性核酸内切酶）,防御外来DNA的侵入。

mcrB，C基因的变异，使上述的对外来　DＮA的防御作用缺失，对质粒的转化有利.

mrr（Metｈylatioｎrｅquirinｇrestrｉｃtion）

功能:

mrr基因是大肠杆菌细胞防御系统中重要的基因之一,它能严格限制被甲基化的外源DＮA的介入。

另外，它对限制酶AcｃⅠ,ＣviRⅠ，Hiｎf　ＩⅠ（HｈaⅡ）,Nｌａ　Ⅱ,PstⅠ以及N6－腺嘌呤甲基化酶和Ｃ5－胞嘧啶甲基化酶活性有明显的抑制作用.mrr欠损株（基因型）可用于含有N６—mA和C5—mC的DNA的转化。

另外，含有此基因型的菌株也可用于限制酶和甲基化酶的克隆体。

hsdM　（Hostspeciｆｉcｉtivｅdｅfectｉve）

Mappｏsｉtion:

99miｎ

功能:

hsdM基因所表达的DNＡ甲基化酶是Ｉ型限制酶复合体（具有对DＮA切断和修补的双重功能）的一部分,它能使DNA双链上的AA　（双腺嘌呤）甲基化,保护宿主DNA不被分解.hsｄM的变异使细胞内的DNA不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。

３、点突变相关的基因型

mｕtS（Mｕtatoｒ）

功能:

mutS基因表达的蛋白具有识别DＮA上错配序列的功能，并能修复其错配序列（GC→AT），防止基因突变。

mutS基因的变异导致DNA的错配序列不能得到修复,容易发生基因突变,这对于利用点突变进行基因改造是有利的。

ｍutＴ（Mutatｏr）

功能：

野生大肠杆菌在进行ＤＮA复制时,细胞中的8—OＸO－dGTＰ插入模板DNＡ中的DA位点的效率几乎与插入DC位点的效率相同,导致A-T转换成G—Ｃ,使ＤNA产生变异。

而mutT蛋白就是特异性地降解8-OXＯ—dGＴP成为单磷酸盐（8—OXO—dGMＰ）,这种单磷酸盐状态的G（鸟嘌呤）　不能作为底物进行　DＮＡ合成,从而防止了上述的基因突变。

mutT基因的变异使细胞中8-OXO-ｄGTP浓度增高,Ａ→C的突变几率增大，有利于利用点突变进行基因改造。

duｔ（dUTPasｅ）

功能:

dｕt基因表达脱氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶（dＵＴPasｅ），它能水解dUTＰ成为ｄUMP,使细胞体内dUTP的浓度维持在较低的水平,尿嘧啶（U）就不易掺入到DＮA中，避免了基因发生A→U的突变。

dut基因发生突变使dUTＰaｓe活性缺失，导致dUTＰ浓度升高,碱基U（尿嘧啶）极易掺入到DＮA中，使其发生A→U的基因突变,有利于利用点突变进行基因改造。

ｕnｇ　（UracilDＮAgｌｙcosyｌaｓe）

功能:

ung基因表达尿嘧啶—Ｎ-糖苷酶,这种酶能特异性识别DNＡ单链或双链上发生突变的尿嘧啶残基，并从ＤＮA上水解去除尿嘧啶残基,防止　DＮA发生突变.unｇ基因的变异导致上述功能缺失，有利用点突变。

uvｒB（Ｕltraｖiolet）

功能:

uvrＢ基因表达核酸外切酶中的b亚基，这种核酸外切酶具有DNA的切补功能,对紫外线损伤的DNＡ有修补作用。

uvｒB基因的变异使细胞中核酸外切酶切除变异碱基的活性缺失,有利于点突变.

4、核酸内切酶相关的基因型

ｈsｄR（Ｈost　specificity　ｄefeｃtiｖｅ）

功能:

hｓdＲ基因表达I型限制酶EcoK（K1２株）　或EcoB　（Ｂ株）,在大肠杆菌细胞中起到一种”抗体“的作用,对外来的各种DNＡ有严格的限制。

ＨsdR基因的变异导致菌株细胞内的I型限制酶　EｃoK或　EcoＢ活性缺失,这对于外来基因的导入及质粒转化是有利的。

ｈsdＳ（Hosｔ　specificitiｖe　ｄefｅctive）

功能:

hｓdS所表达的特异性蛋白是I型