最新高效液相色谱图从这十种奇葩峰开始复习过程.docx

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最新高效液相色谱图从这十种奇葩峰开始复习过程

高效液相色谱图从这十种“奇葩峰”开始......

2016-01-18 实验与分析

异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题，通常是指色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况，这些峰严重影响色谱分析的结果。

色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰,轻微的拖尾是正常的,这是由分离系统所决定的。

本帖今天针对十种奇葩峰形进行分析。

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无规律的基线噪音

可能原因：

1、漏液：

检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

（如有必要，更换密封。

检查流通池是否漏液。

）

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成，先检查流动相。

3、检测器/记录仪电子元件的问题：

（断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

）

4、气泡（系统内或检测器内）：

（a、用强极性溶液清洗系统b、清洗检测器。

）

5、流通池污染，即使是极少的污染物也会产生噪音。

（a、用甲醇等极性溶剂清洗流通池b、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池）

6、检测器灯能量不足，（更换灯）。

7、色谱柱填料流失或阻塞。

（a、更换色谱柱）

8、流动相混合不均匀或混合器工作不正常。

（a、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置。

）

有规律的基线噪音

可能原因：

1、在流动相、检测器或泵中有空气：

（a、流动相脱气。

冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

）

2、2、漏液：

（a、见第三部分。

检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要，更换泵密封。

）

3、3、流动相混合不完全：

（a、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂）

4、4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）：

（a、减少差异或加上热交换器）

5、5、在同一条线上有其他电子设备：

（a、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

）

6、

7、

8、

基线漂移

可能原因：

1、柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）

2、流动相不均匀。

流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

（a、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

）

3、流通池被污染或有气体：

（a、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要，可以用1N的硝酸。

）

4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成：

（a、检查流动相的组成。

使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

）

5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

鬼峰——即使不进样也会出现的峰

双峰或分叉峰

峰展宽

拖尾峰

前伸峰

负峰

宽峰

保留时间的异常现象分析

（一）保留时间变化

可能的原因:

1、流速变化：

（a、重新设定流速）。

2、泵中有气泡：

（a、从泵中除去气泡）。

3、流动相选择不恰当：

（a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相）。

4、色谱柱没有平衡（a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱；b、新安装的柱没有达到稳定状态）。

（二）保留时间缩短

可能的原因:

1.流速增加:

检查泵,重新设定流速；

2.样品超载:

降低样品量；

3.键合相流失:

流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向；

4.流动相组成变化：

防止流动相蒸发或沉淀；

5.温度增加:

柱恒温。

（三）保留时间延长

可能的原因:

1.流速下降：

管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡；

2.硅胶柱上活性点变化:

用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱；

3.键合相流失:

流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向；

4.流动相组成变化:

防止流动相蒸发或沉淀；

5.温度降低:

柱恒温。