临床医学检验考试辅导《微生物检验》病原性球菌及检验讲义.docx

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临床医学检验考试辅导《微生物检验》病原性球菌及检验讲义

病原性球菌及检验

●考点

　　葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属

生物学性状

微生物学检查法

临床意义（致病性、所致疾病）

　　【内容讲解】

　　普及共性，单记个性

　　生物学性状

形态与结构：

革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。

培养特性：

对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。

生化反应：

特殊生化。

抗原：

分类：

　　致病性

致病物质

所致疾病

　　微生物学检查：

针对生物学性状和致病性。

　　一、葡萄球菌属

　　一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。

（一）生物学特性

　　1.形态与结构

　　G+，球形，0.5～1.5μm，呈葡萄串状成堆排列（在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列），无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。

　　2.培养特性

　　需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。

　　普皿：

圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。

可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。

　　血琼脂平板：

几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。

　　液体培养基：

生长迅速呈均匀混浊状。

　　3.生化反应

　　触酶试验（+）；多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气；分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶（多数致病性葡萄球菌）。

　　4.抗原

（1）蛋白抗原：

为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。

存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。

（2）多糖抗原：

是半抗原，具有型特异性，有三种：

①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。

　　5.分类

（1）《伯杰系统细菌学手册》

（2）古典分类法

　　6.抵抗力

　　对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐。

　　是抵抗力最强的无芽胞细菌。

（二）临床意义

　　葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。

　　金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。

（1）金黄色葡萄球菌

　　致病物质：

　　血浆凝固酶；葡萄球菌溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮溶解毒素；毒性休克综合征毒素。

（2）表皮葡萄球菌

　　存在于皮肤的正常栖居菌，为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

　　（3）腐生葡萄球菌

　　导致尿路感染的常见病原菌之一。

　　（三）微生物学检查

　　标本采集（不同疾病采集不同标本）：

　　脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。

　　鉴定试验：

　　报告：

检出“XXX葡萄球菌”

　　耐药性检测

　　检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。

　　（四）治疗原则

　　由于耐药菌株日益增多，治疗葡萄球菌感染时，应根据体外药敏试验选择抗生素。

如果是危、急、重症感染，应首先根据经验选药，如万古霉素等，待体外敏感试验结果回报后，再调整用药，针对治疗。

　　二、链球菌属

（一）生物学特性

　　1.形态与染色

　　G+，圆形，0.8～1.0μm，呈链状排列（在液体培养基中易成长链。

在脓汁标本中为短链，成双或单个散在）。

　　无鞭毛、无芽胞，某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。

　　2.培养特性

　　大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。

营养要求较高。

最适温度为35～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%CO2环境下生长更好。

　　液体培养基：

溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。

上层液体澄清，可有菌膜。

不溶血菌株则均匀浑浊生长。

　　血琼脂平板：

灰白色、圆形、凸起、细小菌落，不同溶血环。

　　3.生化反应

　　触酶试验（-），能分解葡萄糖产酸不产气，对其他糖类的分解因不同菌株而异。

　　4.分类

（1）根据溶血能力分类：

甲型（α）溶血性链球菌：

本菌为条件致病菌。

乙型（β）溶血性链球菌：

该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。

丙型（γ）链球菌：

一般无致病性。

（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类，即常用Lancefield血清分型法：

　　将链球菌分为A、B、C、D……T等18个群（其中I和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。

　　5.对理化因素的抵抗力

　　不强，对各种常用消毒剂敏感，60℃加热30分钟即可杀灭。

（二）临床意义

　　A群溶血性链球菌

致病物质

所致疾病

链球菌溶血素

急性化脓性感染（丹毒、痈、蜂窝组织炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、产褥热）

透明质酸酶

链激酶，链道酶

致热外毒素

猩红热

M蛋白

变态反应性疾病（风湿热，肾小球肾炎）

　　草绿色链球菌：

属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。

　　B群链球菌：

是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。

　　D群链球菌：

引起呼吸道和泌尿道感染。

　　治疗原则：

　　A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。

　　B群链球菌常常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。

　　（三）微生物学检查

　　标本采集（不同疾病采集不同标本）：

　　可采集脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。

　　鉴定试验：

　　三、肺炎链球菌

（一）生物学特性

　　1.形态与染色

　　G+，球菌，呈矛尖状、钝面成双排列，有时呈短链状，0.5～1.25μm，有荚膜（在人或动物体内易形成），无鞭毛，无芽胞。

　　2.培养特性

　　需氧或兼性厌氧；最适的温度为35～37℃；最适的pH7.6～8.0；营养要求较高。

　　血琼脂平板：

形成灰色扁平、中心凹陷（因菌落发酵所致）直径为0.5～1.0mm的菌落，周围有草绿色溶血圈。

　　液体培养基：

均匀混浊。

但培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。

　　3.生化反应

　　多数菌株分解菊糖、胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性。

（肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别）。

（二）临床意义

　　致病物质：

荚膜。

　　所致疾病：

大叶性肺炎、支气管炎。

可继发胸膜炎、脓胸，也可

　　引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血症。

　　（三）微生物学检查

　　1.标本采集

　　2.试验方法及鉴定

（1）直接涂片检查：

经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。

（2）分离培养：

　　血液、脑脊液需增菌培养，呈均匀混浊，而且有绿色荧光。

脓汁或脑脊液沉渣接种血琼脂，置5%～10%C02环境中培养。

　　（3）鉴定试验

　　1）胆汁溶解试验（+）

　　2）菊糖发酵试验（+）

　　3）0ptochin敏感试验（+）

　　4）荚膜肿胀试验（+）

　　5）动物试验：

小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。

　　6）快速乳胶凝集试验（+）

　　四、肠球菌属

　　肠球菌属是肠道的正常栖居菌。

（一）生物学形状

　　1.形态和结构

　　G+，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。

　　2.培养特性

　　营养要求高，需氧及兼性厌氧。

在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长（此点可与链球菌鉴别）。

　　血平板上主要表现为γ-和α-溶血。

　　3.生化反应

　　触酶（-），多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）。

　　与同科链球菌的显著区别：

　　能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10℃～45℃环境下生长；

　　对许多抗菌药物表现为固有耐药（如复方增效磺胺、头孢菌素、克林霉素和低浓度的氨基糖苷类）。

（二）临床意义

　　肠球菌是G+菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌。

　　最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。

　　临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。

　　肠球菌致病基因：

主要有细胞溶解素激活基因、明胶酶基因、表面蛋白基因、胶原蛋白黏附素基因、聚集物质基因和粪肠球菌心内膜炎基因等。

　　（三）微生物学检验

　　采集标本：

如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等。

　　方法：

以直接涂片进行初步检查。

分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验，可鉴定到属。

　　耐药性检测：

一般要测试对β-内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨苄西林）、万古霉素和氨基糖苷类（如庆大霉素）的敏感性。

同时也应对β-内酰胺酶进行测试。

　　（四）结果评价

　　药敏结果中必须注明β-内酰胺类（如青霉素G、氨苄西林）的敏感性。

庆大霉素的耐药水平（是否为高水平耐药）万古霉素的敏感性以及β-内酰胺酶测试结果。

　　（五）治疗原则

　　一般采用β-内酰胺类和氨基糖苷类联合治疗，氧氟沙星与氨苄西林有协同作用。

必要时还要改用万古霉素或替考拉宁。

　　五、奈瑟菌属

　　G-，双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。

　　专性需氧，氧化酶阳性。

　　本属主要有9个种。

其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。

　　脑膜炎奈瑟菌

　　简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。

　　1.生物学特性

（1）形态与染色：

　　G-，菌体呈肾形，坦面相对，成对排列，0.6～1.5μm，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。

（2）培养特性：

　　营养要求高，属苛养菌。

最适温度为35～37℃，最适pH为7.4～7.6。

　　（3）生化反应：

　　绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别）；

　　不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖，硝酸盐还原试验阴性不分解尿素、不产生H2S和靛基质；

　　触酶试验阳性，氧化酶试验阳性。

　　（4）抗原及分型：

　　主要有四种抗原：

荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。

　　根据群特异性荚膜多糖抗原不同，将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。

　　目前，对人致病的主要是A群，偶见B群、C群及1916群引起散发病例。

　　2.临床意义

　　致病物质：

菌毛，荚膜，内毒素。

　　所致疾病：

脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。

主要表现发热，皮肤瘀斑，脑膜刺激症状。

存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。

　　3.微生物学检验

（1）标本采集：

血液；瘀斑渗出液；脑脊液；鼻咽分泌物。

　　注：

因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。

（2）检验方法及鉴定：

　　1）直接涂片检查：

取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色。

若发现中性粒细胞内（或胞外）革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初报。

　　2）分离培养：

将标本增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%～10%C02环境中，35℃培养18～24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1～2mm的小菌落。

　　3）鉴定：

　　①细菌染色形态：

G-，菌体呈肾形，坦面相对，成对排列。

　　②氧化酶试验（+）

　　③触酶试验（+）

　　④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气

　　⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验

　　4.治疗原则：

　　青霉素G为首选，三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。

青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。

　　淋病奈瑟菌

　　简称淋球菌，是淋病的病原体，人类是其唯一的天然宿主和传染源。

　　1.生物学特性

（1）形态与染色：

　　G-，球形或肾形，成对排列，0.6～0.8μm。

在脓汁标本中，通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。

从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，无芽胞和鞭毛。

（2）培养特性：

　　营养要求较高，国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。

最适pH为7.5，最适温度为35～37℃。

初次分离时，须置5%～10%CO2条件下才能生长发育。

　　菌落：

表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.5～1.0mm的圆形菌落。

　　（3）生化反应：

　　对糖类生化活性最低，本菌可发酵葡萄糖、产酸，但不酵解麦芽糖（常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别）。

　　氧化酶和触酶试验均阳性。

　　（4）主要抗原：

　　菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。

　　（5）抵抗力：

对外界抵抗力极低。

　　2.临床意义：

　　淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。

如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。

　　3.微生物检验

（1）标本采集：

脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，眼结膜分泌物，血液。

（2）检验方法及鉴定

　　1）直接涂片检查：

收集标本后立即涂片、革兰染色，镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌，可初诊。

　　2）分离培养：

细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。

　　及时接种含有两种以上抗生素（万古霉素和多黏菌素等）的营养培养基上。

　　3）鉴定：

　　①生化反应：

氧化酶阳性，仅分解葡萄糖产酸；不发酵麦芽糖与蔗糖，30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。

　　②免疫学方法：

荧光抗体染色法、协同凝集试验。

　　③核酸探针杂交法。

　　4.治疗原则

　　对青霉素和四环素耐药的淋病奈瑟菌越来越多，目前一线用药一般为三代头孢菌素，氟喹诺酮类、大观霉素可作为替代药物。

对氟喹诺酮类、大观霉素的耐药也有报道。

　　六、卡他布兰汉菌

G-，双球菌，约0.6～1.0μm，无芽胞，无鞭毛。

营养要求不高，在普通培养基上18～20℃即可生长，借此可与脑膜炎奈瑟菌鉴别。

需氧，菌落光滑，直径约1～3mm，不透明，灰白色，菌落易从培养基上刮下。

氧化酶和触酶阳性，产DNA酶，大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐，借此可与奈瑟菌属相鉴别。

可致中耳炎、鼻窦炎、肺炎。

　　【例题】SPA是

　　A.肠杆菌科的细菌的抗原

　　B.葡萄球菌细胞壁的蛋白成分

　　C.沙门菌的表面抗原

　　D.核蛋白抗原

　　E.链球菌属表面抗原

[答疑编号502389130201]

【正确答案】B

　　【例题】鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌可用

　　A.外斐试验

　　B.肥达试验

　　C.乳糖发酵试验

　　D.菊糖分解试验

　　E.血浆凝固酶试验

[答疑编号502389130202]

【正确答案】D

　　【例题】B群链球菌不引起下列哪种疾病

　　A.败血症

　　B.肺炎

　　C.脑膜炎

　　D.咽喉炎

　　E.风湿热

[答疑编号502389130203]

【正确答案】E

　　【例题】引起剥脱性皮炎的细菌是

　　A.肺炎球菌

　　B.链球菌

　　C.金黄色葡萄球菌

　　D.脑膜炎奈瑟菌

　　E.肠球菌

[答疑编号502389130204]

【正确答案】C

　　【例题】淋病奈瑟菌与脑膜炎奈瑟菌鉴别用

　　A.葡萄糖发酵试验

　　B.麦芽糖发酵试验

　　C.氧化酶试验

　　D.触酶试验

　　E.革兰染色

[答疑编号502389130205]

【正确答案】B

　　【例题】一位老年患者因外伤住院治疗，插导尿管一周后出现尿路感染。

取尿液检查，革兰染色见阳性球菌，有的呈短链排列，分离培养营养要求较高，血培养生长较好，有甲型溶血；触酶阴性，药敏试验对第三代头孢菌素耐药，在高盐（6.5%NaCl）、高碱（Ph9.6）、高胆汁（40%）培养基上生长。

此菌为

　　A.大肠埃希菌

　　B.草绿色链球菌

　　C.表皮葡萄球菌

　　D.肠球菌

　　E.肺炎链球菌

[答疑编号502389130206]

【正确答案】D

　　【例题】初步鉴定B群链球菌的试验为

　　A.马尿酸钠水解试验

　　B.CAMP试验

　　C.杆菌肽敏感试验

　　D.胆汁七叶苷试验

　　E.Optochin敏感试验

[答疑编号502389130207]

【正确答案】AB

　　【例题】区分葡萄球菌属和链球菌属的试验的是

　　A.VP试验

　　B.吲哚试验

　　C.氯化钾试验

　　D.硝酸盐还原试验

　　E.触酶试验

[答疑编号502389130208]

【正确答案】E

　　【例题】关于肺炎链球菌，叙述不正确的是

　　A.革兰染色阴性

　　B.革兰染色阳性

　　C.荚膜肿胀试验可作为快速诊断

　　D.主要引起大叶性肺炎

　　E.可引起菌血症

[答疑编号502389130209]

【正确答案】A

　　【例题】关于脑膜炎奈瑟菌，叙述不正确的是

　　A.镜下呈肾形或豆形成双排列、坦面相对的革兰阴性球菌，具有荚膜

　　B.本菌经空气传播，定植于人的脑皮质部位

　　C.本菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌

　　D.人类是脑膜炎奈瑟菌的唯一宿主

　　E.本菌对外界环境的抵抗力弱，易自溶

[答疑编号502389130210]

【正确答案】B