临床医学检验考试辅导《微生物检验》病原性球菌及检验讲义.docx
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临床医学检验考试辅导《微生物检验》病原性球菌及检验讲义
病原性球菌及检验
●考点
葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属
生物学性状
微生物学检查法
临床意义(致病性、所致疾病)
【内容讲解】
普及共性,单记个性
生物学性状
形态与结构:
革兰染色性,菌体形态,大小,排列状态,特殊结构。
培养特性:
对气体需求,营养要求,最适pH值,最适温度,在培养基中的生长现象。
生化反应:
特殊生化。
抗原:
分类:
致病性
致病物质
所致疾病
微生物学检查:
针对生物学性状和致病性。
一、葡萄球菌属
一群革兰阳性球菌,因常堆聚成葡萄串状而得名。
(一)生物学特性
1.形态与结构
G+,球形,0.5~1.5μm,呈葡萄串状成堆排列(在脓汁、肉浸液培养物中,可见单个,成对或短链排列),无鞭毛和芽胞,某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性
需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适pH为7.4,最适温度为35~37℃。
普皿:
圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落,直径为2~3mm。
可产生不同的脂溶性色素,如金黄色、白色、柠檬色色素。
血琼脂平板:
几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
液体培养基:
生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应
触酶试验(+);多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖,产酸不产气;分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶(多数致病性葡萄球菌)。
4.抗原
(1)蛋白抗原:
为完全抗原,有种属特异性,无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面,结合在细胞壁的粘肽部分,具有抗吞噬作用,称葡萄球菌A蛋白(SPA)。
(2)多糖抗原:
是半抗原,具有型特异性,有三种:
①A型多糖抗原;②B型多糖抗原;③C型多糖抗原。
5.分类
(1)《伯杰系统细菌学手册》
(2)古典分类法
6.抵抗力
对理化因素抵抗力强,耐热,耐干燥,耐高盐。
是抵抗力最强的无芽胞细菌。
(二)临床意义
葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。
(1)金黄色葡萄球菌
致病物质:
血浆凝固酶;葡萄球菌溶血素;杀白细胞素;肠毒素;表皮溶解毒素;毒性休克综合征毒素。
(2)表皮葡萄球菌
存在于皮肤的正常栖居菌,为医院感染的重要病原菌,它是导致血培养污染的常见细菌之一。
(3)腐生葡萄球菌
导致尿路感染的常见病原菌之一。
(三)微生物学检查
标本采集(不同疾病采集不同标本):
脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。
鉴定试验:
报告:
检出“XXX葡萄球菌”
耐药性检测
检测耐甲氧西林的金葡菌(MRSA),耐甲氧西林的表葡菌(MRSE),耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA),耐万古霉素的表皮葡萄球菌(VRSE)。
(四)治疗原则
由于耐药菌株日益增多,治疗葡萄球菌感染时,应根据体外药敏试验选择抗生素。
如果是危、急、重症感染,应首先根据经验选药,如万古霉素等,待体外敏感试验结果回报后,再调整用药,针对治疗。
二、链球菌属
(一)生物学特性
1.形态与染色
G+,圆形,0.8~1.0μm,呈链状排列(在液体培养基中易成长链。
在脓汁标本中为短链,成双或单个散在)。
无鞭毛、无芽胞,某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。
2.培养特性
大多为需氧或兼性厌氧菌,少数微需氧及专性厌氧。
营养要求较高。
最适温度为35~37℃,最适pH为7.4~7.6,在5%CO2环境下生长更好。
液体培养基:
溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。
上层液体澄清,可有菌膜。
不溶血菌株则均匀浑浊生长。
血琼脂平板:
灰白色、圆形、凸起、细小菌落,不同溶血环。
3.生化反应
触酶试验(-),能分解葡萄糖产酸不产气,对其他糖类的分解因不同菌株而异。
4.分类
(1)根据溶血能力分类:
甲型(α)溶血性链球菌:
本菌为条件致病菌。
乙型(β)溶血性链球菌:
该型细菌致病性最强,常引起人和动物多种疾病。
丙型(γ)链球菌:
一般无致病性。
(2)根据链球菌细胞壁抗原(即C抗原)分类,即常用Lancefield血清分型法:
将链球菌分为A、B、C、D……T等18个群(其中I和J缺),对人类有致病性的90%属A群,B、C、D、G群链球菌感染较少见。
5.对理化因素的抵抗力
不强,对各种常用消毒剂敏感,60℃加热30分钟即可杀灭。
(二)临床意义
A群溶血性链球菌
致病物质
所致疾病
链球菌溶血素
急性化脓性感染(丹毒、痈、蜂窝组织炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、产褥热)
透明质酸酶
链激酶,链道酶
致热外毒素
猩红热
M蛋白
变态反应性疾病(风湿热,肾小球肾炎)
草绿色链球菌:
属条件致病菌,常与亚急性心内膜炎相关。
B群链球菌:
是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。
D群链球菌:
引起呼吸道和泌尿道感染。
治疗原则:
A群链球菌感染,青霉素G被列为首选。
B群链球菌常常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。
(三)微生物学检查
标本采集(不同疾病采集不同标本):
可采集脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。
鉴定试验:
三、肺炎链球菌
(一)生物学特性
1.形态与染色
G+,球菌,呈矛尖状、钝面成双排列,有时呈短链状,0.5~1.25μm,有荚膜(在人或动物体内易形成),无鞭毛,无芽胞。
2.培养特性
需氧或兼性厌氧;最适的温度为35~37℃;最适的pH7.6~8.0;营养要求较高。
血琼脂平板:
形成灰色扁平、中心凹陷(因菌落发酵所致)直径为0.5~1.0mm的菌落,周围有草绿色溶血圈。
液体培养基:
均匀混浊。
但培养时间过长,可因产生自溶,培养液可变澄清,管底沉淀。
3.生化反应
多数菌株分解菊糖、胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性。
(肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别)。
(二)临床意义
致病物质:
荚膜。
所致疾病:
大叶性肺炎、支气管炎。
可继发胸膜炎、脓胸,也可
引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血症。
(三)微生物学检查
1.标本采集
2.试验方法及鉴定
(1)直接涂片检查:
经革兰染色,镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。
(2)分离培养:
血液、脑脊液需增菌培养,呈均匀混浊,而且有绿色荧光。
脓汁或脑脊液沉渣接种血琼脂,置5%~10%C02环境中培养。
(3)鉴定试验
1)胆汁溶解试验(+)
2)菊糖发酵试验(+)
3)0ptochin敏感试验(+)
4)荚膜肿胀试验(+)
5)动物试验:
小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。
6)快速乳胶凝集试验(+)
四、肠球菌属
肠球菌属是肠道的正常栖居菌。
(一)生物学形状
1.形态和结构
G+,成双或短链状排列的卵圆形球菌,无芽胞,无荚膜,部分肠球菌有稀疏鞭毛。
2.培养特性
营养要求高,需氧及兼性厌氧。
在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长(此点可与链球菌鉴别)。
血平板上主要表现为γ-和α-溶血。
3.生化反应
触酶(-),多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺(PYR)。
与同科链球菌的显著区别:
能在高盐(6.5%NaCl)、高碱(pH9.6)、40%胆汁培养基上和10℃~45℃环境下生长;
对许多抗菌药物表现为固有耐药(如复方增效磺胺、头孢菌素、克林霉素和低浓度的氨基糖苷类)。
(二)临床意义
肠球菌是G+菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌。
最常见的为尿路感染,其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。
临床上分离率最高的是粪肠球菌,其次是屎肠球菌。
肠球菌致病基因:
主要有细胞溶解素激活基因、明胶酶基因、表面蛋白基因、胶原蛋白黏附素基因、聚集物质基因和粪肠球菌心内膜炎基因等。
(三)微生物学检验
采集标本:
如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等。
方法:
以直接涂片进行初步检查。
分离培养后,挑取可疑菌落,进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验,可鉴定到属。
耐药性检测:
一般要测试对β-内酰胺类尤其是青霉素类(如青霉素、氨苄西林)、万古霉素和氨基糖苷类(如庆大霉素)的敏感性。
同时也应对β-内酰胺酶进行测试。
(四)结果评价
药敏结果中必须注明β-内酰胺类(如青霉素G、氨苄西林)的敏感性。
庆大霉素的耐药水平(是否为高水平耐药)万古霉素的敏感性以及β-内酰胺酶测试结果。
(五)治疗原则
一般采用β-内酰胺类和氨基糖苷类联合治疗,氧氟沙星与氨苄西林有协同作用。
必要时还要改用万古霉素或替考拉宁。
五、奈瑟菌属
G-,双球菌,无鞭毛,无芽胞,有菌毛。
专性需氧,氧化酶阳性。
本属主要有9个种。
其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。
脑膜炎奈瑟菌
简称脑膜炎球菌,是引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原体。
1.生物学特性
(1)形态与染色:
G-,菌体呈肾形,坦面相对,成对排列,0.6~1.5μm,在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。
(2)培养特性:
营养要求高,属苛养菌。
最适温度为35~37℃,最适pH为7.4~7.6。
(3)生化反应:
绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气(因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖,借此与之鉴别);
不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖,硝酸盐还原试验阴性不分解尿素、不产生H2S和靛基质;
触酶试验阳性,氧化酶试验阳性。
(4)抗原及分型:
主要有四种抗原:
荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。
根据群特异性荚膜多糖抗原不同,将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。
目前,对人致病的主要是A群,偶见B群、C群及1916群引起散发病例。
2.临床意义
致病物质:
菌毛,荚膜,内毒素。
所致疾病:
脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。
主要表现发热,皮肤瘀斑,脑膜刺激症状。
存在于携带者或病人的鼻咽部,借飞沫经空气传播,冬末春初为流行高峰。
3.微生物学检验
(1)标本采集:
血液;瘀斑渗出液;脑脊液;鼻咽分泌物。
注:
因本菌能产生自溶酶,易自溶,故采集的标本不宜置冰箱,应立即送检。
(2)检验方法及鉴定:
1)直接涂片检查:
取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片,干燥固定后革兰染色。
若发现中性粒细胞内(或胞外)革兰阴性双球菌,呈肾形成对排列,可初报。
2)分离培养:
将标本增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂,置5%~10%C02环境中,35℃培养18~24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1~2mm的小菌落。
3)鉴定:
①细菌染色形态:
G-,菌体呈肾形,坦面相对,成对排列。
②氧化酶试验(+)
③触酶试验(+)
④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气
⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验
4.治疗原则:
青霉素G为首选,三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。
青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。
淋病奈瑟菌
简称淋球菌,是淋病的病原体,人类是其唯一的天然宿主和传染源。
1.生物学特性
(1)形态与染色:
G-,球形或肾形,成对排列,0.6~0.8μm。
在脓汁标本中,通常位于中性粒细胞内,而在慢性淋病时常位于细胞外。
从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛,无芽胞和鞭毛。
(2)培养特性:
营养要求较高,国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。
最适pH为7.5,最适温度为35~37℃。
初次分离时,须置5%~10%CO2条件下才能生长发育。
菌落:
表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.5~1.0mm的圆形菌落。
(3)生化反应:
对糖类生化活性最低,本菌可发酵葡萄糖、产酸,但不酵解麦芽糖(常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别)。
氧化酶和触酶试验均阳性。
(4)主要抗原:
菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。
(5)抵抗力:
对外界抵抗力极低。
2.临床意义:
淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌,主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道,口咽部及肛门直肠的黏膜。
如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。
3.微生物检验
(1)标本采集:
脓性分泌物,尿道拭子,宫颈口分泌物,眼结膜分泌物,血液。
(2)检验方法及鉴定
1)直接涂片检查:
收集标本后立即涂片、革兰染色,镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌,可初诊。
2)分离培养:
细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。
及时接种含有两种以上抗生素(万古霉素和多黏菌素等)的营养培养基上。
3)鉴定:
①生化反应:
氧化酶阳性,仅分解葡萄糖产酸;不发酵麦芽糖与蔗糖,30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。
②免疫学方法:
荧光抗体染色法、协同凝集试验。
③核酸探针杂交法。
4.治疗原则
对青霉素和四环素耐药的淋病奈瑟菌越来越多,目前一线用药一般为三代头孢菌素,氟喹诺酮类、大观霉素可作为替代药物。
对氟喹诺酮类、大观霉素的耐药也有报道。
六、卡他布兰汉菌
G-,双球菌,约0.6~1.0μm,无芽胞,无鞭毛。
营养要求不高,在普通培养基上18~20℃即可生长,借此可与脑膜炎奈瑟菌鉴别。
需氧,菌落光滑,直径约1~3mm,不透明,灰白色,菌落易从培养基上刮下。
氧化酶和触酶阳性,产DNA酶,大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐,借此可与奈瑟菌属相鉴别。
可致中耳炎、鼻窦炎、肺炎。
【例题】SPA是
A.肠杆菌科的细菌的抗原
B.葡萄球菌细胞壁的蛋白成分
C.沙门菌的表面抗原
D.核蛋白抗原
E.链球菌属表面抗原
[答疑编号502389130201]
【正确答案】B
【例题】鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌可用
A.外斐试验
B.肥达试验
C.乳糖发酵试验
D.菊糖分解试验
E.血浆凝固酶试验
[答疑编号502389130202]
【正确答案】D
【例题】B群链球菌不引起下列哪种疾病
A.败血症
B.肺炎
C.脑膜炎
D.咽喉炎
E.风湿热
[答疑编号502389130203]
【正确答案】E
【例题】引起剥脱性皮炎的细菌是
A.肺炎球菌
B.链球菌
C.金黄色葡萄球菌
D.脑膜炎奈瑟菌
E.肠球菌
[答疑编号502389130204]
【正确答案】C
【例题】淋病奈瑟菌与脑膜炎奈瑟菌鉴别用
A.葡萄糖发酵试验
B.麦芽糖发酵试验
C.氧化酶试验
D.触酶试验
E.革兰染色
[答疑编号502389130205]
【正确答案】B
【例题】一位老年患者因外伤住院治疗,插导尿管一周后出现尿路感染。
取尿液检查,革兰染色见阳性球菌,有的呈短链排列,分离培养营养要求较高,血培养生长较好,有甲型溶血;触酶阴性,药敏试验对第三代头孢菌素耐药,在高盐(6.5%NaCl)、高碱(Ph9.6)、高胆汁(40%)培养基上生长。
此菌为
A.大肠埃希菌
B.草绿色链球菌
C.表皮葡萄球菌
D.肠球菌
E.肺炎链球菌
[答疑编号502389130206]
【正确答案】D
【例题】初步鉴定B群链球菌的试验为
A.马尿酸钠水解试验
B.CAMP试验
C.杆菌肽敏感试验
D.胆汁七叶苷试验
E.Optochin敏感试验
[答疑编号502389130207]
【正确答案】AB
【例题】区分葡萄球菌属和链球菌属的试验的是
A.VP试验
B.吲哚试验
C.氯化钾试验
D.硝酸盐还原试验
E.触酶试验
[答疑编号502389130208]
【正确答案】E
【例题】关于肺炎链球菌,叙述不正确的是
A.革兰染色阴性
B.革兰染色阳性
C.荚膜肿胀试验可作为快速诊断
D.主要引起大叶性肺炎
E.可引起菌血症
[答疑编号502389130209]
【正确答案】A
【例题】关于脑膜炎奈瑟菌,叙述不正确的是
A.镜下呈肾形或豆形成双排列、坦面相对的革兰阴性球菌,具有荚膜
B.本菌经空气传播,定植于人的脑皮质部位
C.本菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌
D.人类是脑膜炎奈瑟菌的唯一宿主
E.本菌对外界环境的抵抗力弱,易自溶
[答疑编号502389130210]
【正确答案】B