uvprobe使用.docx

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uvprobe使用

UVProbe快速操作说明

一、仪器的添加和连接

1.1仪器的添加

打开UVProbe软件，在菜单栏中选择“仪器”、“增加”后，弹出如下的“加入仪器向导”，

按照“加入仪器向导”的提示，选择要添加的仪器的型号，

输入仪器名，

输入项目、序列号，点击“完成”，

仪器添加后，仪器条上显示仪器名（“视图”下勾选“仪器条”可见）。

1.2端口的配置

在菜单栏中选择“仪器”、“配置”，为仪器指定连接的通讯口，若串口在计算机主板上，可以尝试COM1或COM2，若串口由USB转化，则尝试COM3或COM4。

1.3连接

在“光谱”，“光度”或“动力学”测定方式下点击“连接”键，仪器与PC连接并出现下示的初始画面（仪器型号不同初始化的项目会有增减），

初始化大约需要5分钟左右，进行一系列的检查和初置，如一切顺利通过就可以开始测定。

二、测定

首先选择测定的方式，在标准工具条上能发现如右图

所示的各键，自左至右分别为：

1．报告生成器：

用于制作各种格式的报告。

2．动力学测定：

一般测定吸收值随时间的变化，通常用于酶反应随时间的变化。

3．光度测定（定量）：

可进行多波长、单波长、峰高或峰面积定量。

校准曲线可使用多点、单点、K因子等方法。

由于具有自定义方程的功能，以前DNA/蛋白质测定等需要特殊选购的软件才能进行的工作，使用UVPROBE可自编程序进行测定。

4．光谱测定：

可进行紫外可见区的光谱测定。

三、光谱测定

3.1界面

光谱测定界面如图所示，点击光谱工具条上的

键，可分别开关图象面板（左键）、数据处理面板（中键）以及方法面板（右键）。

3.2参数设定

点击光谱工具栏上的

，即可出现如下图所示的设定测定条件的画面：

在“测定”选项卡中可选择测定的“波长范围”、“扫描速度”、“采样间隔”等条件。

点击图中“试样准备”选项卡，可输入“重量”、“体积”、“稀释因子”、“光程长”等信息。

点击图中“仪器参数”选项卡，可选择“测定方式”（吸收值、透射率、能量、反射率）以及“狭逢宽”等条件。

但是UV-1600/1700的狭缝宽分别固定为2nm/lnm不可选择。

如果使用多联池或注射式抽吸装置等附件时，可点击“附件”选项卡，在此设置各附件相关的参数条件。

3.3采集和保存光谱数据

用如图所示

的光度计按键操作，首先点击“基线”进行基线校正，然后点击“到波长”将波长设置到500nm，再点击“自动调零”。

为何要如此做？

原因非常简单，由于一般的分光光度计的能量在500nm左右最强，在此自动调零可得到最正确的基线。

通常上述操作在开机后进行一次就足够了（上面的基线和零点是仪器本身的,为了消除池差通常在样品侧和参比侧都方上参比溶液进行基线校正和自动调零）。

此后，放置样品并点击“开始”键即可测定。

扫描完毕，输入保存的路径以及文件名，点击确定保存文件。

3.4结果处理

3.4.1显示范围的变更

变更范围十分简单，只需在点击图象上最大和最小的位置，然后输入适当的数字即可。

这表示可以随意地放大和缩小图象的标尺。

点击需要变更的位置，然后输入需要的数值就可改变范围

改为：

1

改为：

550

此外，在图象上点击鼠标右键，在出现的快捷菜单上选择自动标尺也能使标尺设置到适当的大小。

3.4.2峰谷检测

点击菜单栏上的“操作”、“峰值检测”，出现如下画面。

此处的数据处理面板中出现峰谷的列表，需要说明的是该结果使用了上一次设置的检测条件，当然用户还可根据自己的需要加以改变。

如果图中有多条光谱的话，这些光谱的峰谷表都将出现在数据处理的面板中，点击表格下的标签①，即可切换。

若需改变峰谷的检测条件，可在在数据处理面板上点击鼠标右键，在出现的菜单中点击“属性”，在弹出的属性对话框中设置“阈值”，属性对话框如下图所示。

3.4.3面积计算

如果要计算光谱的面积，请在菜单栏中选择“操作”、“峰面积”。

上图①是读数条，左右移动决定光谱面积计算的范围，②是计算结果的显示。

如果计算面积的区域想删除，可在欲删除的区域中点击鼠标右键，从出现的菜单中选择删除。

此外，上图中面积计算到了基线，如果希望改变，从菜单上选择属性：

改变“基线到零”的选择框，图象和数据处理面板上的结果都将改变。

3.4.4选点检测

菜单栏中选择“操作”、“选点检测”。

选点检测可以从已经得到的光谱中选取任意多个点的数据，选择时只要拖动读数条或在下图的波长列中手动键入波长值即可。

3.4.5处理

测定得到的光谱可进行各种计算。

从主菜单上选择“操作”、“处理”即可：

如果打开了几张光谱，需先选择需要处理的光谱（数据集），然后选择运算的算符及常数，最后点击计算键。

输入保存结果的数据集名，点击确定键，新的经过计算的光谱（数据集）将重叠显示在图象面板中。

3.5打印

进入菜单栏“视图”、“设置”，在弹出的“设定”对话框中选择“快速打印”选项卡，为各打印项目注册模板后点击确定退出对话框。

在界面中，激活要打印的项目（鼠标左键单击），选择菜单栏“文件”、“打印”即可。

3.6图象面板上光谱的删除

欲删除图象面板中的光谱，先在菜单栏上选择“文件”、“属性”。

得到下图，选择要删除的光谱，点击“删除”。

四、光度测定

4.1界面

光度测定界面如图所示，在光度测定工具条上有右列各

键，点击以后分别出现标准表（最左）、样品表（左二）、工作曲线图（右2）和样品图（最右）。

4.2参数设定

点击菜单栏中的

键，出现下图：

此处显示的波长类型是“点”表示测定高度，如果选择的是范围，则需输入起始和结束波长，并可选择最大、最小、峰、谷或面积等作为定量的依据。

无论如何选择，波长都是必须的，并要加入以后才有效（多波长定量需要加入对应的多个波长）。

4.3制作工作曲线

首先如前所述，选择了点及波长，然后在方法中选择校准，在此决定用工作曲线法定量，并选择多点，单点等。

进行定量测定也需要基线校正和自动调零，方法如前面所述。

此后，样品室内逐个放入标准，输入名称、浓度，点击光度计按键的“开始”键即可。

标准测定完毕，工作曲线自动显示。

在工作曲线图象上点击鼠标右键，选择属性，可从该图象上得到许多有用的信息，见下图：

只需在这些显示的项目中做标记，相应的信息即出现在工作曲线图象的左下方。

见下图的划圈部分：

4.4测定样品浓度

样品室内逐个放入样品，输入名称，点击光度计按键的“开始”键即可（注意无论是标准还是未知样品的测定都必须事先命名ID否则不能采集数据）。

五、动力学测定

5.1界面

动力学测定界面如图所示，在动力学测定工具条上有

键，自左到右分别是时间扫描图象、数据处理面板、测定参数面板和酶活度图象。

5.2参数设置

在菜单栏中点击方法键

，得到如下图象：

此处的计时方式选择的是“自动”，时间总量中需手动设置测定的时间。

由于是自动计时方式，所以采样步长（图中为时间周期）和读数次数将根据时间总量自动设置。

此外可设置波长以及活度计算的开始和结束时间。

设置太短的活度范围会出现错误信息。

相反，如果计时方式选择的是手动的话，则可输入时间周期和读取次数，而时间总量（测定时间）会根据输入的时间周期和读取次数自动计算得到。

活度范围用于酶反应随时间的变化，如果单纯进行时间扫描的话，则可不考虑活度范围。

测定的波长栏内可选择单波长或双波长（波长l-波长2或波长l/波长2）两种方法。

选择后输入相应的波长。

5.3采集动力学数据

在测定前，放入空白溶剂，执行“自动调零”或“基线校正”。

单波长测定，执行“自动调零”；其他场合，执行“基线校正”。

把样品放入分光光度计。

点击“开始”键，开始测定。

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