UPLCMS法测定丹参药品中水溶性成分含量毕业设计论文.docx
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UPLCMS法测定丹参药品中水溶性成分含量毕业设计论文
UPLC-MS法测定丹参药品中水溶性成分含量
毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明
原创性声明
本人郑重承诺：
所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。
尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。
对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。
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本人完全了解大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：
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所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。
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年月日
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涉密论文按学校规定处理。
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日期：
年月日
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日期：
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注意事项
1.设计（论文）的内容包括：
1）封面（按教务处制定的标准封面格式制作）
2）原创性声明
3）中文摘要（300字左右）、关键词
4）外文摘要、关键词
5）目次页（附件不统一编入）
6）论文主体部分：
引言（或绪论）、正文、结论
7）参考文献
8）致谢
9）附录（对论文支持必要时）
2.论文字数要求：
理工类设计（论文）正文字数不少于1万字（不包括图纸、程序清单等），文科类论文正文字数不少于1.2万字。
3.附件包括：
任务书、开题报告、外文译文、译文原文（复印件）。
4.文字、图表要求：
1）文字通顺，语言流畅，书写字迹工整，打印字体及大小符合要求，无错别字，不准请他人代写
2）工程设计类题目的图纸，要求部分用尺规绘制，部分用计算机绘制，所有图纸应符合国家技术标准规范。
图表整洁，布局合理，文字注释必须使用工程字书写，不准用徒手画
3）毕业论文须用A4单面打印，论文50页以上的双面打印
4）图表应绘制于无格子的页面上
5）软件工程类课题应有程序清单，并提供电子文档
5.装订顺序
1）设计（论文）
2）附件：
按照任务书、开题报告、外文译文、译文原文（复印件）次序装订
指导教师评阅书
指导教师评价：
一、撰写（设计）过程
1、学生在论文（设计）过程中的治学态度、工作精神
□优□良□中□及格□不及格
2、学生掌握专业知识、技能的扎实程度
□优□良□中□及格□不及格
3、学生综合运用所学知识和专业技能分析和解决问题的能力
□优□良□中□及格□不及格
4、研究方法的科学性；技术线路的可行性；设计方案的合理性
□优□良□中□及格□不及格
5、完成毕业论文（设计）期间的出勤情况
□优□良□中□及格□不及格
二、论文（设计）质量
1、论文（设计）的整体结构是否符合撰写规范？
□优□良□中□及格□不及格
2、是否完成指定的论文（设计）任务（包括装订及附件）？
□优□良□中□及格□不及格
三、论文（设计）水平
1、论文（设计）的理论意义或对解决实际问题的指导意义
□优□良□中□及格□不及格
2、论文的观念是否有新意？
设计是否有创意？
□优□良□中□及格□不及格
3、论文（设计说明书）所体现的整体水平
□优□良□中□及格□不及格
建议成绩：
□优□良□中□及格□不及格
（在所选等级前的□内画“√”）
指导教师：
（签名）单位：
（盖章）
年月日
评阅教师评阅书
评阅教师评价：
一、论文（设计）质量
1、论文（设计）的整体结构是否符合撰写规范？
□优□良□中□及格□不及格
2、是否完成指定的论文（设计）任务（包括装订及附件）？
□优□良□中□及格□不及格
二、论文（设计）水平
1、论文（设计）的理论意义或对解决实际问题的指导意义
□优□良□中□及格□不及格
2、论文的观念是否有新意？
设计是否有创意？
□优□良□中□及格□不及格
3、论文（设计说明书）所体现的整体水平
□优□良□中□及格□不及格
建议成绩：
□优□良□中□及格□不及格
（在所选等级前的□内画“√”）
评阅教师：
（签名）单位：
（盖章）
年月日
教研室（或答辩小组）及教学系意见
教研室（或答辩小组）评价：
一、答辩过程
1、毕业论文（设计）的基本要点和见解的叙述情况
□优□良□中□及格□不及格
2、对答辩问题的反应、理解、表达情况
□优□良□中□及格□不及格
3、学生答辩过程中的精神状态
□优□良□中□及格□不及格
二、论文（设计）质量
1、论文（设计）的整体结构是否符合撰写规范？
□优□良□中□及格□不及格
2、是否完成指定的论文（设计）任务（包括装订及附件）？
□优□良□中□及格□不及格
三、论文（设计）水平
1、论文（设计）的理论意义或对解决实际问题的指导意义
□优□良□中□及格□不及格
2、论文的观念是否有新意？
设计是否有创意？
□优□良□中□及格□不及格
3、论文（设计说明书）所体现的整体水平
□优□良□中□及格□不及格
评定成绩：
□优□良□中□及格□不及格
教研室主任（或答辩小组组长）：
（签名）
年月日
教学系意见：
系主任：
（签名）
年月日
摘要：
传统中药丹参，是著名抗衰老中药。
本文介绍了丹参的作用、主要成分及用途，并对丹参国内外研究现状及趋势进行了阐述，还介绍了高效液相色谱-质谱联用的特点，UPLC-MS在中药含量测定中的应用以及中药材在含量测定时的指标成分选择。
我参考有关文献采用UPLC-MS法测定复方丹参片、复方丹参滴丸、丹参注射液中三种水溶性成分迷迭香酸、原儿茶醛、丹酚酸B的含量，采用色谱柱HypersilGOLD（100mm×2.1mm，1.9μm），以甲醇-水-甲酸为流动相进行梯度洗脱，流速为0.300ml·min-1通过质谱解析以及与对照品比较，运用质谱仪定性分析丹参中各种水溶性成分，并建立了HPLC分析方法同时测定这三种成分的含量。
该方法操作简便、灵敏度高、重现性好，为丹参中药制剂质量标准的研究提供实验依据。
关键词：
丹参药品；高效液相色谱质谱联用；水溶性成份
UPLC-MSMethodforDeterminationofWater-solubleComponentsinSalviaMiltiorrhizaandDrugIngredients
Abstract:
TraditionalChinesemedicinedanshen,isfamousanti-agingmedicine.Thispaperintroducesthefunction,themainingredientofsalviamiltiorrhizaandUSES,andthedomesticandforeignresearchpresentsituationandtrendofsalviamiltiorrhiza,highperformanceliquidchromatography-massspectrometryisintroducedinthepaper,thecharacteristicsoftheapplicationofUPLC-MSincontentoftraditionalChinesemedicine（TCM）andChineseherbalmedicineinthechoiceofindicatorelementsinthecontentdetermination.MyreferenceliteraturesUPLC-MSmethodisusedtodeterminetheeffect,compounddanshendroppingpill,threekindsofwater-solublecomponentsinsalviamiltiorrhizainjectionrosemaryacid,protocatechuicaldehyde,DanphenolicacidscontentofB,thechromatographiccolumnis100mmx2.1mm,1.9mummodel,withmethanol-water-formicacidasmobilephasegradientelution,flowrateof0.300ml,min-1bymassspectrumanalysis,andcomparisonwiththereferencesubstance,usingqualitativeanalysisallkindsofwatersolubleconstituentsofsalviamiltiorrhizamassspectrometerandtoestablishtheHPLCanalysismethodfordeterminethecontentofthesethreecomponentssimultaneously.Themethodissimple,highsensitivity,goodreproducibility,totheresearchofsalviamiltiorrhizaqualitystandardsofTCMandtoprovideexperimentalbasis.
Keywords:
Danshenmedicines；Water-solublecomponents；UPLC-MS
摘要………………………………………………………………………x
Abstract…………………………………………………………………x
第一章前言……………………………………………………………x
1本论文内容……………………………………………………………x
2研究的目的……………………………………………………………x
2.1研究的背景和意义………………………………………………………………x
2.2研究的创新点及难点……………………………………………………………
3丹参概述…………………………………………………………………………x
3.1丹参的介绍……………………………………………………………………x
3.1.1形态特征………………………………………………………………………
3.1.2生境分布………………………………………………………………………
3.1.3化学成分………………………………………………………………………
3.2丹参的功效及作用………………………………………………………………x
3.3丹参的发展及研究现状…………………………………………………………x
4主要成分提取和分离的方法…………………………………………x
4.1醇提法……………………………………………………………………………x
4.2CO2超临界流体萃取技术…………………………………………………………x
4.3高速逆流色谱法…………………………………………………………………x
4.4超声波提取法……………………………………………………………………x
5丹参有效成分的测定方法……………………………………………x
5.1薄层色谱法………………………………………………………………………x
5.2紫外分光光度法…………………………………………………………………x
5.3气相色谱法法……………………………………………………………………x
5.4高效液相色谱法…………………………………………………………………x
5.5高效液相色谱—质谱联用概述…………………………………………………x
5.5.1液相色谱-质谱联用仪介绍…………………………………………………x
5.5.2液相色谱-质谱联用仪的发展………………………………………………x
5.5.3液相色谱-质谱联用仪的特点………………………………………………x
6HPLC-MS在中药含量测定方面研究状况………………………………x
6.1已知化合物定性分析及结构鉴定中的应用……………………………………x
6.2未知成分定性分析中的应用……………………………………………………x
6.3药物代谢中的应用………………………………………………………………x
第二章实验部分………………………………………………………x
1仪器与试剂………………………………………………………………………x
1.1仪器………………………………………………………………………………x
1.2试剂…………………………………………………………………………….x
2方法………………………………………………………………………………x
2.1条件的选择………………………………………………………………………x
2.1.1色谱条件………………………………………………………………………x
2.1.2质谱条件………………………………………………………………………x
2.1.3流速的选择……………………………………………………………………x
2.1.4离子化模式的选择……………………………………………………………x
2.1.5MS条件的选择………………………………………………………………x
2.1.6定量离子对的选择……………………………………………………………x
2.2对照品溶液的制备………………………………………………………………x
2.3样品溶液的制备…………………………………………………………………x
2.4方法学考察………………………………………………………………………x
2.4.1线性关系试验…………………………………………………………………x
2.4.2精密度…………………………………………………………………………x
2.4.3重复性…………………………………………………………………………x
2.4.4稳定性…………………………………………………………………………x
2.4.5加标回收率……………………………………………………………………x
2.4.6样品含量测定…………………………………………………………………x
3结果与讨论………………………………………………………………………x
4展望………………………………………………………………………………x结论………………………………………………………………………x
参考文献…………………………………………………………………x
致谢……………………………………………………………………x
第一章前言
1本论文内容
传统中药丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge．的干燥根及根茎，是著名抗衰老中药。
近代已从中分离得到多种化学成分，含有酚酸类水溶性成分和二萜类脂溶性成分两大类，水溶性成分有原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B等。
丹参的水溶性成分不仅具有显著的抗氧化、抗自由基、抑制低密度脂蛋白氧化的特性。
而且具有护肝、抗肝癌、抗心血管疾病以及抑制HIV病毒对宿主细胞的感染等作用。
最近研究发现丹参水提物和丹参素促进成骨细胞活性和防治泼尼松所致大鼠骨质疏松。
本实验旨在测定丹参中水溶性成分含量，丹参药品的主要水溶性成分为迷迭香酸、原儿茶醛、丹酚酸B等，我参考有关文献采用HPLC-MS法测定丹参药品中迷迭香酸、原儿茶醛、丹酚酸B的含量，用有效的方法提取和分离丹参主要水溶性成分，采用色谱柱是100mm×2.1mm，1.9μm的型号，以甲醇-水-甲酸为流动相进行梯度洗脱，流速为0.300mL·min-1，建立和优化高效液相色谱条件，拟合和优质质谱条件。
主要包含以下几方面的内容：
丹参中主要成分的提取；丹参主要成分色谱、质谱分离条件的拟合和优选；定性定量模式以及定性定量离子对的确定；分析方法的建立，以及所见分析方法的表征，即回归方程、相关系数、精密度、稳定性，检出限以及加标回收率的测试等。
2研究的目的
2.1研究的背景和意义
丹参是常用中药材之一，也是许多中成药组方中的常用品种，丹参全国需求量较大，是临床上最常用的药物之一，在中药材中占有重要地位，丹参不仅有活血化瘀的作用，而且对治疗冠心病、肝炎、脉管炎及神经衰弱等多种疾病均有新的疗效，还有相当数量的出口，近年来研究发现用来治疗心血管疾病,疗效显著。
以丹参为原料生产的复方丹参滴丸、丹参舒心胶囊、丹参片、丹参膏、丹参霜等产品近百种；生产剂型有浓缩丸、胶囊剂、片剂、注射剂、冲剂等10多种。
所以丹参的开发与利用有很好的发展前景。
但由于丹参的野生资源日趋减少，远不能满足临床需求量，因此丹参的栽培品种发展很快。
丹参药材以及制剂的质量控制研究已成为丹参研究的热点，而丹参有效成分的多样性一直是丹参药材质量控制的难点，寻找有效准确方便的质量控制方法是研究的根本目的。
此外，丹参适应性较强，对外界环境的要求不甚严格种植技术难度不大，适合种植的土地面积较多，生产和市场潜力很大，所以栽培丹参前景广阔，可产生较大的经济效益。
所以研究丹参的有效成分对现代医学的发展有重要意义。
2.2研究的创新点及难点
作为中国传统中药，现代丹参的化学成分以及药理学研究已经十分透彻。
现代将丹参的化学成分分为二萜醌类、酚酸类及其他类3个类型的化合物。
其具药理活性的主要为二萜醌类、酚酸类即脂溶性和水溶性成分。
水溶性的成分主要为酚性化合物、多糖和糕质，其中具有活性的成分主要是丹酚酸类化合物、丹参素和迷迭香酸，具有抗肝纤维化、保护脑缺血、抗动脉粥样硬化以及抗氧化等作用。
丹参药材以及制剂的质量控制研究已成为丹参研究的热点，而丹参有效成分的多样性一直其丹参药材质量控制的难点，寻找有效准确方便的质量控制方法是研究的根本目的。
创新点：
（1）本研究课题建立的检测方法，集合了高效液相色谱法的高分离能力和质谱法的高灵敏性，定性定量的完成。
（2）我查阅有关文献没有找到高效液相色谱-质谱联用技术对丹参主要水溶性成分迷迭香酸、原儿茶醛和丹酚酸B的研究，这是本课题选取的创新点。
（3）用高效液相色谱-质谱联用技术对丹参有效成分的测定，有利于丹参的质量控制。
难点：
（1）如何有效的提取和分离丹参主要水溶性成分是本研究课题的主要难点之一。
（2）丹参的主要成分比较复杂，含有脂溶性成分和水溶性成分，而如何成功的使得有效成分达到基线分离，即建立和优化其高效液相色谱条件，以及如何拟合和优质质谱条件和离子化模式的选择是本研究课题的难点。
3丹参概述
3.1丹参的介绍
中药丹参是唇形科鼠尾草属的多年生草本植物丹参（SalviaMiltiorrhizaBunge）的干燥根及根茎，因其色红且形状似参而得名“丹参”,又名：
紫丹参，红根，血参，大红袍等。
以根用药。
丹参作为传统中药在我国沿用已久,始载于我国古代《神农本草经》，被列为上品。
《本草经疏》、《本草纲目》中都有记载。
其味苦，性微寒，归心、肝二经。
3.1.1形态特征
丹参为唇形科鼠尾草属的多年生直立草本，高约35~80cm，多分枝。
根圆柱形，肉质，外面砖红色，内部乳白色。
茎直立，方形，表面有浅槽。
单数羽状复叶，对生，有柄，叶柄长1.3~7.5cm；小叶3~7片，顶端小叶最大，小叶柄亦最长，侧生小叶短柄或无柄；小叶片卵形、广披针形，长1.5~8cm，宽1~4cm。
轮伞花序6至多花，总状花序，顶生或腋生，长10~20cm；小花轮生，每轮有花3~10朵，小苞片披针形，长约4mm；花萼钟形，带紫色，长钟状，长1~1.3cm，先端二唇形，上唇阔三角形，先端急尖，下唇三角形，先端二尖齿裂，萼简喉部密被白色长毛，能育雄蕊2，着生于下唇的中下部药隔长1.7~2cm，小型果椭圆形；花冠蓝紫色，二唇形，长约2.5cm，上唇直升略呈镰刀形，下唇较短，圆形。
花期5~9月，花后见果。
种子发芽率低，一般不采用种子繁殖。
3.1.2生境分布
生于海拔120~1300m的山坡、林下草地或沟边。
生于海拔2100~4050m的林缘、路旁、沟边灌丛中。
丹参分布于辽宁、河北、河南、山东、山西、江西、安徽、江苏、浙江、湖北、甘肃、贵州、四川、陕西、甘肃、广西等地，主产安徽、山西、河北、四川、江苏等地。
此外，湖北、甘肃、辽宁、陕西、山东、浙江、河南、江西等地亦产。
野生的丹参常见于山坡、草丛、林下、溪谷旁。
目前野生丹参资源由于过度采收已遭破坏，各地虽有栽培品种，但品质退化严重，质量参差不齐。
3.1.3化学成分
丹参主要含两类成分:
一类为脂溶性的二萜类化物，二类为水溶性的多聚酚酸类成分。
20世纪30~60年代，有效成分的研究重点为丹参的脂溶性成分。
而在80年代，姚俊严等从丹参中提取分离出原儿茶醛，至此人们开始把研究重点转移到水溶性成分，且发现丹参的主要活性成分为水溶性酚酸。
丹参脂溶性成分：
（1）邻醌型丹参酮类二萜化合物在丹参中含量较高,有较强的生理活性,是丹参主要有效成分之一。
主要有:
丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、ⅡB、隐丹参酮、丹参酸甲酯、紫丹参素等。
其中丹参酮ⅡA是丹参治疗冠心病的主要有效成分之一,在丹参中的含量可达0.5%以上,将其磺化制成丹参酮ⅡA磺酸钠后,可增加水溶性及提高药理活性。
隐丹参酮抗菌活性很强,比小檗碱强许多倍,含量亦高,常作为抗菌消炎类丹参制剂的质量控制指标成分。
（2）对醌型的丹参酮类二萜化合物在丹参中含量很低,主要有:
异丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅱ,异隐丹参酮等。
（3）其它二萜类化合物较少,含量低。
主要有丹参螺旋内酯、新隐丹参酮等。
醌类、酚酸类及其他3个类型的化合物。
其具药理活性的主要为二萜醌类、酚酸类即脂溶性和水溶性成分。
水
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