HSV1+2 IgG.docx
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HSV1+2IgG
产品注册证号：
3400298
赛润ELISAclassic
单纯疱疹病毒1/2型IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
德国维润赛润研发有限公司北京代表处
北京建国门北大街8号华润大厦2503B
邮编：
100005
电话：
+86.（0）10.85192070
传真：
+86.（0）10.85192071
电子邮件：
dialog@virion-
网址：
http:
//www.virion-
单纯疱疹病毒1/2型IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
赛润ELISAclassic
目录
1.名称
2.用途
3.诊断意义
4.说明
5.赛润ELISAclassic-检测原理
6.试剂盒组成
7..检测所需物质，试剂盒未提供
8.储存和稳定性
9.赛润ELISAclassic的检验步骤
9.1注意事项
9.2样品准备和储存
9.3试剂盒反应试剂的准备
9.4检测程序概要
9.5检测过程
10.检测结果评估
10.14PL单点定量法
10.2检验有效性标准
10.3计算赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒1/2型IgG（定量）
10.4检测结果分析
11.性能特性
11.1重复性
11.2敏感性和特异性
12.有效期
13.警告
13.1警告和安全措施
13.2废料处理
14.参考文献
15.制造商名称、地址及联系方式
单纯疱疹病毒1/2型IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）
赛润ELISAclassic
酶联免疫法测定人体抗体IgM
-只限用于体外诊断-
1.名称
通用名：
单纯疱疹病毒1/2型IgG试剂盒（定量）
英文名：
HerpessimplexVirus1/2IgG（quant.）
商品名：
赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒1/2型IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）
汉语拼音：
SerionELISAclassicdanchunpaozhen1/2xingIgGkangtidingliangjianceshijihe（meilianmianyifa）
产品编号:
ESR105G
检测评估标准:
DadeBehringBEP®III/BEP®2000,DSX,手动操作
2.用途
用于定量检测人血清或血浆中产生的对抗单纯疱疹病毒1/2型IgG的抗体。
3.诊断意义
赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒1/2型IgG抗体定量检测试剂盒主要用于定量检测人血清或血浆中产生的抗单纯疱疹病毒IgG的抗体。
IgM-ELISA试剂可用于检测急性感染，而单纯疱疹病毒1/2型IgG-ELISA试剂用于确定免疫状态以及在脑脊液检测时发现鞘内所形成的抗体。
HSV1型IgG和HSV2型IgG试剂可以区分人类抗单纯疱疹病毒1型和2型，HSV1/2型IgA-ELISA试剂则尤其可用于识别复发感染。
单纯疱疹病毒1型和2型是一种致病性的DNA病毒，属于疱疹病毒科。
疱疹病毒已在全球范围内传播。
在工业化国家，10-20岁的人群中疱疹病毒感染的血清检出率高达50%，甚至在90%成年人体内发现了单纯疱疹病毒的血清型1，10-15%有单纯疱疹病毒的血清型2。
初期感染主要是因为与感染病人接触（包括唾液或生殖器分泌物）、及通过输血或移植手术造成的交叉感染或医源性感染。
初期感染后病毒会终生寄生在局部的神经节中，并可被激活。
在分娩期间，生殖器疱疹的传播过程没有明显的临床症状，但多数情况下将会导致局部或扩散型脓毒类症状。
初期感染后，病毒会以一种特定的天花板格形（潜伏期）持续存在直至再激活（冬眠期）。
病毒的再激活对免疫力正常的人来说没有明显的临床症状，而对免疫能力低下的人则会出现严重的临床并发症。
潜伏期在2-12天之间，传染性会持续至皮肤或粘膜出现疱疹（约3周时间）或内源性感染复发期。
1型单纯疱疹病毒的初期感染90%没有明显的症状，有10%左右的病人会在唇、口或眼角膜及结膜部位出现特征性的疱疹。
这些脓疱性疱疹会在有湿疹的皮肤上扩散，并可能会危及生命。
进一步的并发症是大脑炎（70%是致命性的）或脑膜炎。
12%的2型单纯疱疹病毒初期感染会出现突然性流产、外阴阴道炎或阴茎阴囊皮疹。
尽管多数生殖器的疱疹病毒感染是由2型单纯疱疹病毒引起的，但1型单纯疱疹病毒引起的感染也有20%。
感染初期的症状是相同的，但生殖器感染1型单纯疱疹病毒后的再激活机率明显比2型低。
2型单纯疱疹病毒对生殖器感染是1型的4倍，流行更广且具有显著的临床症状，而1型单纯疱疹病毒生殖器感染的临床复发率通常是很低的。
2型单纯疱疹病毒生殖器感染可用抑制病毒复制的抗病毒药物治疗如阿昔洛韦、缬昔洛韦和泛昔洛韦，单纯疱疹病毒1型和2型的血清学及病毒学差异能够指导对疾病的正确预后和治疗。
赛润ELISAclassicHSV1型试剂盒的微孔板由重新联合的1型病毒醣蛋白gG1包被，而赛润ELISAclassicHSV2型试剂盒的微孔板由全病毒纯化而得的醣蛋白gG2包被。
使用HSV1型和HSV2型的包膜蛋白gG1和gG2可实现HSV1型和HSV2型的类型特异性抗体应答的甄别。
赛润ELISAclassicHSV1/2型IgG/IgM/IgA试剂盒的微孔板由这两种纯化的全病毒抗原的混合物包被。
赛润ELISAclassicHSV1型IgM和HSV2型IgM的微孔板是由相应的全病毒抗原包被，可保证直接、敏感地发现急性感染，因为抗醣蛋白gG1和gG2的抗体很多时候在初次感染2-3个月后才能被检测到。
由于两种病毒类型的交叉反应，在使用HSV1型IgM和HSV2型IgMELISA试剂时，考虑到个体免疫状态，只有在做平行测试的情况下才能为区分病毒特异性抗体应答提供证据。
（患者标本）在SERIONELISAclassicHSV1型IgM检测时比在SERIONELISAclassicHSV2型IgM检测时得出明显更高的抗体滴度则表示急性初次感染或者HSV1型病毒复发感染。
反之，（患者标本）在SERIONELISAclassicHSV2型IgM检测时比在SERIONELISAclassicHSV1型IgM检测时得出明显更高的抗体滴度则表示急性初次感染或者HSV2型病毒复发感染。
4.说明
本说明书除单纯疱疹病毒1/2型IgG抗体定量检测的内容外，还涉及到IgM/IgA抗体的定量检测，以及对结果的分析等。
5.赛润ELISAclassic-检验原理
用抗原包被微量板孔，制成固相载体。
加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异性地与固相载体中存在的抗原结合，形成免疫复合物。
除去多余物质后，加入碱性磷酸酶标记的IgG、IgA和IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。
洗板，除去多余的结合物，加入底物（对硝基苯磷酸盐）。
其与酶结合的免疫复合物反应，产生有颜色产物，颜色强度与特异性抗体含量成正比。
6.试剂盒的组成
试验成分
IgG试剂盒IgM试剂盒IgA试剂盒
数量/剂量
微孔条（此微孔条可以拆下单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原）
1个微孔条框架
包被的抗原为灭活抗原
121212
标准血清（立即可用）
人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
染色剂：
紫红色O
2×2毫升2×2毫升2×2毫升
阴性对照血清（立即可用）
人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
染色剂：
里沙明绿V
1×2毫升1×2毫升1×2毫升
酶标记的抗人IgG,IgA,IgM（立即可用）
羊抗人IgG,IgA,IgM（多克隆），标记碱性磷酸酶后在蛋白稳定剂中储存
防腐剂:
0.01%甲基异噻唑啉酮
0.01%溴化硝基二垩烷
13毫升13毫升13毫升
浓缩洗液（可稀释至1000毫升）
氯化钠溶液，含吐温20和30mMTris
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
1×33.3毫升1×33.3毫升1×33.3毫升
稀释缓冲液
磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
0.01克/升的溴酚蓝钠盐
2×50毫升2×50毫升2×50毫升
终止液
1.2N氢氧化钠
15毫升15毫升15毫升
底物（立即可用）
对硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
（未开封瓶子中的底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量）
13毫升13毫升13毫升
带有标准曲线和评估表的质量控制文件
（抗体以IU/毫升或U/毫升计量）
111
7.其它检测所需物质
-普通实验室所需的仪器装置
-IgM检测：
另需赛润含对照抗原的类风湿因子Rf－吸附剂（Rf－吸附剂／对照抗原；产品编号T200/20ml）
-分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米-690纳米（例如650纳米）
-37℃温箱
-湿盒
-蒸馏水。
8.储存及稳定性
试剂
储存
稳定性
微孔条
（包被抗原）
开封后放在2-8℃装有干燥剂的密封铝箔袋中。
4星期
阴性对照/标准血清
开封后保存于2-8℃。
有效期内；
24个月
酶标记抗体
立即可用的溶液于2-8℃储存。
避免污染（使用无菌枪尖）。
有效期内
28个月
稀释缓冲液
开启后于2-8℃储存。
有絮状沉淀时丢掉
未开封
24个月
有效期内
36个月
洗涤液
浓缩液开封后保存于2-8℃。
工作液在2-8℃。
工作液在室温下。
盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并丢弃混浊溶液。
有效期内
2星期
1星期
底物
2-8℃储存，避光。
避免污染（使用无菌枪尖）。
当溶液变为黄色时应予以丢弃（水作空白，吸光度大于0.25时）。
有效期内
24个月
终止液
开封后保存于室温下。
有效期内
9.赛润ELISAclassic的检验步骤
9.1注意事项
只有全部使用赛润ELISAclassic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。
尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。
稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润ELISAclassic试剂盒。
针对每一个免疫球蛋白种类都有三个不同的酶标记物浓度：
低、中、高。
酶标记物的分级通过以下的标志在标签上显示：
比如：
IgG+低浓度IgG酶标记物
IgG++中浓度IgG酶标记物
IgG+++高浓度IgG酶标记物
为了保证我们试剂盒的惯常质量，在极少数情况下需要使用特殊酶标记物。
这些试剂盒中的酶标记物会有一个特殊批号并且不用“+”标志。
因此，这些特殊酶标记物是不可以和其它酶标记物交换使用的。
请您每次都注意标签上的标注！
ELISAclassic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。
应在未开封的情况下，保存于2-8℃，并在有效期（见标签说明）内使用。
详细的稳定性和储存资料在“8.储存及稳定性”内将加以详述。
每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。
这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。
在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。
所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，避免试剂受到微生物污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
请从标记处剪开密封袋。
如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。
开始试验前，将所有试剂置于室温。
从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。
为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，，吸头应确保不接触孔壁或喷洒于小孔的外面，注意不要盖错瓶盖或管盖。
试验中试剂的充分混合，对于检测结果的重复性至关重要。
在取用对照品和酶标记物之前应摇动容器使其充分混匀，加样前，使用单向振动器充分混匀稀释过的标本。
小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。
请注意在吸取标本/对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果长，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
只有严格遵守赛润ELISAclassic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。
如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。
洗涤不充分将影响试验结果：
应该小心进行洗涤。
洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。
洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。
避免产生泡沫！
如果使用自动洗板机，注意正确操作。
9.2检验前的准备工作和储存
避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。
明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检测。
依照标准实验室方法采集血清或血浆标本（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）
标本不应加热灭活。
9.2.1样品准备
赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒IgG/IgA
开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）：
V1+V2=1+100加10微升患者待测样品
于1000微升稀释缓冲液
稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混匀。
类风湿因子的干扰的排除
类风湿因子抗体是IgM型的自身抗体，可与IgG免疫复合物结合。
非特异性类风湿因子抗体的存在将导致IgM检测的假阳性结果。
另外，也存在弱结合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。
在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。
因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。
特别类风湿因子Rf—吸附剂（产品编号T200,20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原。
对照抗原同时能与类风湿因子及可识别宿主细胞膜成份的抗体结合。
因此，无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。
在进行以下SERIONELISAclassicIgM检测时，此类RF—吸附剂需作为附加试剂另行购买：
巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒
首先应该使用稀释缓冲液（V2）对类风湿因子吸附剂（Rf-吸附剂/对照抗原）（V1）进行如下稀释：
V1+V2=1+4加200微升Rf-吸附剂/对照抗原
于800微升稀释缓冲液中
然后将患者的待测样品（V1）在此Rf-稀释缓冲液（V3）中进行稀释：
V1+V3=1+100加10微升患者待测样品
于1000微升Rf-稀释缓冲液中
9.2.2样品储存
密封的患者样品可在冰箱中2-8℃保存7天。
≤-20℃可保存更久。
避免样品反复冻融。
已稀释的样品可在2-8℃保存一星期。
9.3试剂盒反应试剂的准备工作
9.3.1微孔条
微孔条排列于板中，并与干燥剂一同封于铝袋内。
未使用的微孔条重新放入铝袋，密封好，确保铝袋的密封性。
7.3.2对照血清/标准血清
对照和标准血清可直接使用，不必进一步稀释
每次试验或是试验体系，无论检测用的微孔板数目多少，均应包括空白对照孔，阴性对照孔和标准血清孔，且标准血清应加两孔。
不要用RF吸附剂处理对照血清！
9.3.3抗人IgG、IgA或IgM抗体，用AP标记（备用）
禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合使用。
同一试剂盒才能达到最佳检测效果。
为了避免酶标记物的污染（请使用时先一次性取出实验所需量置于一容器中，避免反复从试剂瓶中吸取试剂。
）
9.3.4洗液
以1：
30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）至终体积V2。
例如：
浓缩缓冲液（V1）
终体积（V2）
33.3毫升
1000毫升
1.0毫升
30毫升
9.3.5样品的稀释缓冲液（即用）
9.3.6底物（即用）
试验时戴手套以避免污染。
必须以无菌枪尖吸取底物溶液。
9.3.7终止液（即用）
9.4检测程序概要
单纯疱疹病毒1/2型
IgG/IgA/IgM定量
进行IgM检测时先用类风湿因子吸附剂预处理血清
室温孵育15分钟或4℃过夜
样品稀释液（病人血清）
1+100
将稀释的样本，和立即可用的对照血清/标准血清，加
到微量孔内（100微升）
孵育60分钟/37℃
湿盒中
洗涤
加入立即可用的酶标记抗体溶液（100微升）
再孵育30分钟/37℃
湿盒中
洗涤
加入底物溶液（100微升）
再孵育30分钟/37℃
湿盒中
加入终止液（100微升）
在405纳米处读数
9.5检测过程
9.5.1将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张草签。
9.5.2在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。
留一个孔为底物空白使用，例如：
定量的IgG/IgA/IgM
微量孔
孔A1
孔B1
孔C1
孔D1
孔E1
底物空白
阴性对照
标准血清
标准血清
标本1......
9.5.3将样品于湿盒内37℃（±1℃）孵育60分钟（±5分钟）。
9.5.4孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板）：
-吸去或甩去洗液
-每孔内加入300微升洗液
-吸去或甩去洗液
-重付息涤过程3次（共4次！
）
-将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体
9.5.5加入酶标记抗体。
于适当孔内（底物空白除外）加入100微升IgG/IgA/IgM酶标记抗体
9.5.6湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）。
9.5.7孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上）
9.5.8加入底物
于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）
9.5.9湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）。
9.5.10终止反应
每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。
9.5.11读取消光度
以底物空白为空白对照液，60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考波长范围为620纳米-690纳米（例如650纳米）。
10．检测结果评估：
赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒1/2型lgG/IgA/IgM（定量）
10.14PL单点定量法
通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活性，该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。
用赛润ELISAclassic试剂检测，抗体浓度可通过逻辑对数模型（4PL,4个参数）来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。
计算公式如下：
OD=A+
D-A
1+eB（C-lnconc.）
参数A、B、C和D能够反映曲线的精确形状。
1.下端渐进线参数A
2.曲线斜率参数B
3.转折点参数C
4.上端渐进线参数D
标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司（维尔茨堡市）在严格条件下经过多次试验制定的。
使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。
每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。
如有需要也可取得相关的评估软件。
为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。
该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保证抗体浓度测定的正确性。
标准血清不一定是阳性对照，且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。
10.2有效性标准
- 底物空白的OD<0.25
- 阴性对照必须为阴性
- 赛润ELISAclassic定量试验：
标准血清的平均OD值必须在有效范围内，此范围在试剂盒的特异性质量控制认证书上给定（减去底物空白之后！
）
- 赛润ELISAclassic定量试验：
阳性对照的平均OD值必须在有效范围内，此范围在试剂盒的特异性质量控制认证书上给定（减去底物空白之后！
）
-OD值的变化不能超过20%
如果未达到以上标准，试验无效且必须重做。
10.3赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒1型IgG/IgM的定量计算
10.3.1非自动评估
每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表，因而每一个OD值都可得到一个抗体活性值。
标准血清的参考值和有效范围已在评估表格（质量控制证书）中给定。
所有的OD值在求值前必须先减去空白（A1）。
方法1：
定性评估
为确定临界值范围，请将已测得的标准OD平均值与质量控制证书上给出的数据相乘（见专用公式），例如：
OD=0.502xMW（STD）临界值上限
OD=0.352xMW（STD）临界值下限
如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64,那么临界值的范围即为0.225-0.321。
方法2：
利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。
测定间差异（指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异）可用校正系数F与当前测定数值相乘进行校正。
校正系数F的计算公式为：
F==
（标准血清）OD参考值
（标准血清）当前测量OD值
此步骤对于校正当前检测与批次标准曲线之间的偏差是非常必要的。
首先，不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数F进行校正。
1.计算标准血清的两次OD值的平均值，并确认是否在有效范围内。
2.校正系数“F”的计算：
用给定的参考数值除以标准血清消光数的平均值。
F=标准血清的参考消光数值/标准血清消光数的平均值
3.将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数“F”相乘。
4.用经过校正的消光数值在标准曲线“IU/ml或U/ml”坐标轴上确定对应的抗体活性。
赛润ELISAclassic单纯疱疹病毒1/2型IgG/IgA/IgM抗体活性的计算:
阳性结果:
>30U/ml
临界值结果:
20-30U/ml
阴性结果:
<20U/ml
针对临界值结果的样品，应在1-2周后对相应的病人再进行取样，重新检测。
10.3.2利用SERIONeasybase4PL软件/SERION评估软件进行自动检测
输入四个参数和标准血清参考值之后，联机软件就会计算出抗体活性。
如果标准血清的消光值超出有效范围，SERIONeasybase4PL软件就会显示如下信息：
“标准已超出允许范围”和/或“标准差异大于20%”。
SERION评估软件只用英语显示：
„Standardvaluesoutofrangesinfollowinggroups:
Group1-24.Standardvaluediffermorethan20%infollowinggroups:
Group1-24.”（“以下组样品标准值超出范围：
组1-24。
以下组样品标准值差异大于20%：
组1-24。
”）
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