8.影响超临界萃取效果的因素及控制？
答：
1.温度：
影响密度和黏度，控制在临界点附近2.压力：
影响密度和黏度，控制在临界点附近或较高压力3.原料颗粒度：
影响流体渗透和溶解速度，控制在20—80日4.萃取时间：
影响萃取率，稍长些好，太长耗时5.流速：
太高---浪费，太低---萃取效率低6.携带剂：
影响极性，进而影响溶解度，5%左右
第六章浓缩技术
1.蒸发浓缩的分类？
多效蒸发基本概念？
答：
1.常压蒸发浓缩2.真空浓缩3.单效蒸发4.多效蒸发5.间歇蒸发6.连续蒸发
多效蒸发概念：
将二次蒸汽引入下一级作蒸发热源
2.蒸发浓缩设备的分类及主要的蒸发器？
答：
蒸发浓缩设备：
膜式、非膜式
主要的蒸发器：
1.非膜式蒸发器（也称再循环式蒸发器）①中央循环管式蒸发器②悬筐式蒸发器③外加热式蒸发器④列文式蒸发器⑤强制循环蒸发器2.膜式：
①升膜式蒸发器②降膜式蒸发器③升降膜式蒸发器④刮板蒸发器
3.膜式蒸发设备及主要工作原理、特点？
答：
膜式蒸发设备：
①升膜式蒸发器②降膜式蒸发器③升降膜式蒸发器④刮板蒸发器
1升膜式蒸发器：
加热至沸点的原料液被高速上升的二次蒸汽所带动，沿壁面变呈膜状流动，边进行蒸发。
2降膜蒸发器：
加热室顶部加入，经液体分布器均匀分布，在溶液自身重力和下降蒸汽作用下，溶液沿管内壁呈膜状下流，并进行蒸发。
第七章沉淀技术
1.沉淀技术主要有哪些？
答：
分类：
1.盐析法2.有机溶剂沉淀法3.等电点沉淀法4.成盐沉淀法等
2.盐析的原理是什么？
答：
原理：
1.盐离子的水合作用降低了自由水的浓度，摧毁了蛋白质的水化层，疏水区露出使生物分子相互聚集而沉淀。
2.盐离子中和了蛋白质表面的电荷。
3.常用的盐析剂是什么？
具体使用规则？
答：
常用盐析剂：
硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠等
硫酸铵使用规则：
加入方式：
1.直接加入固体粉末2.加入硫酸铵饱和溶液
使用硫酸铵应注意的问题：
1.加50mmol/;；磷酸缓冲溶液，防止变酸。
2.进行硫酸铵盐析要预先进行分级试验，逐级沉淀分离。
3.温度升高蛋白质溶解度降低（高盐），一般控制在4℃左右。
4.PH一般控制在等电点。
5.盐析沉淀产品最后要脱盐。
4.有机溶剂法的原理？
答：
有机溶剂法机理：
1.亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数，溶质分子的水化度降低，溶质分子间静电引力增加，易聚集形成沉淀。
2.亲水性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。
5.常用的有机溶剂沉淀剂？
使用原则？
答：
常用的有机溶剂沉淀剂：
乙醇、丙酮使用原则：
1.低温、少量多次加入，加入时缓慢搅拌（有机溶剂加入水中—发热，控制温度）2.等电点沉淀（控制适宜PH值，注意使同种溶液中的目的物与主要杂质带同种电荷）3.少量盐存在能保护蛋白质（助沉剂：
低浓度的单价盐，如醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等Zn离子、Ca离子等）
6.等电点法沉淀原理？
答：
原理：
两性电解质，在溶液PH处于等电点（PI）时分子表面净电荷为零，导致赖以稳定的双电层及水化膜的消弱或破坏，分子间引力增加，溶解度降低。
调节溶解的PH值，使两性溶质溶解度下降。
析出沉淀的操作。
第八章结晶技术
1.什么是过饱和溶液？
答：
过饱和溶液：
溶液的浓度大于溶质的溶解度（c）过饱和度（S）=过饱和溶液（C）/饱和溶液（C*）
2.结晶的前提条件？
结晶的基本过程？
答：
结晶的前提条件：
溶液达到过饱和结晶的三个过程：
形成过饱和溶液→晶核形成→晶体生长
3.什么是过饱和曲线？
理解稳定区、不稳定区及介稳区的特点。
答：
过饱和曲线：
开始有晶核形成的过饱和浓度与温度的关系曲线
4.如何形成过饱和溶液？
答：
过饱和溶液的形成：
1.将热饱和溶液冷却2.将部分溶剂蒸发3.化学反应结晶4.盐析结晶
5.影响晶体质量的具体因素有哪些？
具体控制方法？
答：
晶体质量是指：
晶体大小、形状（均匀度）、纯度
1.晶体的大小：
取决于晶核形成速度和晶体生长速度之间的对比关系。
主要影响因素包括：
过饱和度、温度、搅拌速度和杂质。
⑴过饱和度：
增加，晶体细小⑵温度：
快速冷却得到细小晶体⑶搅拌：
搅拌越快晶体越细小⑷晶种：
加入大小均匀的晶种可得到均匀的成品晶体2.晶体的形状：
结晶方法、溶剂、杂质、过饱和度、温度、搅拌都影响晶体形状3.晶体的纯度：
夹带母液、灰尘、气泡，通过洗涤、重结晶等方法减轻4.晶体的结块、重结晶：
粒度不齐的晶体易发生结块，温度、湿度也有影响。
重结晶：
晶体用适当的溶剂溶解后再次结晶，提高纯度。
第九章干燥技术
1.常用的干燥方法分类？
答：
常用的干燥方法：
1.按热源分：
①加热干燥②辐射干燥（微波干燥、远红外干燥）2.按水分除去方式分：
①液态水分气化干燥②固态冰升华干燥（真空冷冻干燥）3.按干燥过程压力情况分：
①常压干燥②真空干燥
2.干燥过程分几个阶段及其特点？
答：
干燥—包括恒速干燥和降速干燥两个阶段。
1.恒速干燥阶段：
物料恒温，主要去除游离水分2.降速干燥阶段：
温度逐渐升高，主要去除结合水分
3.喷雾干燥的原理？
及其分类？
答：
喷雾干燥的原理：
通过压力、空气或离心等不同喷雾器作用将物料喷成雾状，与干燥室热空气接触而除去水分，干燥物料通过旋风分离器收集。
分类：
气流式（双流式）、离心式、压力式
第一十章膜分离技术
1.生物分离中常用的膜分离技术主要有哪几种分类？
主要分离原理及分离范围、特点？
答：
膜分离：
微滤、超滤、纳滤、反渗透分离原理：
1.筛分2.溶解分子扩散（膜的极性与分子极性）分离物资的范围：
1.微滤（0.02~10μm）2.超滤（1000~3000000Da当于1—20nm孔径3.纳滤（1nm左右，相当于400—10000Da）4.反渗透（400Da以下）
膜分离的特点：
1.优点（①操作在常温或低温下进行②是物理过程，不发生化学反应③多数不发生相变{能耗低}④选择性较高⑤可连续化操作）2.缺点（①易产生浓差极化，导致分离性能降低②膜易污染③膜寿命有限④仍是初步纯化的方法）
2.什么是纳滤？
具体的分离特点？
答：
纳滤的特点：
1.具有纳米级孔径2.操作压力低，又称低压反渗透3.对离子具有选择透过性4.较好的耐压密性和较强的抗污染能力5.水通量高
3.膜分离的优点和缺点？
答：
膜分离特点：
1优点（①操作在常温或低温下进行②是物理反应，不发生化学反应③多数不发生相变{能耗低}④选择性较高⑤可连续化操作）2.缺点（①易产生浓差极化，导致分离性能降低②膜易污染③膜寿命有限④仍是初步纯化的方法）
4.表征膜性能的参数主要有哪些？
膜的截留相对分子量的的概念及含义？
答：
表征分离膜性能的参数有孔的特征、水通量、截留相对分子质量、拖延率、抗压能力、PH使用范围、温度使用范围、对溶剂的稳定性等。
5.膜按结构有哪些分类？
答：
按膜结构分：
对称膜和不对称膜
6.膜组件有哪几种分类？
其特性及具体应用特点？
答：
1.平板式膜组件2.管式膜组件（内压型管式和外压型管式）3.卷式膜组件4.中空纤维式膜组件
7.什么是浓差极化？
其危害及减轻措施？
答：
当溶剂透过膜时，溶质由于透过较慢或不能透过而滞留在膜上时，膜表面溶质浓度增大，高于主体溶液中溶质浓度，从而引起溶质从膜表面向主体溶液的扩散，这种现象称为浓差极化。
危害：
1.溶质透过量增加2.溶剂通过量减少3.膜污染加剧4.可能会析出沉淀减轻措施：
1.错流过滤2.改善操作条件
8.什么是膜的污染？
膜的清洗有哪些方法？
对于蛋白质、有机物、无机盐等杂质可以采用哪些清洗剂清洗？
答：
膜污染：
膜污染是指被处理物料中的微粒、胶体粒子或溶质大分子由于与膜存在物理、化学相互作用或机械作用而引起的在膜表面或膜孔内吸附、沉积或堵塞，使膜透过性等分离特性发生不可逆变化的现象。
膜污染的清洗：
1.酸、碱2.表面活性剂3.氧化剂4.酶5.有机溶剂
9.膜分离工艺条件的选择有哪些方面？
答：
1.操作压力：
以不形成凝胶层为限2.料液流速：
保证足够压力，减轻浓差极化，防止蛋白质变性失活3.料液浓度：
减轻浓差极化4.操作温度：
减少黏度减轻浓差极化，但防止目的物变性5.PH：
影响膜和目的物的荷电性6.离子强度：
影响目的物形态，影响膜污染
第一十一章层析技术
1.层析的基本概念：
体积、层析柱的分离度、柱效
答：
层析技术又称色谱技术层离技术等，是一组相关技术的总称。
基本原理：
当含有被分离物质的料液流过层析柱时，由于层析剂对各组分的阻滞力不同而使各组分分离开来（不同组分在流动相和固定相分配不同）
1总柱床体积（Vt）：
层析剂经溶胀、装柱、沉降，体积稳定后所占据层柱内的总体积。
2外水体积（Vo）：
柱中层析剂颗粒间隙的液相体积的总和。
3内水体积（Vi）：
溶胀后的层析剂颗粒网孔中的液相体积的总和。
4基质体积（Vg）：
干胶体积，是层析剂基质颗粒骨架所占据的体积。
5洗脱体积（Ve）：
从洗脱开始，某一成分从柱顶部到底部的洗脱液中出现浓度达到最大值（洗脱峰最高点）时的流动相体积。
6死体积（Vm）：
指不被层析柱层析剂滞留的惰性组分，从开始洗脱到柱出口出现浓度最大值时流出的流动相体积。
其值等于外水体积加内水体积。
Vt=Vo十Vi＋Vg
层析的分离度：
分离度（R）又称分辨率，是相邻两个洗脱峰保留时间之差的2倍与色谱峰峰基宽之和的比值，表示式为：
R=2（te2﹣te1）/（W1+W2）{te2和te1—洗脱峰2和峰1的保留时间}{W1和W2—洗脱峰1和峰2的峰宽}1.R<1时，两峰部分重叠；2.R=1时，两峰有98%的分离；３.Ｒ=１.５时，两峰分离程度可达９９.７％．因此，一般用Ｒ=１.５作为两种组分完全分离的标志
柱效：
柱效是表达层析柱性能的重要参数，可用理论塔板数Ｎ和理论塔板高度Ｈ来衡量。
N=5.54（te/W1/2）2 ｈ=Ｌ/Ｎ 理论塔板数越大或理论塔高度越小，说明层析柱分离效率越高。
2.什么是吸附层析技术？
答：
基本原理：
以吸附剂为固定相，根据待分离组分与吸附剂之间的物理或化学吸附力差别而达到分离目的的层析技术。
3.常见的吸附层析剂有哪些？
具体应用特点？
答：
吸附剂：
１.无机吸附剂：
硅胶、氧化铝、羟基磷灰石 ２.有机吸附剂：
活性炭 ３.大网格聚合物吸附剂（大孔树脂）
1硅胶特点：
１.作吸附层析剂，还可作为其他层析剂的基质 ２.在碱性水溶液中不稳定，应用的常规ＰＨ为２―８ ３.活性硅胶为多乳的，吸附作用与本身含水量有关 ４.硅胶的活化、再生 ５.可分离氨基酸衍生物、甾体激素、皂苷类、类脂及色素等
2氧化铝特点：
１.常用的亲水性吸附剂，较高吸附容量，分离效果好，尤其适用于亲脂性成分的分离 ２.吸附活性与含水量相关
3羟基磷灰石特点：
吸附容量高，稳定性好，可制备及纯化蛋白质、酶、核酸、病毒等
4活性炭特点：
１.非极性吸附剂 ２.吸附时（从极性溶剂中吸附非极性溶质）３.洗脱时（用非极性溶剂洗脱）４.应用范围（脱色、去有机杂质、热源等）５.再生：
（水洗→５％Ｎａｏｈ洗→酸洗中和→水洗→１６０℃加热干燥４－５ｈ）
5大网格聚合物吸附剂特点：
孔隙大小、骨架结构、极性可按需要选取 优点：
选择性好、机械强度高、可反复使用 范围：
使用范围广，特别适合有机物分离
4.凝胶层析技术的基本原理是什么？
答：
凝胶层析的基本原理：
根据分子大小进行分离纯化的方法（不同大小的分子流过多孔凝胶→分子大的组分先流出，分子小的组分后流出→各组分便按分子从大道小的顺序依次流出）
5.常用的凝胶层析有哪些种类？
SephadexG系列型号与吸水量关系？
答：
常用凝胶层析剂：
葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶，以及各凝胶的改性物
凝胶型号与吸水量的关系：
吸水量与数字关系：
如Ｇ２５，表示吸水量为１ｇ干胶吸水２.５ｇ
6.凝胶层析操作流程？
层析操作条件选择的具体要求？
答：
１.层析剂选择和预处理 ２.装柱 ３.平衡 ４.上样 ５.洗脱 ６.检测 ７.收集 ８.层析剂再生和保存
1.凝胶选择：
①根据样品确定分离范围，从而选择合适型号的凝胶――应将大分子完全排阻而小分子完全渗透 ②适当的颗粒度：
⑴颗粒小，分辨率高，但相对流速慢，有时会造成扩散现象严重 ⑵颗粒大，流速快，分辨率较低但条件得当也可以得到满意的结果
2.凝胶的处理：
①估计用量：
首先要根据选择的层析柱估计算出凝胶的用量。
②溶胀：
在１０倍以上的水中（或洗脱液）充分溶胀倾泻法去悬浮物小颗粒减压排气
3.层析柱的选择：
层析柱的直径和长度比一般在１:
２５－１:
１００之间
4.装柱：
①将柱子洗涤干净 ②安装柱并调垂直 ③关闭层析柱出水口，并加入少量洗脱液检漏及排气泡 ④将处理好的填料缓慢装入柱中，同时打开出水口，控制适当流速 ⑤使填料等均匀沉降，并不断加入填料溶液 ⑥使柱中填料表面平坦并在表面上留有２－３ｃｍ高的缓冲液，同时关闭出水口
5.平衡：
柱子装好后，要用所需洗脱液（有一定的ＰＨ和离子强度）平衡柱子。
用恒流泵在恒定压力下走柱子（平衡与洗脱时的压力尽可能保持相同）。
平衡液体积一般为３－５倍柱床体积，以保证平衡后柱床体积稳定及基质充分平衡。
如果需要，可用兰色葡聚糖２０００在恒压下走柱，如色带均匀下降，则说明柱子是均匀的。
6.加样：
１.加样体积应低于５％的床体积。
２.加样时应缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲剂基质，以保持基质表面
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