流式常用荧光染料.docx
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流式常用荧光染料
如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
发射光波长，如：
氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP（叶绿素蛋白）
ECD（藻红蛋白-得克萨斯红）等。
激发光和发射光波长，如下：
激发光波长（nm）
发射光峰值（nm）
FITC
488
525（绿）
PE
488
575（橙红）
PI
488
630（橙红）
ECD
488
610（红）
CY5
488
675（深红）
PreCP
488
675（深红）
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
名 称
Ex波长（nm）
Em波长（nm）
备 注
激光器
Hoechst33342
355
465
DNA染色
核酸标记
351nm
紫外激光器
Hoechst33258
365
465
DAPI
372
456
Indo-1
350
405
细胞内钙离子标记
FITC
490
520
标记抗体
488nm
氩
离
子
激
光
器
R_PE
480
578
PE_CY5
480
670
PE_CY5.5
480
695
PerCP
490
675
AlexaFluor488
494
517
PE_TexasRed
480
613
Rhodamine123
500
540
线粒体标记
Fluo-3
506
526
细胞内钙离子标记
DiOC6（3）
480
501
内质网标记
YOYO-1
490
510
DNA染色
核酸标记
PropidiumIodide
530
615
AcridineOrange
490
640
APC
650
660
标记抗体
633nm
氦氖激光器
AlexaFluor647
650
668
CY5
650
667
流式•细胞仪交流论坛：
荧光染料谱
染料名称
Excitation（nm）
Emission（nm）
分子量
备注信息
Reactiveandconjugatedprobes
Hydroxycoumarin
325
386
331
Succinimidylester
Aminocoumarin
350
445
330
Succinimidylester
Methoxycoumarin
360
410
317
Succinimidylester
CascadeBlue
（375）;401
423
596
Hydrazide
PacificBlue
403
455
406
Maleimide
PacificOrange
403
551
Luciferyellow
425
528
NBD
466
539
294
NBD-X
R-Phycoerythrin（PE）
480;565
578
240k
PE-Cy5conjugates
480;565;650
670
akaCychrome,R670,Tri-Color,QuantumRed
PE-Cy7conjugates
480;565;743
767
Red613
480;565
613
PE-TexasRed
PerCP
490
675
Peridininchlorphyllprotein
TruRed
490,675
695
PerCP-Cy5.5conjugate
FluorX
494
520
587
GEHealthcare
Fluorescein
495
519
389
FITC;pHsensitive
BODIPY-FL
503
512
TRITC
547
572
444
TRITC
X-Rhodamine
570
576
548
XRITC
LissamineRhodamineB
570
590
TexasRed
589
615
625
Sulfonylchloride
Allophycocyanin（APC）
650
660
104k
APC-Cy7conjugates
650;755
767
PharRed
AlexaFluor系列荧光染料
AlexaFluor350
343
442
410
AlexaFluor405
401
421
1028
AlexaFluor430
434
540
702
AlexaFluor488
499
519
643
QY0.92
AlexaFluor500
503
525
700
AlexaFluor514
517
542
714
AlexaFluor532
530
555
724
QY0.61
AlexaFluor546
561
572
1079
QY0.79
AlexaFluor555
553
568
1250
QY0.1
AlexaFluor568
579
603
792
QY0.69
AlexaFluor594
591
618
820
QY0.66
AlexaFluor610
610
629
1285
AlexaFluor633
632
648
1200
AlexaFluor647
652
668
1300
QY0.33
AlexaFluor660
663
691
1100
AlexaFluor680
680
702
1150
AlexaFluor700
696
719
1400
AlexaFluor750
752
776
1300
AlexaFluor790
782
804
1750
Cy系列荧光染料
Cy2
489
506
714
QY0.12
Cy3
（512）;550
570;（615）
767
QY0.15
Cy3B
558
572;（620）
658
QY0.67
Cy3.5
581
594;（640）
1102
QY0.15
Cy5
（625）;650
670
792
QY0.28
Cy5.5
675
694
1128
QY0.23
Cy7
743
767
818
QY0.28
核酸相关探针染料
Hoechst33342
343
483
616
AT-selective
DAPI
345
455
AT-selective
Hoechst33258
345
478
624
AT-selective
SYTOXBlue
431
480
~400
DNA
ChromomycinA3
445
575
CG-selective
Mithramycin
445
575
YOYO-1
491
509
1271
EthidiumBromide
493
620
394
AcridineOrange
503
530/640
DNA/RNA
SYTOXGreen
504
523
~600
DNA
TOTO-1,TO-PRO-1
509
533
Vitalstain,TOTO:
CyanineDimer
TO-PRO:
CyanineMonomer
ThiazoleOrange
510
530
PropidiumIodide（PI）
536
617
668.4
LDS751
543;590
712;607
472
DNA（543ex/712em）,RNA（590ex/607em）
7-AAD
546
647
7-aminoactinomycinD,CG-selective
SYTOXOrange
547
570
~500
DNA
TOTO-3,TO-PRO-3
642
661
DRAQ5
647
681,697
413
usableexcitationdownto488
细胞功能探针
Indo-1
361/330
490/405
1010
AMester.Low/HighCa++,
Fluo-3
506
526
855
AMester.pH>6
DCFH
505
535
529
2'7'Dichorodihydrofluorescein,oxidizedform
DHR
505
534
346
Dihydrorhodamine123,oxidizedform,
lightcatalyzesoxidation
SNARF
548/579
587/635
pH6/9
荧光蛋白
QY
BR
PS
Y66H
360
442
Y66F
360
508
EBFP
380
440
0.18
0.27
monomer
EBFP2
383
448
20
monomer
Azurite
383
447
15
monomer
GFPuv
385
508
T-Sapphire
399
511
0.60
26
25
weakdimer
Cerulean
433
475
0.62
27
36
weakdimer
mCFP
433
475
0.40
13
64
monomer
ECFP
434
477
0.15
3
CyPet
435
477
0.51
18
59
weakdimer
Y66W
436
485
mKeima-Red
440
620
0.24
3
monomer
TagCFP
458
480
29
dimer
AmCyan1
458
489
0.75
29
tetramer
mTFP1
462
492
54
dimer
S65A
471
504
MidoriishiCyan
472
495
0.9
25
dimer
WildTypeGFP
396,475
508
26k
0.77
S65C
479
507
TurboGFP
482
502
26k
0.53
37
dimer
TagGFP
482
505
34
monomer
S65L
484
510
Emerald
487
509
0.68
39
0.69
weakdimer;（Invitrogen）
S65T
488
511
EGFP
488
507
26k
0.60
34
174
weakdimer
AzamiGreen
492
505
0.74
41
monomer
ZsGreen1
493
505
105k
0.91
40
tetramer
TagYFP
508
524
47
monomer
EYFP
514
527
26k
0.61
51
60
weakdimer
Topaz
514
527
57
monomer
Venus
515
528
0.57
53
15
weakdimer
mCitrine
516
529
0.76
59
49
monomer
YPet
517
530
0.77
80
49
weakdimer
TurboYFP
525
538
26k
0.53
1.65
dimer
ZsYellow1
529
539
0.65
13
tetramer
KusabiraOrange
548
559
0.60
31
monomer
mOrange
548
562
0.69
49
9
monomer
mKO
548
559
0.60
31
122
monomer
TurboRFP
553
574
26k
0.67
62
dimer
tdTomato
554
581
0.69
95
98
tandemdimer
TagRFP
555
584
50
monomer
DsRedmonomer
556
586
~28k
0.1
3.5
16
monomer
DsRed2（"RFP"）
563
582
~110k
0.55
24
mStrawberry
574
596
0.29
26
15
monomer
TurboFP602
574
602
26k
0.35
26
dimer
AsRed2
576
592
~110k
0.21
13
tetramer
mRFP1
584
607
~30k
0.25
monomer
J-Red
584
610
0.20
8.8
13
dimer
mCherry
587
610
0.22
16
96
monomer
HcRed1
588
618
~52k
0.03
0.6
dimer
Katusha
588
635
23
dimer
mKate（TagFP635）
588
635
15
monomer
TurboFP635
588
635
26k
0.34
22
dimer
mPlum
590
649
0.10
4.1
53
mRaspberry
598
625
0.15
13
monomer;fasterphotobleachthanmPlum
其他探针
Monochlorobimane
380
461
226
Glutathioneprobe
Calcein
496
517
623
pH>5
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