640020 基础标准品抗FIIa效价确认方案0000.docx

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640020基础标准品抗FIIa效价确认方案0000

文件使用类型：

该方案制定参与人：

项目

人员

姓名/职位

日期

签名

起草人

刘家全/质量控制部

生测I组组长

审核人

钱欣/质量保证部经理

批准人

李坦/质量总监

该验证方案分发到以下部门办公室供指导验证，验证完成后归还QA办公室：

序号

部门名称

部门办公室房间编号

部门负责人

1

质量控制部

0521

钱欣

该验证方案执行部门及执行人：

质量控制部

刘家全

会审批准签名表

姓名

部门/职务

签名

日期

许万玲

质量控制部

生测Ⅰ组检验员

钱欣

质量保证部经理

李坦

质量总监

注：

参加会审的人员：

1.海普瑞公司验证委员会的成员；

2.与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。

目录

1.目的4

2.范围4

3.参考4

4.职责4

5.附件5

6.测试规程5

附件1：

试剂检查确认记录12

附件2：

仪器、用具检查确认记录13

附件3：

美国肝素钠标准品配制原始记录14

附件4：

基础标准品抗FⅡa效价检测原始记录15

附件5：

基础标准品FⅡa效价检测结果计算原始记录19

附件6：

验证结果计算原始记录20

1.目的

1.1.海普瑞公司在检测肝素钠的抗FIIa效价时，所用工作标准品是用公司自产的、高纯度基础标准品配制。

基础标准品抗FIIa效价的准确性直接影响到所配制工作标准品的浓度，因此必须用药典参考标准品标定基础标准品的实际效价。

1.2.基础标准品的抗FIIa效价，用药典参考标准品检测其实际效价，以检测的实际效价作为配制工作标准品是的准确效价，进行效价量值的传递。

1.3.本文为基础标准品抗FIIa效价的检测提供了可执行的依据。

2.范围

本方法适用于基础标准品抗FIIa效价的检测。

3.参考

3.1.《美国药典》（USP27）P905肝素钠专论

3.2.SOP51-0011《电热恒温水箱使用标准操作规程》

3.3.SOP51-1015《肝素钠抗FIIa标准品配制标准操作规程》

3.4.SOP54-0018《肝素钠抗FIIa效价检测预实验标准操作规程》

3.5.SOP54-0010《肝素钠抗FIIa效价检测标准操作规程》

3.6.SOP51-1002《一般溶液配制标准操作规程》

3.7.SOP60-0002《公司验证制度》

4.职责

4.1.质量保证部：

4.1.1.负责审核验证方案；

4.1.2.负责审核验证结果；

4.1.3.负责组织验证中的偏差调查。

4.2.质量控制部：

4.2.1.负责起草验证方案；

4.2.2.在执行方案时提供检测数据；

4.2.3.负责提供相关的记录、数据、操作程序和相关资料；

4.2.4.负责完成验证报告；

4.2.5.配合进行验证结果准确性的调查。

5.附件

5.1.附件1：

R-64-0020-01《试剂检查确认记录》

5.2.附件2：

R-64-0020-02《仪器、用具检查确认记录》

5.3.附件3：

R-64-0020-03《美国肝素钠标准品配制记录》

5.4.附件4：

R-64-0020-04《基础标准品抗FIIa效价检测原始记录》

5.5.附件5：

R-64-0020-05《基础标准品抗FIIa效价检测结果计算原始记录》

5.6.附件6：

R-64-0020-06《验证结果计算原始记录》

6.测试规程

6.1.总则

6.1.1.验证过程严格按照本方案规定的内容和项目进行，所有相关信息记录在附件设定的表格中。

表格如果不够可以复印。

6.1.2.任何与本方案不一致的地方应充分调查与记录。

只有不一致的数据被证明不会影响本方案的执行才可以被认可接受；质量保证部门决定例外数据是否可以接受。

6.1.3.报告中所有的记录都要有记录人（操作人）、记录日期（操作日期）、审核人（复核人）、审核日期（复核日期）。

6.2.验证使用的试剂及溶液

6.2.1.方案中使用的试剂是分析纯的氯化钠，分析纯的氯化钙，验证用水为本公司自产。

6.2.2.方案中使用的绵羊血浆已经通过预实验检测，其血浆不凝固的最小标准品浓度应在1~3USPU/ml之间。

6.2.3.记录试剂名称、规格、数量、生产或分装商以及试剂批号等内容，检查结果记录在附件1中。

6.2.4.方案中使用的各种溶液由实验人员配制，配制按照SOP51-1002《一般溶液配制标准操作规程》操作。

6.3.验证用器具、仪器

6.3.1.检查位于质控部生测1组恒温水浴箱的型号、生产厂、校验日期、校验有效期。

6.3.2.检查质控部生测1组用的天平、分度吸管、可调式微量移液器等实验器具记录其规格、鉴别号、校验日期、校验有效期。

6.3.3.检查结果记录在附件2。

6.3.4.可接受标准

6.3.4.1.在验证中使用的恒温水浴箱的温度，必须经过校验，并在有效期内。

6.3.4.2.验证中使用的所有天平、分度吸管、可调式微量移液器等必须经过校验，并在有效期内。

6.4.待验证的方法

6.4.1.8.0USPU/ml药典参考标准品的配制

6.4.1.1.取一支批号为K-5的药典参考标准品，将标准品安瓿用砂轮沿颈部切割一圈，用酒精棉球擦颈部，待酒精挥发后，掰断安瓿颈部，用一次性胶头滴管将安瓿内的标准品全部取出，加入50ml比色管中，称重并去皮。

6.4.1.2.需加注射用水质量的计算：

W=（G×365÷8）－G

式中：

W：

需加注射用水质量g；

G：

美国标准品质量g；

365：

美国标准品浓度USPU/ml。

6.4.1.3.用滴管加入质量为W的新鲜放冷的注射用水到50ml比色管中，盖紧瓶塞轻摇混合，待全部溶解混匀后，按1ml/支的装量，分装于2ml的洁净安瓿中，火焰封口；放入冰箱内2~8℃下保存3个月，使用时放至室温。

6.4.1.4.配制/分装记录填写附件3。

6.4.2.验证方法：

6.4.2.1.精密称取三个基础标准品（30200300），称样范围在30-50mg，用25ml分度吸管移取0.9%氯化钠溶液将样品溶解并配制成mg/ml的样品溶液A；自然溶解半小时。

6.4.2.2.用100-1000μl可调试微量移液器吸取0.5ml样品溶液A，根据估计效价计算出将样品溶液A稀释成8.0USPU/ml样品溶液B，应加入0.9%氯化钠溶液的体积：

V盐水=（0.5×P估÷8）－0.5

其中：

V盐水：

应加入0.9%氯化钠溶液体积，ml；

P估：

样品的估计效价，USPU/mg。

6.4.2.3.根据预实验将8.0USPU/ml的样品溶液B和K-5标准品用0.9%氯化钠溶液稀释至使绵羊血浆不凝固的最小浓度C。

6.4.2.4.取10ml试管若干支，分别加入同一浓度、不同体积8.0USPU/ml的标准品和样品溶液B，相邻两管中的体积以5%的级差递减，最大体积为0.8ml，不足0.8ml的用0.9%氯化钠溶液将各管最终体积补足到0.8ml。

剂量见表1：

加入肝素钠K-5标准品或供试液的体积（ml）

0.57

0.60

0.63

0.66

0.69

0.72

0.76

0.80

补足到0.8ml需要加入0.9%氯化钠溶液的体积（ml）

0.23

0.20

0.17

0.14

0.11

0.08

0.04

0.00

6.4.2.5.用100-1000μl可调试微量移液器向各管中加入绵羊血浆1.0ml，用20-200μl可调试微量移液器加入0.1%氯化钙溶液0.2ml，立即混匀，置于37℃恒温水浴孵育60分钟。

6.4.2.6.再加入绵羊血浆后必须20分钟内放入恒温水箱中，延迟放入会影响实验结果。

6.4.2.7.孵育结束后，取出试管，观察各管凝结程度：

凝固程度分为5级，即：

―完全不凝固为0；

―完全凝固为1；

―在0与1之间再分为0.25、0.5及0.75。

各级凝固程度描述如下：

0.75：

内容物形成的凝块约占整个内容物的3/4，即0.75；

0.5：

内容物形成的凝块约占整个内容物的2/4，即0.5；

0.25：

内容物形成的凝块约占整个内容物的1/4，即0.25。

注：

当同一实验中的工作标准品或供试品的结果判定发现，内容物的凝固程度大于0.5和小于0.5的管数少于两管时，则实验不成立，应调整工作标准品或供试品的浓度，重新实验。

6.4.2.8.结果计算

―分别计算标准品和供试品的1、2、3管，2、3、4管，3、4、5管，4、5、6管等三个连续管中的肝素钠体积对数值的平均数及其相对应的三个连续管凝固度的平均数。

―若其中连续三个试管凝固度的平均级别是0.5时，则中间所对应的肝素体积对数值XS或XU。

―若任何三个连续管的凝固度平均数都不为0.5，按下列公式计算：

XS=XSi＋〔（ySi－0.5）（XSi＋1－XSi）/（ySi－ySi＋1）〕

XU=XUi＋〔（yUi－0.5）（XUi＋1－XUi）/（yUi－yUi＋1）〕

式中：

ySi：

连续三个试管的工作标准品凝固度的平均值为：

小于并接近0.5的凝固度平均值。

XSi：

与ySi相对应的连续三个试管中所加工作标准品的体积对数平均值。

yUi：

连续三个试管中供试品凝固度的平均值为：

小于并接近0.5的凝固度平均值。

XUi：

与yUi相对应的连续三个试管中所加的供试品的体积对数平均值。

ySi＋1：

连续三个试管中工作标准品凝固度平均值为：

大于并接近0.5的凝固度平均值。

XSi＋1：

与ySi+1相对应的连续三个试管中所加工作标准品的体积对数平均值。

yUi＋1：

连续三个试管中供试品凝固度的平均值为：

大于并接近0.5的凝固度平均值。

XUi＋1：

与yUi+1相对应的连续三个试管中所加供试品的体积对数平均值。

供试品效价及可信距的计算：

供试品的对数效价M=XS－XU＋㏒R

R=

式中：

VS：

1ml工作标准品所含有的肝素钠活性单位，USPU；

VU：

1ml供试品中所含有的肝素钠质量，mg。

―

如果任意两次实验间的M值之差大于0.05，继续增加实验次数，按下列公式计算供试品对数效价M的可信距（L），一般不超过0.2即可。

L=

S=

式中：

S：

对数效价M的标准差

k：

与对数效价M相对应的实验次数

N：

M值的个数

n：

自由度，n=N－1

t：

《美国药典》生物检定方法设计和数据统计分析表9中与

自由度n对应的数值，参见表3

表3：

n

t

n

t

1

12.706

18

2.101

2

4.303

19

2.093

3

3.182

20

2.086

4

2.776

21

2.080

5

2.571

22

2.074

6

2.447

23

2.069

7

2.365

24

2.064

8

2.306

25

2.060

9

2.262

26

2.056

10

2.228

27

2.052

11

2.201

28

2.048

12

2.179

29

2.045

13

2.160

30

2.042

14

2.145

40

2.021

15

2.131

60

2.000

16

2.120

120

1.980

17

2.110

∞

1.960

样品对数效价可信限范围按下式计算：

样品对数效价可信限=

±（L/2）

样品效价按下式计算：

PT=anti㏒

6.4.2.9.由两个检验员分别称取三个平行样品按上述方法每个样品检测三次。

6.4.2.10.计算基础标准品效价的平均值、相对标准偏差：

基础标准品效价的平均值：

（P1+P2+P3+P4+P5+P6）/6

结果的标准偏差S=

=

结果的相对标准偏差RSD=（S/

）×100%

6.4.2.11.可接受标准：

两人的6个检测结果的相对标准偏差不大于2%。

6.4.2.12.基础标准品实际检测效价P=（P1+P2+P3+P4+P5+P6）/6。

6.5.验证报告结论

按照验证方案的要求，作出验证结论，结论应准确、有效。

6.6.验证报告的评价

6.6.1.质量控制部负责填写验证现场采集的各项验证数据并整理出报告。

6.6.2.质量保证部负责对验证报告进行综合评价，内容包括以下方面：

6.6.2.1.验证试验是否有遗漏；

6.6.2.2.验证实施过程是否对批准的方案有修改；

6.6.2.3.如果有修改，是否经过批准；

6.6.2.4.验证记录是否完整；

6.6.2.5.是否需要进一步补充试验。

附件1：

R-64-0020-01

试剂检查确认记录

名称

批号

来源

有效期限

确认结论

可接受标准：

在验证中使用到的所有试剂经过检查确认，均在有效期内。

检查结果：

是否符合可接受标准□是□否

检查人/日期：

审核人/日期：

附件2：

R-64-0020-02

仪器、用具检查确认记录

名称

数量

规格型号或编号

校验日期

校验

失效期

检查确认结果

确认

结论

可接受标准

a）在验证中使用到的所有仪器经过校验和检查确认，在有效期内。

b）在验证中使用的所有用具经过校验和检查确认，在有效期内。

检查结果：

是否符合可接受标准□是□否

检查人/日期：

审核人/日期

附件3：

R-64-0020-03

美国肝素钠标准品配制原始记录

配制依据

SOP51-1015《肝素钠抗FⅡa标准品配制标准操作规程》

配制日期：

年月日

有效期：

.

失效日期：

年月日

肝素钠标准品批号：

.

肝素钠标准品产地：

.

注射用水批号：

__________________

称量50ml比色管后，去皮归零点。

将肝素钠标准品移入50ml比色管中，称重，记录其质量：

G=__________g

向比色管中加入新鲜放冷的注射用水的质量：

W=（G×365÷8）－G

=____________

=___________

加塞轻摇均匀

按1ml/支的分装量，分别装入2ml安瓿瓶中

分装日期：

.

分装数量：

_________________支

分装后批号：

.

分装人：

.

贴上标签，放入冰箱2~8℃下保存。

存放地点：

.

配制人：

复核人：

附件4：

R-64-0020-04

基础标准品抗FⅡa效价检测原始记录

品名

批号

取样日期

检验日期

1.稀释标准品：

K-5标准品批号：

；

0.9%氯化钠溶液失效日期：

；

K-5标准品吸取量：

ml；

0.9%氯化钠溶液加入量：

ml；

K-5标准品稀释后的浓度：

USPU/ml

2.制备供试液：

天平设备编号：

。

样品

编号

基础标准品重量（mg）

0.9％氯化钠溶液体积（ml）

1

2

3

盐水体积按照V盐水=（0.5×P/8）－0.5计算。

样品

编号

基础标准品估计效价

（USPU/mg）

供试液体积

（ml）

0.9％氯化钠溶液

体积（ml）

1

2

3

供试液稀释至预实验确定的浓度C。

样品

编号

8USPU/ml供试液

体积（ml）

0.9％氯化钠溶液

体积（ml）

稀释后浓度

（USPU/ml）

1

2

3

3.实验操作：

试剂名称

加

编号量

1标准品∕供试液体积ml

20.9％氯化钠溶液体积ml

1

2

3

4

5

6

7

8

1

S

2

3

T1

4

T2

5

T3

绵羊血浆批号：

；

绵羊血浆每管加入量：

ml

1%氯化钙溶液失效日期：

；

1%氯化钙溶液每管加入量：

ml

电热恒温水箱设备编号：

；

试管放入时水温：

℃；放入时间：

。

试管取出时水温：

℃；取出时间：

。

4.

凝固状态判断：

项目

现

编号象

凝固状态

1

2

3

4

5

6

7

8

1

S

2

3

T1

4

T2

5

T3

5.结果选择与计算：

项目

数据

编号整理

凝固度平均值≤0.5

凝固度平均值≥0.5

1

S

凝固度（y）

体积对数（x）

3

凝固度（y）

体积对数（x）

项目

数据

编号整理

凝固度平均值≤0.5

凝固度平均值≥0.5

5

T1

凝固度（y）

体积对数（x）

7

T2

凝固度（y）

体积对数（x）

9

T3

凝固度（y）

体积对数（x）

标准品：

S1：

xSi：

ySi：

xSi＋1：

ySi＋1：

S2：

xSi：

ySi：

xSi＋1：

ySi＋1：

样品1.xui：

yui：

xui＋1：

yui＋1：

样品2.xui：

yui：

xui＋1：

yui＋1：

样品3.xui：

yui：

xui＋1：

yui＋1：

样品1对数效价M1=

样品2对数效价M2=

样品3对数效价M3=

检验人：

复核人：

附件5：

R-64-0020-05

基础标准品FⅡa效价检测结果计算原始记录

品名

批号

取样日期

检验日期

1.检验结果：

S=

=

=

L=2S×t/

=；

=；

2.供试品对数效价的可信限范围

±L∕2=；

=；

3.样品效价PT=anti㏒

==。

检验人：

审核人：

附件6：

R-64-0020-06

验证结果计算原始记录

1．两个检验员检测结果：

2．基础标准品效价的平均值

=（P1+P2+P3+P4+P5+P6）/6

=

=

3．结果的标准偏差S=

=

=

=

4.结果的相对标准偏差RSD=（S/

）×100%

=

=

5.基础标准品实际检测效价P=

=

计算人：

复核人：